简介:β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶(β-carotene-15,15'-momoxygenase1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究。分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外显子选取sgRNA识别位点,体外转录制备sgRNA并与Cas9mRNA混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sgRNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体。本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料。
简介:诺氟沙星(norfloxacin,NFLX)广泛应用于水产养殖中的鱼类细菌性疾病治疗。为探讨诺氟沙星对海洋生物的毒性作用,选择海月水母螅状体为受试生物,考察了不同浓度诺氟沙星和不同暴露时间对GTP结合蛋白(GTPbindingprotein)、氧化应激蛋白(oxidativestressprotein)和热休克70kDa蛋白(heatshock70kDaprotein,Hsp70)表达量的影响。结果表明,NFLX对海月水母螅状体的48h的半致死浓度(48h-LC_(50))是415.1mg·L^-1,NFLX对海月水母螅状体的毒性属于低毒。随着NFLX浓度的升高和培养时间的延长,Hsp70基因在第7天浓度300mg·L^-1时表达量受到显著性诱导(P〈0.05),较对照组升高9.1倍;GTP结合蛋白基因和氧化应激蛋白基因的表达量都呈现先急剧升高后降低的趋势。2个基因均在第1天受到显著性诱导(P〈0.05),分别在NFLX浓度100mg·L^-1和300mg·L^-1时表达量达到最大值,较对照组升高10.15倍和50.5倍。Hsp70基因、GTP结合蛋白基因和氧化应激蛋白基因在实验期间都对NFLX表现出较好的响应。
简介:一氧化氮(nitricoxide,NO)作为生物活性分子,广泛参与各种生物和非生物胁迫。采用营养液培养,研究Cu胁迫下番茄体内L-精氨酸、NO、多胺代谢对外源NO的响应机制,以期为铜污染区域蔬菜种植提供科学依据和技术支持。结果表明,Cu胁迫下添加外源SNP(硝普钠,外源NO供体)能够调节番茄根系和叶片中精氨酸脱羧酶(ArginineDecarboxylase,ADC)、鸟氨酸脱羧酶(OrnithineDecarboxylase,ODC)及一氧化氮合酶(NitricOxideSynthase,NOS)活性。根系中,外源SNP能够上调NOS活性,L-精氨酸代谢向着NO合成方向进行;叶片中,外源SNP能够同时上调ADC、ODC、NOS活性,PA、NO的合成同时进行;此外,Cu胁迫下添加外源SNP能够增加根系和叶片L-精氨酸含量,而作为PA、NO的合成前体,精氨酸含量升高无疑会间接促进PA、NO的合成,从而提高番茄对Cu胁迫的抵抗能力。
简介:应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母,用以检测类,抗雌激素化合物和环境样品的类,抗雌激素活性.采用多聚酶链反应(PCR)法扩增人雌激素受体(hER)基因,构建诱饵质粒pGBKT7-ERLBD;分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的靶质粒pGADg24-GRIP1和pGAD424-SRC1;诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187,于营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)上筛选阳性菌落,分别构建两种ER双杂交酵母ER+GRIP1和ER+SRC1.考察双杂交酵母与不同激素:17β-雌二醇(E2)、二氢睾酮(DHT)、孕酮(PG)以及三碘甲状腺原氨酸(T3)的结合情况,并考察了雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬(4-OHT)与酵母的相互作用.结果表明:ER+GRIP1和ER+SRC1酵母均能够专一性的和E2结合,并存在显著的剂量-效应关系,E2对ER+GRIP1和ER+SRC1酵母β-半乳糖苷酶活性诱导的EC50值分别为7.3×10^-11mol·L^-1和1.5×10^-10mol·L^-1,其中ER+GRIP1酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于ER+SRC1-酵母细胞.4-OHT能够抑制E2诱导ER+GRIP1酵母细胞产生的酶活性,并存在显著的剂量-效应关系,IC50值为1.0×10^-7mol·L^-1.表明重组人雌激素受体基因酵母可以用于检测化合物和环境样品的类,抗雌激素活性.
简介:细胞凋亡是调控机体发育和维护内环境稳定的重要机制。在克隆了稀有鮈鲫(Gobiocyprisrarus)肝脏组织中凋亡相关的bcl-2、apaf-1、caspase-3和caspase-9基因的部分cDNA片段之后,进行了序列分析。结果表明,caspase-3和caspase-9基因片段与唐鱼(Tanichthysalbonubes)相对应的核苷酸序列同源性最高,而bcl-2、apaf-1基因片段则分别与鮈鱼(Gobiogobio)和鲤鱼(Cyprinuscarpio)相对应的核苷酸序列同源性最高,为99%和89%。基于稀有鮈鲫和已知物种的caspase-3基因核苷酸序列构建了系统发育树,发现稀有鮈鲫与唐鱼、斑马鱼(Daniorerio)的亲缘关系最近,而与金头鲷(Sparusaurata)、红鳍东方鲀(Takifugurubripes)的亲缘关系较远。本研究为深入理解外源性化学物质对鱼类的毒理学机制及其生态健康风险评价提供科学数据,同时也为稀有鮈鲫在鲤科鱼类的分类及进化地位的研究提供分子水平的重要参考。
简介:为揭示浑河流域水环境内分泌干扰物对水生态的潜在风险,利用兼并引物扩增获得鲫鱼卵黄蛋白原(Vtg)和核糖体蛋白L-7(RPL-7)基因部分碱基序列(分别为825和450bp),建立以RPL-7为内参基因、定量鲫鱼Vtg基因表达的实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法,并将该方法用于定量浑河野生鲫鱼肝组织Vtg基因表达分析。结果显示:与上游对照点(S1)相比,7月下游各点(S4~S8)雄鱼、S4和S6点雌鱼肝组织的VtgmRNA表达水平皆显著升高(P〈0.05);11月在雄鱼中未检出VtgmRNA的有效表达,雌鱼也仅在S2和S3点的表达水平升高(P〈0.05)。研究表明,浑河流域野生鲫鱼尤其是在7月明显受到了环境雌激素类物质的影响。另外,qRT-PCR方法能够灵敏检测出鲫鱼Vtg基因表达的时空差异。
简介:为探讨纳米MnO2与常规MnO2粉末对细胞DNA损伤作用的差别,采用不同浓度的纳米MnO2与常规MnO2粉末(0、100、200、400μg·mL^-1)对Hela细胞进行染毒,应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测Hela细胞的损伤效应.结果表明,与对照组相比,纳米MnO2和常规MnO2各染毒组细胞尾部DNA百分率(TailDNA%)和尾矩(TailMoment)均显著增加(p〈0.01);同一浓度下,纳米MnO2组细胞尾部DNA百分率和尾矩显著高于常规MnO2组(p〈0.01).以上结果表明,纳米MnO2和常规MnO2粉末均能导致Hela细胞DNA损伤,且纳米MnO2的损伤作用强于常规MnO2.
简介:环境中细菌的耐药性,尤其是对抗生素的耐药性已成为影响生态环境的重要因素.论文采用抗生素抗性平板法调查了北江河水中四环素、红霉素及磺胺类这3类抗生素耐药性细菌的存在,采用定性PCR及荧光定量PCR方法分别研究了该水域sul1和sul2这2种磺胺类抗生素抗性基因(ARGs)的存在和含量水平.结果表明,所采集北江水域的9个样品中有5个对四环素有耐药性,7个对红霉素有耐药性,8个对磺胺二甲嘧啶有耐药性;定性PCR实验并经基因测序结果证实,5个样品含有sul1,4个样品含有sul2.进一步的PCR定量分析结果显示,7个样品中均检出sul1和sul2磺胺抗性基因,它们与内对照基因16S-rRNA表达量比值分别在10-2.56~10-0.52及10-3.25~10-1.24范围内,该结果显著高于美国科罗拉多州北部河流的研究结果.此外,数据分析也发现,sul1和sul2磺胺抗性基因的含量水平与该区域水中磺胺含量分布具有一定的相关性,表明外源性抗生素对河流的污染是诱导抗性基因的重要因素.
简介:Globalclimatechangeisoneofthemajorenvironmentalissuesfacedbyhumans.Existingevidenceindicatesthattheanthropogenicpushforariseintheatmosphericconcentrationofgreenhousegases(GHGs)(particularlyCO2)hasbeenaprimarycauseforglobalwarming.Asidefromeconomicandteclinologicalfactors,demographicdynamics(includinghumanconsumptioninabroaddemographicsense)hasbeenamajordriverforCO2emissions.Inthispaper,weperformedbothnonlinearregressionanalysis(basedontheSTIRPATmodel)andgraycorrelationdegreeanalysis(basedongraysystemtheory)ontheimpactofdemographicdynamicsonCO2emissions.OurresultsrevealthatCO2emissionsarepositivelycorrelatedwithpopulationsizeandGDPpercapitaandnegativelycorrelatedwithenergyintensity.WealsoshowthatgraycorrelationdegreewithCO2emissionsforfivevariables(i.e.,householdconsumption,urbanizationrate,householdsize,populationagingrate,populationsize)variessubstantially:householdconsumption>urbanizationrate>householdsize>populationagingrate>populationsize,withhouseholdconsumptionbeingthehighest,andpopulationsizethelowest.TomitigatetheimpactofdemographicdynamicsonCO2emissions,itisofvitalsignificancetonurturepeople’sawarenessofsustainableconsumptionandtoadheretocurrentpopulationcontrolpolicies.
简介:HouseholdconsumptionisoneoftheimportantfactorsthatinduceCO2emission.Basedoninput-outputmodel,thisarticlecalculatedtheintensityofCO2emissionofdifferentincomegroupsandsevenprovincesinChina,andthenestimatedtotalCO2emissioninducedbyurbanhouseholdconsumptionfrom1995to2004inChinabasedonstatisticdataofhouseholdlivingexpenditure.TheresultsshowthatCO2emissionpercapitainducedbyhouseholdconsumptionhadincreasedfrom1583to2498kgCO2during1995-2004.Theratioofconsumption-inducedCO2emissiontototalCO2emissionhadrisenfrom19%to30%inthepastdecade.IndirectCO2emissionaccountedforanimportantpartoftheconsumption-inducedemission,theratioofindirectemissiontoconsumption-inducedemissionhadrisenfrom69%to79%duringthesameperiod.Asignificantdifferenceinconsumption-inducedCO2emissionacrossdifferentincomegroupsanddifferentregionshasbeenobserved.CO2emissionpercapitaofhigherincomegroupsanddevelopedregionsincreasedfasterthanthatoflowerincomegroupsanddevelopingregions.ChanginglifestylehasdrivensignificantincreaseinCO2emission.Especially,increasesinprivatetransportexpenditure(forexample,vehicleexpenditure)andhousebuildingexpenditurearekeydrivingfactorsofgrowthinconsumption-inducedCO2emission.TherearebigdifferencesintheamountofCO2emissioninducedbychangeinlifestyleacrossdifferentincomegroupsandprovinces.Itcanbeexpectedthatlowerincomehouseholdsanddevelopingregionswillincreaseconsumptiontoimprovetheirlivingswithincomegrowthinthefuture,whichmayinducemuchmoreCO2emission.AreasonablelevelofCO2emissionisnecessarytosatisfyhumanneedsandtoimprovelivingstandard,butanoticeablefactisthatCO2emissionpercapitainducedbyhouseholdconsumptionindevelopedareasofChinahadreachedaquitehighlevel.Adjustmentinlifestyletowardsalow-carbonsocietyisinurgentneed.
简介:乙烯菌核利在哺乳动物实验中被广泛证实具有抗雄激素效应,而对鱼类的研究结论目前并不统一。将性成熟稀有绚鲫分别暴露于0、2、10、50μg·L-1乙烯菌核利21d,研究环境浓度下乙烯菌核利对鱼类生殖系统的影响及作用机制。结果表明,雌鱼的性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)在所有浓度组均显著降低仞〈O.05),同时卵巢组织中卵泡的发育受到了抑制;而雄鱼仅HSI在最高浓度组(50μg·L-1)出现显著降低p〈0.05),精巢组织切片也未观察到明显损伤,说明乙烯菌核利对雌鱼生殖系统的影响大于雄鱼。在转录水平上,雌鱼性腺中PrmRNA、vtgmRNA分别在50μg·L-1和10、50μg·L-1时显著升高(p〈0.05),armRNA在所有浓度组显著升高(p〈O.05);而雄鱼性腺中armRNA、dmrtlmRNA水平分别在10μg·L-1浓度组和所有浓度组显著降低(p〈0.05),ermRNA在所有浓度组显著降低(p〈0.05),说明雌雄鱼对乙烯菌核利暴露的分子响应机制存在差异。综上,环境浓度下乙烯菌核利短期暴露会对稀有绚鲫生殖系统产生一定的影响,并且雌雄鱼在敏感性和分子响应机制上都存在差异。
简介:为探讨纳米二氧化钛(Nano-TiO2)颗粒对人胚肺(HPF)细胞基因表达和基因功能的影响,使用粒径10nmTiO2暴露体外培养的人胚肺细胞24h,提取RNA,应用基因芯片方法,寻找差异表达基因,并对差异基因进行基因本体(GeneOntology,GO)分类.结果表明,纳米TiO2暴露人胚肺细胞,导致514条肺中表达的基因发生差异表达,基因分类显示400条基因涉及生物学过程;415条基因涉及分子学功能;391条基因涉及细胞构成.纳米TiO2作为外界刺激物质,与细胞膜上的受体结合,影响钙、钾离子通道,上调细胞免疫和炎症反应相关的细胞因子TNF、IL1B、IL1A等基因表达.
简介:为探究并比较淡水鱼种日本青鳉早期发育阶段对Cu2+和Cd2+等重金属胁迫的响应,在实验室通过半静态方式,对日本青鳉受精卵和仔稚鱼分别进行了48h和96h急性毒性实验。结果表明:Cu2+对日本青鳉胚胎24、48h-LC_(50)分别为8.164mg·L(-1)和6.965mg·L(-1);Cd2+对日本青鳉胚胎24、48h-LC_(50)分别为63.084mg·L(-1)和53.093mg·L(-1);较低浓度组Cu(2+)(≤1.97mg·L(-1))时日本青鳉胚胎的发育速率快于对照组,而较高浓度组(≥3.87mg·L(-1))胚胎的发育速率则慢于对照组;与Cu(2+)略有不同,无论浓度高低Cd(2+)对胚胎的孵化速率均产生抑制作用;Cu(2+)和Cd(2+)质量浓度分别高于1.97mg·L(-1)和19.68mg·L(-1)时,两种重金属离子均显著降低胚胎的孵化率(P〈0.05)。Cu(2+)对日本青鳉初孵仔鱼24、48、72和96h-LC_(50)分别为5.361mg·L(-1)、2.844mg·L(-1)、2.020mg·L(-1)和1.352mg·L(-1);Cd(2+)对日本青鳉初孵仔鱼24、48、72和96h-LC_(50)分别为15.907mg·L(-1)、10.550mg·L(-1)、7.986mg·L(-1)和6.346mg·L(-1);Cu(2+)对日本青鳉稚鱼24、48、72和96h-LC_(50)分别为5.732mg·L(-1)、4.037mg·L(-1)、2.498mg·L(-1)和1.955mg·L(-1);Cd(2+)对日本青鳉稚鱼的24、48、72和96h-LC_(50)分别为16.419mg·L(-1)、11.745mg·L(-1)、8.516mg·L(-1)和6.776mg·L(-1)。与其它淡水水生生物相比,日本青鳉仔稚鱼对铜和镉离子较为敏感。
简介:AftertheKyotoProtocolwasimplemented,carbonleakageexertsgreatinfluencesoninternationaltradeandeconomy.Tradecreatesamechanismforconsumerstoshiftenvironmentalpollutionassociatedwiththeirconsumptiontoothercountries.ChinahasovertakentheU.S.astheworld'sbiggestCO2emittersince2006.AsChina'ssecondlargesttradepartner,theU.S.hasthebiggesttradedeficitwithChinawhichhasarousedalotofdisputesbetweenthetwoparties.ButsofartheassessmentsofthetradeimbalanceofChina-U.S.havepaidlittleattentiontoenvironmentalimpactsassociatedwiththetradeimbalance.Appliedaninput-outputapproach,thearticleestimatestheamountofCO2embodiedinChina-U.S.tradeduring1997-2007.ItwasfoundthatthroughtradewithChina,theU.S.reduceditsCO2emissionscomparedwithanon-tradescenario.Duetothegreatercarbon-intensityandrelativelylessefficientproductionprocessesofChineseindustry,China-U.S.traderesultedinmoreCO2emissionsinChinaandtheworld.Intheend,thearticlegivessomesuggestions:itisequalandsustainablethattheinternationalaccountingmethodologiesshouldbeimproved,forCO2emissionsresponsibilitymustbedesignedtoaccountforthedynamicnatureofinternationaltrade.
简介:EstablishingpositiveandurgenttargetsforCO2reductionandemissionpeak,andpromotingenergyconservationandenergystructureadjustmentareamongthestrategiestoaddressglobalclimatechangeandCO2emissionsreduction.Theyarealsomeanstobreakthroughtheconstraintsofdomesticresourcesandenvironment,andinternalneeds,toachievesustainabledevelopment.Generallyspeaking,acountry’sCO2emissionpeakappearsafterachievingurbanizationandindustrialization.Bythen,connotativeeconomicgrowthwillappear,GDPwillgrowslowly,energyconsumptionelasticitywilldecrease,andenergyconsumptiongrowthwillslowdown-dependentmainlyonnewandrenewableenergies.Fossilfuelconsumptionwillnotincreasefurther.WhenCO2emissionreachesitspeak,theannualreductionrateofCO2intensityofGDPisgreaterthanGDPannualgrowthrate;andtheannualreductionrateofCO2intensityofenergyuseisgreaterthantheannualgrowthrateofenergyconsumption.Therefore,threeimportantapproachestopromotionofCO2emissionpeakcanbeconcluded:maintainingreasonablecontrolofGDPgrowth,strengtheningenergyconservationtosignificantlyreducetheGDPenergyintensity,andoptimizingtheenergymixtoreducetheCO2intensityofenergyuse.Byaround2030,Chinawillbasicallyhavecompleteditsrapiddevelopmentphaseofindustrializationandurbanization.ConnotativeeconomicgrowthwillappearwiththeaccelerationofindustrialstructureadjustmentThetargetofGDPenergyintensitywillstillbetomaintainanaverageannualreductionof3%orhigher.Theproportionofnon-fossilfuelswillreach20-25%,andtheaimwillbetomaintainanaverageannualgrowthrateof6-8%.Thetotalannualenergydemandgrowthof1.5%willbesatisfiedbythenewlyincreasedsupplyofnon-fossilfuels.TheannualdeclineinCO2intensityofGDPwillreach4.5%orhigher,whichiscompatiblewithanaverageannualGDPgrowth
简介:应用食蚊鱼细胞色素P450芳香化酶基因(CYP19α)、卵黄蛋白原基因(VTGα)和雌/雄激素受体基因(ERα/ARα)mRNA转录水平为指标,评价广州海珠涌和黄埔涌食蚊鱼受环境激素物质干扰产生雌/雄性化效应的现状。结果显示,海珠涌宝岗大道段(BG)、洪德路段(HD)和黄埔涌赤岗路段(CG)、苗艺路段(MY)采样点雌鱼性腺CYP19αmRNA表达水平显著降低。雌鱼肝脏VTGαmRNA的表达水平在夏冬两季CG点都显著升高,但在BG、HD和MY点的表达水平在冬季则显著下降;夏冬两季雌鱼雄激素受体ARαmRNA表达水平在各点都显著升高。雄鱼性腺CYP19αmRNA表达水平在各点都无明显差异,但CG点在夏季显著升高,而MY点在冬季则显著下降;雄鱼肝脏VTGα和雌激素受体ERαmRNA表达水平分别在各点都显著升高,但夏季MY点和冬季HD、MY各点无明显差异。结果表明,雌性食蚊鱼的VTGα和CYP19α基因受到不同程度的抑制,ERα较对照REF明显升高,表现出雄激素效应;雄性食蚊鱼VTGα和ERα转录水平较对照REF显著升高,CYP19α基因无显著性差异,表现出雌激素效应。生活在广州海珠涌和黄埔涌中的食蚊鱼受雌/雄激素物质干扰明显,表明河涌中环境激素污染严重。
简介:为揭示浑河重金属污染的潜在生态风险,分析测定了浑河野生鲫鱼体内重金属的残留水平以及肝和鳃组织中金属硫蛋白基因表达。对鱼体各组织中Cr、Cd、Pb、Cu和Zn含量的分析结果显示,各组织重金属含量的排序为肠〉肝〉鳃〉肌肉,且Zn含量最高(17.49~176.01mg·kg-1,以湿体质量计算),Cd含量最低(N.D.~0.57mg·kg-1,以湿体质量计算)。均值综合污染指数评价结果显示,浑河野生鲫鱼受到重金属的轻微污染,且从上游至下游呈现逐渐升高的趋势,其中,Cr、Pb和Zn对均值综合污染指数贡献较大。利用实时定量PCR方法分析鲫鱼肝组织金属硫蛋白基因表达发现,中、下游鲫鱼肝组织的金属硫蛋白基因表达水平较上游有所升高,且与肌肉组织综合污染指数具有较好相关性(R2=0.71),这表明金属硫蛋白基因可作为监测环境重金属污染的敏感标志物。