简介:摘要:停车换乘模式(P&R)通过在轨道站点周边设置停车设施,从而鼓励转乘公共交通出行,是现阶段缓解城市拥堵的重要手段。文章创新性的从停车换乘设施的经济可行性的角度分析了制约P&R模式发展的因素,提出适合的设施类型和支持政策。分析了停车场类型、设施利用率、配建比例、收费价格、土地价格、差异化的政策支持这6个因素对停车换乘设施的经济运行指标的影响。研究显示,在没有政策支持下,地下两层停车场的内部收益率高和回收期短。减低土地成本和对单次停车予以补贴的政策能够提高设施的内部收益率和降低回收期。
简介:【摘要】低年级的英语课程设置为口语课程,主要培养学生听、说能力,要为学生打下扎实英语学习基础,除了听、说能力还应对学生进行字母教学,扩大词汇量,辅助学生阅读,积累语言,在低年级的口语课堂实施L.O.P.教学模式(L指Letters字母-O指的是Oral expression口语表达-P指的是Picture books绘本阅读)能关注到为学生英语打下扎实根基的几个关键点,培养学生关键的能力,有效为学生打下扎实的英语学习基础。
简介:摘要:3P教学法起源于交际教学法,可操作性强。本文旨在结合实例,探索3P教学法在高中英语语法教学中的具体实施操作办法。
简介:摘要目的探讨微小RNA-139-5p(miR-139-5p)在食管鳞状细胞癌(ESCC)发生发展中的作用及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响和分子机制。方法收集2017年2月至2018年3月在郑州大学第一附属医院胸外科手术获得的75例ESCC组织和癌旁正常食管组织标本。实验分2组:ESCC(n=75)和正常食管组织(n=75)。采用GEO数据集和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ESCC组织和细胞中miR-139-5p的表达。将miR-139-5p抑制剂、miR-139-5p模拟物、阴性对照、对照siRNA、T盒转录因子1(TBX1) siRNA、pcDNA3.1和pcDNA3.1-TBX1转染ESCC Eca109和TE1细胞,用qRT-PCR检测转染后ESCC细胞中miR-139-5p和TBX1的表达水平,分别用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和Transwell小室检测ESCC细胞的增殖和侵袭。双荧光素酶报告实验分析miR-139-5p与TBX1的相互作用,qRT-PCR、Western印迹法和免疫组织化学检测TBX1在ESCC组织中的表达,Western印迹法检测转染后E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。结果ESCC组织中miR-139-5p水平明显低于正常组织(1.17±0.43比5.16±3.62,P<0.001)。Log-rank检验发现,高miR-139-5p表达水平的ESCC患者(n=43)生存率显著高于低miR-139-5p水平的ESCC患者生存率(n=32)(67.44%比25.00%,P=0.005)。ESCC细胞中miR-139-5p的表达水平均显著低于正常食管上皮细胞Het-1A(均P<0.001)。miR-139-5p高表达的Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭能力明显低于阴性对照(NC)转染的Eca109和TE1细胞(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验表明,miR-139-5p能结合致TBX1的3′-非翻译区。miR-139-5p模拟物或抑制剂分别抑制或促进Eca109和TE1细胞TBX1蛋白表达(均P<0.05)。TBX1下调显著抑制Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭,而TBX1的过表达显著促进Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭(均P<0.05)。此外,pcDNA3.1-TBX1能部分逆转miR-139-5p介导的细胞侵袭能力的抑制(均P<0.05),而TBX1 siRNA能部分逆转miR-139-5p抑制剂介导的侵袭能力的增强(均P<0.05)。结论miR-139-5p通过靶向TBX1抑制ESCC细胞的增殖和侵袭。
简介:摘要目的探究circ_0023990对甲状腺癌细胞放射敏感性的影响及可能机制。方法采用逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测2016年8月至2018年11月于河南省人民医院就诊的55例甲状腺癌患者[其中男12例,女43例,年龄(53.3±7.3)岁]癌组织及甲状腺癌细胞系(TPC-1、KTC-1、FTC-133和CAL-62)中circ_0023990的表达,分析癌组织中circ_0023990表达与患者临床病理特征的关系。甲状腺癌细胞TPC-1和KTC-1均分为circ_0023990小干拢RNA(sh-circ_0023990)组、无意义阴性序列(sh-NC)组、sh-circ_0023990+miR-873-5p抑制剂(anti-miR-873-5p)组、sh-circ_0023990+阴性对照序列(anti-miR-NC)组、miR-873-5p组、对照序列(miR-NC)组、miR-873-5p+pcDNA-ANXA2组和miR-873-5p+pcDNA组,克隆形成实验检测细胞放射敏感性;且各组细胞用4 Gy放射线照射后,蛋白质印迹法检测细胞中γH2AX蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0023990与miR-873-5p及miR-873-5p与ANXA2的靶向关系。结果circ_0023990在甲状腺癌组织表达高于正常组织(2.15±0.09比0.97±0.05,P<0.05),且其表达与甲状腺癌患者肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05)。甲状腺癌TPC-1、KTC-1、FTC-133和CAL-62细胞中circ_0023990表达高于正常甲状腺细胞HTori-3(3.16±0.38、2.63±0.28、1.82±0.24、1.71±0.22比1.00±0.10,P均<0.05)。sh-circ_0023990组TPC-1和KTC-1细胞存活分数明显低于sh-NC组(P<0.05),增敏比分别为2.482、1.643;sh-circ_0023990+anti-miR-873-5p组TPC-1和KTC-1细胞存活分数高于sh-circ_0023990+anti-miR-NC组(P<0.05),增敏比分别为0.305、0.441。miR-873-5p组TPC-1、KTC-1细胞存活分数低于miR-NC组(P<0.05),增敏比分别为2.044、1.653;miR-873-5p+pcDNA-ANXA2组TPC-1、KTC-1细胞存活分数高于miR-873-5p+pcDNA组(P<0.05),增敏比分别为0.496、0.686。4 Gy+sh-circ_0023990组TPC-1和KTC-1细胞中γH2AX蛋白表达高于4 Gy+sh-NC组(2.68±0.27比1.87±0.25,2.46±0.19比1.77±0.14;P均<0.05),4Gy+sh-circ_0023990+anti-miR-873-5p组TPC-1和KTC-1细胞中γH2AX蛋白表达低于4 Gy+sh-circ_0023990+anti-miR-NC组(1.13±0.09比1.69±0.09,1.11±0.08比1.60±0.08,P均<0.05);4 Gy+miR-873-5p组TPC-1和KTC-1细胞中γH2AX蛋白表达高于4 Gy+miR-NC组(2.35±0.16比1.84±0.14,2.26±0.12比1.77±0.13,P均<0.05),4Gy+miR-873-5p+pcDNA-ANXA2组TPC-1和KTC-1细胞中γH2AX蛋白表达低于4 Gy+miR-873-5p+pcDNA组(1.96±0.12比2.41±0.12,1.92±0.07比2.28±0.12,P均<0.05)。circ_0023990靶向负调控miR-873-5p,而ANXA2是miR-873-5p的靶基因。结论circ_0023990在甲状腺癌组织和细胞系中呈高表达,其可能通过靶向调控miR-873-5p/ANXA2轴促进体外甲状腺癌细胞放疗抗性。