简介:摘要目的建立吉祥草中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法。方法以丙酮-石油醚(1∶1v/v)的混合溶液浸提吉祥草中β-胡萝卜素。色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺(80∶10∶10∶0.05);流速1.0ml·min-1;柱温20℃;检测波长为450nm。进行了线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率等项的考察。结果β-胡萝卜素的质量浓度在0.0074~0.0666μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.33%,稳定性400分钟内RSD=1.94%。结论该法专属性强,结果准确,重现性好,可用作吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定方法。
简介:摘要目的探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)在毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导胰腺癌细胞上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用及其机制。方法免疫组化检测CRT在胰腺癌组织中表达差异,分析其与胰腺癌患者临床病理学参数的关系。免疫印迹和Transwell检测CRT沉默对TG诱导EMT表型影响。Fluro-4/AM和共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞胞浆内钙离子水平。结果CRT在胰腺癌组织中高表达(P<0.01),与淋巴结转移(P=0.017)、UICC分期(P=0.021)呈正相关,与E钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达呈负相关(P=0.013)。CRT高表达联合E-cad低表达胰腺癌患者预后不良(P=0.023)。在胰腺癌细胞中,TG诱导EMT表型被CRT沉默所逆转。同时,CRT沉默能够抑制TG诱导胰腺癌胞浆内钙离子增加。结论CRT通过介导TG对胞浆内钙离子调控,最终促进胰腺癌细胞EMT的发生。
简介:摘要目的运用坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis, NEC)新生小鼠模型,探讨β-胡萝卜素对NEC新生小鼠肠道损伤的作用。方法选用5日龄C57BL/6新生小鼠15只,按随机数字法分为三组,每组5只。对照组:母鼠哺乳喂养,无其他任何干预;NEC组:通过对新生小鼠缺氧刺激,人工喂养及脂多糖干预诱导产生NEC;β-胡萝卜素干预组:在诱导产生NEC的同时,给予新生小鼠胃管灌注β-胡萝卜素(1 mg/kg)。于生后第9日收集各组新生小鼠末端回肠组织,分析比较NEC病理评分,肠道炎症反应,肠上皮细胞增殖、凋亡及氧化应激水平。结果与对照组相比,NEC组肠道出现明显损伤(0/5比5/5,P<0.05),炎症反应(1.0122±0.03比9.5367±3.025,P<0.01)及氧化应激水平(TBARS 6.9292±0.129比11.4420±0.074,P<0.01; GPx 25.21±7.113比17.5674±5.769,P<0.01)明显升高,肠上皮细胞增殖能力下降(5.36±0.308比1.48±0.212,P<0.01),且凋亡增多(2.5683±0.39比5.4974±0.967,P<0.01);与NEC组相比,β-胡萝卜素干预组的肠道组织损伤程度明显降低(5/5比1/5,P<0.05),肠道组织炎症减轻(9.5367±3.025比5.7871±1.489,P<0.01),氧化应激水平明显下降(TBARS 11.4420±0.074比8.1148±0.013,P<0.01;GPx 17.5674±5.769比35.1576±11.077,P<0.01),肠道上皮细胞增殖能力增强(1.48±0.212比3.8±0.1,P<0.01),凋亡减少(5.4974±0.967比3.7773±0.772,P<0.05);干预组肠道组织损伤程度及凋亡水平较NEC组有所改善的同时,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论β-胡萝卜素可通过降低肠道氧化应激水平来减轻NEC新生小鼠肠道损伤程度,缓解肠道炎症反应,促进肠上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡。提示β-胡萝卜素对NEC新生小鼠肠道损伤具有保护作用。
简介:目的:探讨毒胡萝卜紊诱导大鼠皮层神经元内质网应激凋亡的机制及丹红注射液的干预作用。方法:体外培养SD乳鼠皮层神经元,免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度。流式细胞术AnnexinV、PI双标检测凋亡率及活性caspase-3、caspase-8、caspase-7、caspase-9表达,WesternNoting免疫印迹分析caspase-12、GRP78、Bcl-2、细胞色素C蛋白表达,Fura-2/AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度([Ca^2+]i)。结果:SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养。2μmol/L毒胡萝卜素作用神经元24、48h细胞凋亡率分别是17.88%、21.38%,丹红治疗组分别是6.30%、6.11%,两组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。毒胡萝卜素诱导神经元GRP78表达上调,剪切活化caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12,使细胞色素C表达增加,Bcl-2表达减少。丹红注射液促进细胞Bcl-2表达,抑制细胞色素C释放,减少活化的caspase-3、caspase-8、caspase-9含量,稳定游离钙浓度。结论:毒胡萝卜素诱导神经元内质网应激反应性凋亡。丹红注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致凋亡。