简介：摘要目的探讨通腑泄热法中药通过线粒体DNA(mtDNA)/Toll样受体9(TLR9)/微小RNA(miR)-223通路抑制肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的作用。方法随机数字法将80只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠分成通路正常组(NP组)、通路激活组(AP组)、通路正常中药组(NPT组)、通路激活中药组(APT组)4组，"通路激活"指在大鼠HIRI建模麻醉后采用TLR9激活剂50 μg/只腹腔注射激活mtDNA/TLR9/miR-223通路，"通路正常"则腹腔注射对应剂量生理盐水；"中药"指手术处理前3 d以通腑泄热法中药按照5 ml/只/次剂量，每日2次给大鼠灌胃。每组20只，均建立肝脏HIRI模型，以分组要求施加不同干预后分别于再灌注后24、48 h两个时间点采集血清及肝组织标本，并进行相关生化指标、病理、蛋白质印迹法(Western blot)及聚合酶链反应(PCR)检测。采用多因素方差分析。结果"通路激活"及"中药干预"均是术后血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)变化的影响因素。通路激活可促进术后血清中ALT、AST、LDH升高，AP组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH高于NP组[ALT：(962.34±42.35) U/L比(747.33±40.04) U/L，F＝11.446，P<0.05；AST：(1 421.58±93.25) U/L比(1 041.87±48.60) U/L，F＝5.893，P<0.05；LDH：(2 312.99±95.77) U/L比(1 974.23±75.80) U/L，F＝5.019，P<0.05]；而中药干预可抑制术后血清中ALT、AST、LDH升高，NPT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT：(561.31±40.49) U/L比(747.33±40.04) U/L，F＝688.807，P<0.05；AST：(792.38±44.03) U/L比(1 041.87±48.60) U/L，F＝838.255，P<0.05；LDH：(1 702.75±62.32) U/L比(1 974.23±75.80) U/L，F＝514.608，P<0.05]；通路激活及中药干预的交互作用呈现出抑制作用，APT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT：(437.88±47.88) U/L比(747.33±40.04) U/L，F＝156.296，P<0.05；AST：(510.02±55.54) U/L比(1 041.87±48.60) U/L，F＝272.576，P<0.05；LDH：(1 473.69±71.94) U/L比(1 974.23±75.80) U/L，F＝134.480，P<0.05]；且术后48 h，NP组、AP组、NPT组、APT组4组大鼠血清ALT、AST、LDH均较术后24 h降低。术后24 h 4组大鼠肝细胞病理均呈现出不同程度坏死，以AP组坏死最严重，且术后48 h各组肝细胞坏死程度较术后24 h轻。术后24 h，各组大鼠肝组织中核因子-κB(NF-κB)及ICAM1的表达以NP组表达最高，APT组最低，而术后48 h各组NF-κB及ICAM1表达趋势同术后24 h，且各自较术后24 h表达有所下降。术后24 h，相对于NP组，AP组及APT组中miR-223、TLR9的表达明显升高，NPT组的表达明显降低；而NPT组、AP组及APT组中mtDNA的表达均明显降低，以APT组降低最显著，术后48 h各组三者表达量均较术后24 h降低，以APT组降低最显著。结论通腑泻热法中药可以通过mtDNA/TLR9/miR-223通路改善肝脏缺血再灌注损伤。

简介：摘要目的探讨超声介导载药微泡靶向药物释放(UTMD)技术联合藤黄酸(GA)对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人结肠癌HCT116细胞，用不同浓度(分别为0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 μg/ml)的藤黄酸加入培养基培养细胞，筛选合适的藤黄酸浓度(2.0 μg/ml)，将细胞分为6组，分别为GA+微泡+超声组、GA+超声组、GA+微泡组、单用GA组、单用超声辐照组、对照组，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪分别检测各组细胞的生长抑制率和凋亡率及细胞周期分布，组间分析采用独立样本t检验。结果UTMD联合GA对人结肠癌HCT116细胞的生长抑制及促凋亡作用显著大于对照组与单用GA组，当处理时间为24、36、48 h时，GA+微泡+超声组的生长抑制率高于对照组(0.755±0.017比0.007±0.001、0.892±0.010比0.008±0.001、0.934±0.003比0.011±0.001，t＝60.489、120.670、358.247，P<0.05)、单用GA组(0.755±0.017比0.357±0.012、0.892±0.010比0.462±0.024、0.934±0.003比0.638±0.004，t＝26.643、23.719、89.067，P<0.05)，差异均有统计学意义。GA+微泡+超声组的凋亡率和处于G2/M期的细胞比例高于对照组[凋亡率：(32.21±1.30)%比(3.33±0.09)%，G2/M细胞比例：(56.97±0.31)%比(18.25±0.76)%，t＝31.217、66.391，P<0.05]、单用GA组[凋亡率：(32.21±1.30)%比(24.19±1.30)%，G2/M细胞比例：(56.97±0.31)%比(28.43±0.40)%，t＝6.155、80.321，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论UTMD可明显提升藤黄酸对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制及促凋亡作用。

简介：摘要目的探讨超声介导载药微泡靶向药物释放(UTMD)技术联合藤黄酸(GA)治疗兔结肠癌皮下移植瘤疗效。方法将兔结肠癌VX2细胞株植入兔右侧大腿构建兔结肠癌皮下移植瘤模型，通过干预方式的不同将24只荷瘤兔随机分为对照组、单用GA组、单用超声辐照组、GA+超声辐照组、GA+微泡组、GA+微泡+超声辐照组6组，每组4只，施加干预后取出瘤块，测量肿瘤体积与重量并行病理检测及透射电子显微镜检查，比较各组抑瘤疗效，两组间样本均数比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果干预后超声辐照组肿瘤体积与重量略低于对照组[(4.30±0.32) cm3比(4.54±0.73) cm3、(4.49±0.32) g比(4.74±0.72) g，t＝0.597、0.613，P>0.05)]，抑瘤率为5.27%；单用GA组移植瘤体积及重量低于对照组[(3.50±0.40) cm3比(4.54±0.73) cm3、(3.70±0.38) g比(4.74±0.72) g，t＝2.502、2.521，P<0.05]，抑瘤率为21.94%；GA+微泡组移植瘤体积及重量低于对照组[(3.16±0.41) cm3比(4.54±0.73) cm3、(3.32±0.41) g比(4.74±0.72) g，t＝3.319、3.394，P<0.05]，抑瘤率为29.96%；GA+超声辐照组移植瘤体积及重量低于对照组[(2.99±0.27) cm3比(4.54±0.73) cm3、(2.99±0.45) g比(4.74±0.72) g，t＝4.005、4.093，P<0.05]，抑瘤率为36.92%；GA+微泡+超声辐照组移植瘤体积及重量低于对照组[(2.30±0.33) cm3比(4.54±0.73) cm3、(2.27±0.37) g比(4.74±0.72) g，t＝5.618、6.077，P<0.05]，抑瘤率为52.11%。将GA+微泡+超声辐照组与单用GA组、GA+超声辐照组及GA+微泡组比较，其移植瘤体积与重量明显降低，差异均有统计学意义(t＝4.605、5.399；3.225、2.478；3.248、3.821，P<0.05)。病理检测结果提示：对照组肿瘤组织无明显坏死，坏死评分0分；随着干预条件改变，超声辐照组、单用GA组、GA+微泡组、GA+超声辐照组以及GA+微泡+超声辐照组均有不同程度坏死，坏死评分分别为1分、2分、3分、3分、4分，坏死程度逐组递增。最后通过透射电子显微镜观察各组移植瘤细胞显微结构，其结果和病理检测结果保持一致。结论UTMD联合藤黄酸可有效抑制兔结肠癌皮下移植瘤的生长。

简介：摘要目的观察通腑泄热法中药对兔肝部分切除术后肝功能的影响。方法选用新西兰白兔25只，以随机数字表法随机分为3组，即中药组(TCM组，n＝10)，对照组(Control组，n＝10)，假手术组(Sham组，n＝5)，制备兔肝部分切除模型20例和假手术模型(切开腹壁后关腹)5例，分别于术前、术后第1天、术后第3天、术后第5天，检测各组兔血清中过氧化氢酶(CAT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)的含量水平。多组间样本比较采用单因素方差分析，组间两样本比较采用独立样本t检验。结果术前、术后第1天、术后第3天、术后第5天，中药组CAT的含量分别为(6.34±0.61)、(4.44±0.72)、(5.09±0.36)、(6.18±0.62) U/ml；对照组CAT的含量分别为(6.08±0.80)、(4.48±0.72)、(4.64±0.49)、(5.05±0.39) U/ml；假手术组CAT的含量分别为(6.34±0.64)、(6.31±0.52)、(6.33±0.42)、(6.36±0.31) U/ml。中药组ALT的含量分别为(25.67±2.97)、(38.65±3.14)、(33.30±2.33)、(26.95±1.74) U/L；对照组ALT的含量分别为(26.04±2.13)、(36.02±4.08)、(35.70±1.96)、(32.55±4.68) U/L；假手术组ALT的含量分别为(25.13±2.19)、(25.22±2.87)、(25.06±2.21)、(24.04±1.39) U/L。中药组AST的含量分别为(18.61±1.79)、(29.31±2.78)、(25.95±3.33)、(19.76±1.91) U/L；对照组AST的含量分别为(17.32±2.21)、(28.00±3.76)、(27.29±2.78)、(26.05±2.41) U/L；假手术组AST的含量分别为(18.27±2.15)、(18.92±2.41)、(18.87±1.89)、(18.54±2.28) U/L。中药组ALB的含量分别为(51.31±5.43)、(41.08±1.96)、(45.40±2.43)、(48.74±3.26) g/L；对照组ALB的含量分别为(52.14±4.36)、(42.99±4.16)、(45.33±3.71)、(43.74±2.95) g/L；假手术组ALB的含量分别为(50.05±4.23)、(51.18±4.11)、(51.10±2.93)、(51.50±3.34) g/L。CAT、ALT、AST、ALB的含量变化，术前各组间差异无统计学意义(CAT，t＝0.815、-0.003、-0.633；ALT，t＝-0.322、0.357、0.775；AST，t＝1.443、0.325、-0.798；ALB，t＝-0.377、0.451、0.881，P值均>0.05)。术后第1天中药组和对照组ALT、AST水平明显升高，CAT、ALB水平明显下降，与假手术组比较，差异有统计学意义(ALT，t＝8.017、5.257；AST，t＝7.095、4.870；CAT，t＝-5.119、-5.024；ALB，t＝-6.589、-3.612，P<0.05)，中药组和对照组间差异无统计学意义(CAT，t＝-0.136；ALT，t＝1.617；AST，t＝0.883；ALB，t＝-1.314，P值均>0.05)。术后第5天中药组和对照组ALT、AST都有所下降，CAT、ALB都有所升高，中药组变化更为显著，中药组和对照组间差异有统计学意义(ALT，t＝-3.548；AST，t＝-6.478；CAT，t＝4.896；ALB，t＝3.601，P值均<0.05)。结论通腑泄热法中药可明显减轻兔肝部分切除后术后肝损伤，可能是通过升高CAT水平，减少肝部分切除术后氧自由基的产生，从而保护兔肝部分切除术后肝功能。

简介：摘要目的探讨Roux-en-Y胃旁路术(RYGB)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏胆汁酸信号及糖异生的影响。方法将16只健康雄性Sprague-Dawley大鼠通过高脂饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM，随机数字表法分为假手术组(n＝8)和手术组(n＝8)。手术组行RYGB术，假手术组在与手术组相同位置行胃肠横断并原位吻合。术前及术后第1、2、4、6、8周测各组摄食量和空腹血糖；术前、术后2、8周行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素敏感试验(ITT)；术后8周留取空腹血清检测总胆汁酸水平，留取肝脏组织用反转录聚合酶链反应检测法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA表达水平，应用SPSS 20.0软件进行统计分析，组间比较采用t检验。结果手术组术后第4、6、8周摄食量[(18±2)、(19±3)、(20±4) g/d]显著低于假手术组[(24±3)、(28±4)、(26±3) g/d]，手术组术后第2、4、6、8周空腹血糖[(6.9±0.9)、(6.0±1.1)、(6.4±0.8)、(6.8±0.7) mmol/L]显著低于假手术组[(12.9±1.4)、(10.8±0.8)、(9.4±1.1)、(9.0±1.0) mmol/L]，差异有统计学意义(t＝4.707、5.091、3.394、9.209、9.982、6.239、5.098，P<0.05)；术后2周，手术组OGTT、ITT曲线下面积[(898±118)、(428±85) mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1 508±108)、(788±98) mmol/(L·min)]，术后8周，手术组OGTT、ITT曲线下面积[(975±102)、(455±76) mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1 575±96)、(775±86) mmol/(L·min)]，差异有统计学意义(t＝10.790、7.849、12.120、7.886，P<0.05)；术后8周，手术组大鼠血清总胆汁酸[(105.17±14.81) μmol/L]显著高于假手术组[(68.87±10.81) μmol/L]，差异有统计学意义(t＝5.600，P<0.05)；手术组与假手术组比较，肝脏FXR和SHP mRNA的表达显著上调(1.67±0.31比1.17±0.11、2.37±0.21比1.33±0.18)，PEPCK和G6Pase mRNA的表达显著下调(0.77±0.12比1.15±0.14、0.87±0.08比1.05±0.10)，差异有统计学意义(t＝4.299、10.640、5.829、3.976，P<0.05)。结论RYGB术改善T2DM大鼠糖代谢的作用机制可能与术后肝脏胆汁酸信号上调进而抑制糖异生有关。

简介：摘要目的观察沉默三结构域蛋白28(TRIM28)表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法通过RNA干扰技术(RNAi)构建干扰TRIM28表达的短发卡RNA(shRNA)质粒，对高表达TRIM28的肝癌细胞株HepG2和人高转移肝癌细胞(HCCLM3细胞)对照组及实验组转染shRNA 48 h后，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TRIM28基因沉默效率。应用划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测TRIM28基因沉默对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响，并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析，组间比较采用t检验。结果RT-qPCR结果显示实验组TRIM28表达(HepG2 0.84±0.02，HCCLM3 0.69±0.02)在两组肝癌细胞中均低于对照组(HepG2 1.00±0.05，HCCLM3 1.00±0.07，t＝5.488、7.240，P<0.01)，差异有统计学意义。划痕实验结果显示，48 h实验组HepG2和HCCLM3细胞迁移率[(57.83±0.02)%、(21.52±0.05)%]均明显低于对照组[(94.96±0.02)%、(38.10±0.03)%]，差异有统计学意义(t＝22.971、5.780，P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示，相应实验组穿膜细胞数分别为(57.88±5.24)、(3.33±1.36)个，明显低于对照组(265.52±9.31)、(26.03±3.13)个，差异有统计学意义(t＝23.050、13.242，P<0.01)。Western blot结果显示，HepG2和HCCLM3细胞N-cadherin蛋白表达量(0.31±0.06，0.63±0.08，t＝4.822、2.951，P<0.05)、Vimentin(0.41±0.03，0.32±0.02，t＝2.909、7.944，P<0.05)及β-catenin(0.10±0.03，0.12±0.02，t＝2.970、4.157，P<0.05)低于对照组，E-cadherin表达升高(0.25±0.05，0.27±0.07，t＝3.242、5.021，P<0.05)，差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示，实验组E-cadherin表达高于对照组(1.80±0.30，1.40±0.17，t＝4.571、3.095，P<0.01)，差异有统计学意义，N-cadherin(0.42±0.01，0.84±0.03，t＝22.460、8.441，P<0.01)、Vimentin(0.18±0.00，0.84±0.02，t＝52.230、6.194，P<0.01)及β-catenin表达低于对照组(0.72±0.07，0.34±0.07，t＝2.972、4.174，P<0.01)，差异均有统计学意义。结论降低TRIM28表达能抑制肝癌细胞HepG2和HCCLM3的侵袭和迁移能力。

简介：摘要目的观察Roux-en-Y胃旁路(RYGB)术对2型糖尿病(T2DM)大鼠胆汁酸合成及重吸收的影响。方法Sprague-Dawley(SD)大鼠(购自广州中医药大学实验动物中心)通过高脂饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM，随机分为手术组(n＝8)和假手术组(n＝8)。手术组行RYGB术，假手术组在与手术组相同位置行胃肠横断并原位吻合。术前及术后第1、2、4、6、8周测体重和空腹血糖；术后8周留取空腹血清检测血脂及总胆汁酸水平，留取门静脉血清检测总胆汁酸水平，留取肝脏及回肠黏膜组织用反转录聚合酶链反应检测胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)、钠依赖性胆盐转运体(ASBT)、回肠胆汁酸结合蛋白(IBABP)、有机可溶性转运二聚体α(OSTα)mRNA表达水平。两组间比较采用t检验。结果手术组术后第4、6、8周体重[(372±12)、(388±15)、408±14) g]显著低于假手术组[(398±13)、(415±14)、(431±15) g]，手术组术后第2、4、6、8周空腹血糖水平[(7.9±1.9)、(7.2±1.2、(6.8±1.5)、(7.9±1.1) mmol/L]显著低于假手术组[(12.5±1.6)、(11.8±1.0)、(10.5±1.9)、(11.0±1.5) mmol/L]，差异均有统计学意义(t＝4.157、3.722、3.171、5.238、8.329、4.323、4.714，P<0.05)；手术组血清总胆固醇、甘油三酯和游离脂肪酸水平[(1.90±0.45)、(1.98±0.38)、(1.01±0.19) mmol/L]显著低于假手术组[(2.51±0.41)、(2.66±0.44)、(1.58±0.21) mmol/L]，手术组外周和门静脉血清总胆汁酸水平[(95.56±13.61)、(185.89±18.71) μmol/L]显著高于假手术组[(48.37±11.68)、(98.17±15.21) μmol/L]，差异均有统计学意义(t＝2.834、3.308、5.693、7.442、10.290，P<0.05)；手术组与假手术组比较，肝脏CYP7A1 mRNA的表达显著下调(1.07±0.21比1.35±0.15)，回肠ASBT、IBABP和OSTα mRNA的表达显著上调(1.92±0.28比1.41±0.25、1.83±0.24比1.22±0.18、1.78±0.17比1.40±0.19)，差异均有统计学意义(t＝3.069、3.843、5.751、4.216，P<0.05)。结论RYGB术改善T2DM大鼠糖脂代谢的作用机制可能与术后血清总胆汁酸水平升高及回肠胆汁酸重吸收增加有关。