简介：摘要目的利用腺病毒包装质粒pBHGE3与携带LASP-1 siRNA的穿梭质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1在HEK293细胞内，包装成病毒ZD55-LASP-1和Ad-LASP-1。方法利用Effectene DNA转染试剂将质粒pBHGE3与质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1分别感染HEK293细胞，纯化并扩增病毒。通过PCR鉴定Ad-LASP-1、ZD55-LASP-1是否包含目的基因，E1区是否缺失及有无野生型腺病毒污染。鉴定正确的病毒进行扩增，CsCl梯度离心纯化，TCID50法测病毒滴度。结果PCR鉴定证明ZD55-LASP-1未混杂野生型腺病毒,且包含目的序列LASP-1 siRNA；Ad-LASP-1 E1区缺失,且包含目的序列LASP-1 siRNA。ZD55-LASP-1滴度为4×1010 PFU/ml，Ad-LASP-1滴度为2×1010PFU/ml。Western-blot证实ZD55-LASP-1在肿瘤细胞中表达E1A，Ad-LASP-1不表达E1A。结论靶向表达LASP-1 siRNA序列的病毒ZD55-LASP-1重组成功，为肾癌的下一步基因治疗提供了基础。

简介：摘要目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达；构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC)，包装慢病毒颗粒，分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2)；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化；采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化；采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化；采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检测结果显示病毒感染后的细胞SPRK1在mRNA和蛋白水平均明显下调；在慢病毒感染后的T24细胞中，第3~5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)；在慢病毒感染后的5637细胞中，第2~5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)；Transwell细胞迁移和侵袭实验显示：与阴性对照组比较，干扰组的迁移和侵袭的膀胱癌细胞数目均明显减少，差异均有统计学意义(均P<0.05)；Western blot结果显示，与阴性对照组比较，干扰组的E-cadherin表达量增加，而N-cadherin和vimentin的表达明显减少，同时AKT通路蛋白p-AKT及p-GSK3β明显下调，差异均有统计学意义(P<0.001)。结论SRPK1基因在膀胱癌组织中高表达，下调SRPK1的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖，并降低膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。

简介：摘要血清CA199作为一种常见的肿瘤标志物，目前主要应用于消化系统恶性肿瘤、肺癌及卵巢癌的诊断及治疗效果评定。CA199升高也常见于无恶性肿瘤存在的情况，如良性胆道疾病、慢性肝炎、肝硬化等，临床上还观察到部分CA199升高患者没有发现任何疾病。本文报道1例重肾畸形合并CA199异常增高的患者，手术后恢复正常，进而证明CA199升高也常见于无恶性肿瘤存在的情况。

简介：摘要目的观察LASP-1在肾细胞癌中的表达，探讨其在肾癌发生发展中的作用。方法应用免疫组织化学和Western blot检测2015年5月至2019年5月徐州医科大学附属市立医院82例肾癌患者手术切除的癌组织及癌旁组织中的LASP-1表达。结果LASP-1在肾细胞癌组织中的阳性表达率为92.68%(76/82)，其中强阳性为29.27%(24/82)；癌旁组织阳性表达为26.83%(22/82)，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测发现，癌旁组织LASP-1的表达量(0.818±0.064)和无淋巴结转移组LASP-1的表达量(1.443±0.154)明显低于有淋巴结转移癌组织的表达量(2.030±0.183)，差异有统计学意义(P<0.05)。LASP-1的表达与TNM分期(rs＝0.386)和有无淋巴结转移(rs＝-0.711)有相关性(P<0.05)，但是与肿瘤大小(rs＝-0.172)及Furhman分级(H＝7.235)无相关性(P>0.05)。结论检测肿瘤内LASP-1表达有助于判断肾细胞癌侵袭性和估计预后。