简介:摘要目的评价7,8-二羟基黄酮(7,8-dihydroxyflavone, 7,8-DHF)对过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)引起PC12细胞损伤的影响,并探究其机制。方法采用随机数字表法将PC12细胞分为4组(每组4皿):对照组(C组)、7,8-DHF组(D组)、H2O2组(H组)、7,8-DHF+H2O2组(D+H组)。C组加入PBS缓冲液,D组加入25 μmol/L 7,8-DHF,H组和D+H组均加入200 μmol/L H2O2,D+H组在加入H2O2前采用25 μmol/L 7,8-DHF预处理1 h。各组细胞孵育24 h后采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放率,Hoechst染色法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-fluorescein isothiocyanate, FITC)/碘化丙啶(propidium iodide, PI)双染法结合流式细胞仪观察并分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)法测定酸敏感离子通道3(acid-sensing ion channel 3, ASIC3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)/B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 related X protein, Bax)的mRNA表达,Western blot法测定ASIC3、Bcl-2/Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3, cleaved caspase-3)蛋白水平。结果与C组比较:H组PC12细胞数量和细胞活力明显降低,LDH释放率及细胞凋亡率明显升高,ASIC3 mRNA表达和蛋白水平均上调,cleaved caspase-3蛋白水平上调,Bcl-2/Bax mRNA比值和蛋白比值均降低(P<0.05);D组和D+H组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。与H组比较,D+H组细胞形态接近正常,细胞数量和细胞活力明显升高,LDH释放率及细胞凋亡率明显降低,ASIC3 mRNA表达和蛋白水平均下调,cleaved caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2/Bax mRNA比值和蛋白比值均升高(P<0.05)。结论7,8-DHF可以减轻H2O2引起的PC12细胞损伤,其机制可能与抑制ASIC3信号从而减轻细胞凋亡有关。
简介:摘要在公路施工中,施工技术受到重视,但是由于施工环境复杂,有的公路施工要穿越山河,这时就需要采取穿越崇山峻岭的施工方法了。公路隧道施工是最先施做洞口工程施工隧道作业中的先决条件,洞口的施工技术指导隧道施工作业是质量保障之前提。