简介：目的:构建表达基因编辑钙探针(GECIs)的细胞系HeLa-GECIs,探究细胞应答外界ATP刺激中钙离子在细胞内的响应和变化。方法:分别用能够直接通过荧光强度反映细胞胞浆内和线粒体内钙离子相对浓度的2种钙探针cyto-GCaMP6和4mt-GCaMP6感染HeLa细胞,获得2种表达钙离子探针的HeLa细胞系;在感染了2种腺病毒探针24h后,用共聚焦荧光显微镜检测荧光探针在HeLa细胞内的表达情况;在表达2种钙探针的细胞的培养基中加入外源ATP,用Time-lapse成像动态观测技术观察HeLa细胞内钙离子对外环境中ATP的响应。结果:共聚焦荧光显微镜观察,确定95%以上的细胞表达了对应的钙离子指示荧光探针;Time-lapse成像动态观测技术观察发现,在细胞培养基中加入ATP后,细胞胞浆钙探针荧光强度瞬时(3~6s)升至10倍,200s后逐渐降低到基础水平;线粒体钙到达峰值(4倍)的时间稍滞后(5~8s),并且回落更慢,300s时至1.5倍。在ATP受体P2X7抑制剂A438079预处理的实验组,上述胞浆钙和线粒体钙浓度上升不明显。结论:构建了能在活体细胞内通过荧光探针实时监测钙离子响应胞外ATP刺激的细胞实验体系,为进一步深入探究ATP等危险信号导致细胞的炎性损伤机制奠定了基础。

简介：本文对培养20天后葛仙米不同氯化钙浓度下的三种酶活性进行对比发现,超氧化物歧化酶(SOD)活性随着钙离子浓度的升高而降低,多酚氧化酶(PPO)活性随着钙离子浓度的升高而降低。苯丙氨酸转氨酶(PAL)在较低钙浓度下表现出较高的活性,而在较高的钙浓度下活性较低。

简介：骨钙素(osteocalcin,OC)由成熟成骨细胞合成及分泌,是临床常用的骨形成标志物。其合成后大部分以羧化形式沉积在骨基质中参与骨骼矿化,少量未羧化或羧化不全直接分泌入血。未羧基化OC可作用于胰岛β细胞、脂肪细胞而促进胰岛素、脂联素的分泌,对能量代谢具调节作用,这使OC成为一种新型的能量代谢调节激素。

简介：本文提出一种水嘴中六价铬析出量的测定方法。该方法通过测定了水嘴的体积,再按体积比例加入提取液进行浸泡处理,收集水嘴析出的六价铬溶液,用二苯碳酰二肼分光光度法进行检测。该方法简单快捷、灵敏度高,解决了水嘴的表面积难以测定、提取液用量难以确定的问题。本方法适合于不同形状、不同规格的水嘴产品中六价铬析出量的测定。

简介：目的:建立一个稳定可靠分离度好的方法测定黄芪桂枝五物颗粒中芍药苷的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:YMC-PackODS-A(250×4.6mm,5μ);流动相:以乙腈—0.1%磷酸溶液(14:86)为流动相;检测波长:230nm;流速为1.0ml/min;柱温为30℃。结果:芍药苷的进样量在0.120μg~1.200μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为99.22%,RSD为0.89%。建立了高效液相色谱法测定黄芪桂枝五物颗粒的含量的方法,该方法准确、可靠、分离度好。

简介：为研究人血小板因子4(hPF4)的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应(RTPCR)从人红白血病细胞系HEL细胞总RNA中扩增出hPF4基因cDNA序列,将其克隆至pUC18载体中.序列分析证实克隆片段与文献报道的hPF4基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hPF4基因cDNA.

简介：血清钠离子和钾离子的测定在临床诊断上意义重大，其常规检测方法火焰光度法和离子选择性电极法都需要昂贵的仪器且操作复杂，因此近年来开发了一些均相直接测定方法。本文综述了近年研制出的血清中钠、钾离子的各种均相直接测定方法，评述了各种直接测定方法的优、缺点。血清中钠、钾离子进行均相直接测定有着准确度高、重复性好等优点，可在临床生化自动化分析仪上应用。

简介：在建设有中国特设社会主义社会当中,发展社会就是要始终坚持走可持续发展道路,发展绿色经济、环保经济。木材主要来源于树木,通过对木材的含碳率进行准确的测定以及碳素数据的存数对我国实现可持续发展有着重大作用。本文就木材含碳率的测定以及碳素储存数据库进行了相关的研究。

简介：采用聚合酶链反应从炭疽芽孢杆菌减毒株ＹＢ１中扩增其保护性抗原（ＰＡ）的编码区基因，将其克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，并分步测定其序列。序列测定表明，该基因长２２０５ｂｐ，编码７３５个氨基酸残基，与文献报道的标准菌株Ｓｔｅｒｎｅ株的ＰＡ序列只有４个碱基的差异。

简介：用气相色谱法对发酵液中的乙酸进行了分析。以丙酸为内标，样品用硫酸酸化后再用乙醚提取，在ＨＰ－ＦＦＡＰ毛细管分析柱上进行色谱分析，采用ＦＩＤ检测器检测。该方法样品制备过程简捷精密度和回收率都很高。乙酸的回收率为９９．４４％－１０２．４１％，变异系数１．６９％－６．１１％。方法的建立为工程菌发酵控制和代谢工程研究提供了良好的研究手段。

简介：mirVanaqRT-PCRmiRNA检测试剂盒扩增特定的小RNA，可以精确定量小RNA表达水平。这个测定系统还可以通过传统的RT-PCR或实时RT-PCR使用SYBRGreen1描述小RNA表达特征。引物组也几乎涵盖人、大鼠、小鼠的微小RNA。另外，引物组特别含有小RNA-U6snRNA和5srRNA，它们可以控制输入的变异性和样本标准化。

简介：随着时代的发展,以及一些严重病例的出现,人们对于肿瘤及放疗的恐惧和担忧,使得肿瘤病人在生活中受到比较到的影响.本文实验为基础进而分析患者的心理状态、及其对细菌的免疫能力和测定患者在心理干预的情况下的研究.来达到更好的保证患者在手术后更好的恢复,促进其心理健康的生活,从而有利于病人更好的康复.

简介：2010版中国药典明确规定人血液制品的蛋白质含量测定方法为凯氏定氮法.为提高该方法的测定准确性,我们在样品稀释、消化、蒸馏和滴定方面给予更加详细的操作方法和建议,为进一步提高人血液制品质量、产量和利润提供了依据.

简介：通过建立反向高效液相色谱法,对天胡荽根、茎、叶各器官提取物中的黄酮类物质含量同时进行检测与分析,以筛选出具有更高应用价值的器官,提高黄酮提取的针对性、科学性和有效性.

简介：目的：建立一种简便的对抗体相对亲和力进行定性比较的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法,以便快速、简便地从大量抗体突变体中挑选高亲和力突变体。方法：将待测抗体倍比稀释后用直接ELISA方法进行定量,同时用相同浓度抗体作为一抗与抗原进行间接ELISA反应,以前者吸光度值为横轴、后者吸光度值为纵轴绘制散点图,通过拟和后的曲线判断抗体亲和力高低,并通过BIA-core法对该方法的准确性进行验证。结果：通过该方法获得的抗体亲和力高低情况与经测定抗体亲和力得出的结果一致。结论：该ELISA方法是一种简便可行、准确有效的抗体亲和力定性比较方法,可以应用于不同抗体的亲和力成熟比较研究。

简介：将不同剂量的重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)与脱钙骨基质(DBM)分别复合后,植入小鼠股部内侧肌间隙,三周后取材,通过组织学检查、碱性磷酸酶(ALP)及钙含量的测定比较各组的骨诱导活性.结果显示,三组复合物均有骨组织生成,中、高剂量组可见骨小梁、板层骨和原始骨髓腔,血管和骨髓丰富;低剂量组的成骨量明显少于中、高剂量组,且新骨的成熟度低于其他两组,DBM少部分吸收;单独植入rhBMP-7组有编织骨形成;而DBM组可见成骨细胞的聚集.rhBMP-7/DBM复合组在ALP和Ca含量水平上与同等剂量的两对照组相比均有显著性差异(P＜0.01),而rhBMP-7三种剂量之间均有显著性差异(P＜0.01).这充分说明DBM作为rhBMP-7的合适载体,具有缓释作用,且二者复合可起到双重骨诱导活性;而且rhBMP-7的骨诱导活性具有一定的剂量依赖性.

简介：目的：检测抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）转基因山羊外源基因的拷贝数及ATⅢ蛋白的表达量,分析拷贝数与蛋白表达量的相关性。方法：用Primer5.0软件设计外源基因ATⅢ及山羊管家基因GAPDH的引物,以倍比稀释的标准品进行实时荧光定量PCR,制作标准曲线,通过标准曲线计算外源基因拷贝数;通过酶显色底物法检测ATⅢ蛋白的含量。结果：依据ATⅢ和GAPDH基因标准曲线方程计算得到的山羊个体间外源基因的拷贝数相差很大,最少的为5,最多为25,且不同转基因山羊间ATⅢ表达水平的差别达10倍以上。结论：外源基因表达水平在受到拷贝数的影响外,也受到整合位点等其他因素的重要影响。

简介：细菌性脑膜炎是一类严重的传染性疾病,其发病率以及后遗症率都比较高.根据其表面荚膜多糖的不同可以分为13个血清群体,其中A、C、Y、W135这四种群Men是引发脑膜炎的主要致病菌.目前针对这几种致病菌的疫苗主要是多糖疫苗.本文在总结群脑膜炎球菌多糖疫苗的研发情况以及生产进展的同时着重介绍了用于测定多糖含量的一种简单有效的方法：免疫火箭电泳法.

简介：现代林业对于社会可持续发展,保持生态环境有着极为重要的价值与意义,成为当今社会发展中十分重要的方面。尤其是近几年来,随着我国经济社会的不断发展,环境问题日益突出,林业建设与发展引起了国家和社会的广泛重视。

简介：母体胚胎亮氨酸拉链激酶（MELK）是蔗糖非发酵1／AMP活化蛋白激酶（Snfl／AMPK）家族中一个独特成员，是一种周期依赖性激酶。与家族其他成员不同，MELK并不参与代谢应激状态下细胞的生存调控，而更多参与细胞周期、细胞增殖、肿瘤生成和细胞凋亡等过程。MELK在人体多种肿瘤中表达升高，与肿瘤的预后密切相关。MELK在肿瘤干细胞中被异常激活，使肿瘤细胞获得生长、侵袭、迁移等能力，因此，MELK可以作为肿瘤治疗的重要靶点。我们就MELK基因的生物学功能、作用机制及其在肿瘤研究中的进展做简要综述。