简介：摘要目的探讨JAK2、MPL和CALR驱动基因突变情况与BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤（MPN）的3种疾病类型[原发性骨髓纤维化（PMF）、真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）]选择间的关系。方法采用高通量测序靶向检测156例BCR-ABL阴性MPN患者的32种MPN相关基因，分析患者一般情况、驱动基因及伴随基因突变特点等因素与MPN疾病类型的关系。结果患者疾病类型与年龄关系的分析显示，在JAK2 V617F阳性状态下，PMF患者中60岁以上者的比例较高。通过高通量测序检测，在46例JAK2、MPL或CALR突变患者中检出22种伴随异常基因，其中PV 4例（8.3%），ET 20例（29.4%），PMF 22例（55.0%）。PV仅检出DNMT3A突变，而剪接因子相关基因SF3B1、SRSF2和U2AF1突变仅出现在PMF患者。根据JAK2 V617F突变的变异等位基因频率（VAF值）进行对比分析，结果显示，PV相关的VAF值最高（68.15%），其次为PMF（37.7%）和ET（23.0%），而MPN的3种疾病类型间JAK2 V617F纯合状态比例的差异有统计学意义。且在JAK2突变阳性状态下，PV和ET患者基因突变个数均明显低于PMF。结论MPN患者的年龄、驱动基因（JAK2、MPL和CALR）的突变特点（VAF值、纯合状态）以及伴随异常基因的种类和突变个数等因素，与驱动基因突变状态下MPN疾病类型的选择密切相关，其相关性有助于我们进一步认识MPN和早期评估疾病风险。

简介：为了探索CML的治疗新思路研究了siRNA(smallinterferingRNA)对K562细胞株bcr-abl融合基因表达的抑制作用.制备特异性对应bcr-abl融合基因的siRNA,转染K562细胞株,采用RT-PCR法测定bcr-abl融合基因mRNA的表达.结果表明:siRNA对bcr-abl基因表达的抑制作用随浓度的增加而增强,0.2μgsiRNA能使bcr-abl融合基因mRNA的表达在24和48小时分别降低至对照组的19.9%和26.6%,但72小时时恢复到原水平,同时转染siRNA后细胞生长受到抑制.结论:siRNA可以有效的抑制K562细胞株中bcr-abl融合基因的表达.

简介：本文报告了BCR-ABL，融合蛋白及其与白血病表型的关系。首先报告BCR-ABL，融合基因的结构及其转录本，其中包括这些融合基因可分为M-bcr，m-bcr和u-bcr三种类型及其见于那些白血病；其次报告了BCR断点位置的变化，ABL的特殊断点，BCR-ABL信息RNA的拼接，BCR-ABL融合蛋白的结构与白血病表型的关系；此外，还介绍了BCR／ABL细胞有染色体的其它异常和Ph染色体的变种等；最后论述了BCR／ABL融合蛋白起源于何种细胞系，何种成熟阶段。少数文献报告此蛋白起始于多能干细胞。

简介：摘要目的探讨BCR-ABL p210融合基因阳性急性髓系白血病的临床特点。方法对嘉兴市第二医院确诊的1例BCR-ABL p210融合基因阳性急性髓系白血病患者的临床特征进行分析，并复习相关文献。结果通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及荧光原位杂交（FISH）等方法检测到该例患者存在费城染色体（Ph）及BCR-ABL p210融合基因，给予伊马替尼联合多药静脉化疗，疗效不佳。结论Ph+/BCR-ABL+急性髓系白血病患者临床少见，预后极差，目前无统一标准治疗方案。酪氨酸激酶抑制剂疗效尚不明确，联合化疗及造血干细胞移植有望改善预后。

简介：慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的免疫治疗是清除白血病微小残留病并最终根治ＣＭＬ的方向之一，包含ＢＣＲ－ＡＢＬ融合区的多肽具有良好的免疫原性，在体内、外可诱发ＢＣＲ－ＡＢＬ特异的Ｔ细胞克隆。以ＢＣＲ－ＡＢＬ融合肽瘤苗激发特异性Ｔ细胞应答ＣＭＬ免疫治疗有希望成为根治ＣＭＬ残留白血病的有效手段。本实验通过基因工程技术，设计一个２８０ｂｐ的融合抗原基因片段，包含ＨＬＡ－Ａ２，ＨＬＡ－Ａ３，ＨＬＡ－ＤＲ１１等３

简介：摘要骨髓增殖性肿瘤（MPN）是一组造血干细胞克隆性疾病，JAK2V 617F基因突变为MPN诊断的主要依据。既往研究显示MPN患者BCR-ABL融合基因与JAK2 V617F基因突变是互相排斥的，但近年来两种基因双突变病例时有报道。文章综合近年来国内外相关文献，对BCR-ABL融合基因与JAK2 V617F突变双阳性的MPN进行综述。

简介：摘要慢性髓细胞白血病(CML)患者的BCR-ABL融合基因转录本类型表现多样，不同转录本表达不同的融合蛋白。伴不同BCR-ABL融合基因转录本CML患者的发病率、临床与血液学特征、临床转归均不统一。根据CML患者的BCR-ABL融合基因转录本类型，可以帮助诊断，指导酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物选择及治疗监测。为了明确CML中不同BCR-ABL融合基因转录本的临床意义，笔者拟就伴不同BCR-ABL融合基因转录本CML患者的临床特征及预后生存的研究进展进行综述。

简介：Bcr-Abl融合基因与慢性粒细胞白血病（CML）的发病发展密切相关。直接作用于Bcr-Abl蛋白的小分子药物是目前治疗CML的重要方法,受到广泛的关注。伊马替尼作为首个上市的Bcr-Abl蛋白激酶抑制剂,在靶向治疗慢性粒细胞白血病上取得了很大成功,但Bcr-Abl基因的突变导致其出现耐药性,尤其以Abl-T315I突变的耐药程度最高。本文综述了近年正在开发中的针对Abl-T315I突变的Bcr-Abl蛋白激酶抑制剂。

简介：摘要目的探讨BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms，MPN）患者的肝脾硬度情况，并分析其临床意义。方法河北中石油中心医院2018年6月至2020年6月用肝硬度检测仪（fibroScan 502）对健康志愿者15例及BCR-ABL阴性MPN患者27例进行肝脏硬度（liver stiffness measurement，LSM）、脾脏硬度（spleen stiffness measurement，SSM）进行检测，并进一步分析其临床相关性。结果MPN组LSM、SSM、SSM-LSM均高于健康组（6.34±2.22）kPa比（5.07±1.27）kPa，（26.00±10.66）kPa比（13.61±5.64）kPa，（19.65±10.37）kPa比（8.54±5.33）kPa，差异均有统计学意义（t=-2.01、-4.30、-4.06，均P < 0.05）。PLT与LSM、SSM呈负相关（r=-0.39、-0.42）；WBC与SSM-LSM呈负相关（r=-0.40）；尿酸与LSM呈负相关（r=-0.54），而与SSM呈正相关（r=0.41）；B淋巴细胞百分比与SSM、SSM-LSM呈负相关（r=-0.56、-0.56）；病态巨核细胞百分比与SSM呈正相关（r=0.40），铁粒幼细胞百分比与LSM呈负相关（r=-0.44），差异均有统计学意义（均P < 0.05）。结论MPN患者SSM、LSM与白细胞、血小板、尿素、B淋巴细胞百分比、病态巨核细胞、铁粒幼细胞百分比等临床指标密切相关，动态监测LSM、SSM，将来或可联合骨髓检查对MPN患者进行病情评估。

简介：本研究确切了解CML患者异基因造血干细胞移植后bcr—ablmRNA的变化情况，为临床诊断早期复发提供实验依据。用实时荧光定量PCR方法检测15例慢性粒细胞白血病（CML）患者异基因造血干细胞移植前后78份外周血和骨髓标本的bcr—ablmRNA水平。结果表明，移植前患者的bcr—ablmRNA水平较高，中位数为29．303％；移植后1个月时检测bcr—ablmRNA水平较移植前大幅度降低，中位数为0；移植后1年内，连续多次检测bcr—ablmRNA水平，变化模式不一致，但6个月后的总体水平较6个月前明显降低，移植1年以上的受者绝大多数bcr—ablmRNA检测不到，或偶可检测到，但水平极低（0．007％、0．004％和0．021％），所检测受者的骨髓和外周血像均正常；同期骨髓与外周血bcr—abl水平无明显差异，且变化趋势一致。结论：CML患者移植后早期bcr—abl水平变化起伏较大，连续动态检测可明确其变化趋势，有助于判断移植效果、指导临床治疗，但6个月前检测到bcr—abl存在并不提示疾病复发；检测外周血bcr—abl或许更适于临床上对患者的随访。

简介：摘要目的探讨JAK2 V617F基因突变状态及负荷对BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤（MPN）的影响。方法回顾性分析2015年9月至2020年1月河北省沧州市中心医院199例MPN患者的临床资料。分析JAK2 V617F突变负荷与MPN患者临床病理特征及预后评分的关系。结果199例BCR-ABL阴性MPN患者中JAK2 V617F突变阳性138例（69.4%）；其中，72例真性红细胞增多症（PV）患者中突变阳性64例（88.9%），101例原发性血小板增多症（ET）患者中突变阳性54例（53.5%），25例骨髓纤维化（MF）患者中突变阳性20例（80.0%），1例嗜酸粒细胞增多症（HES）患者突变阳性。JAK2 V617F突变高负荷者占55.1%（76/138）。突变负荷最高的类型为PV，MF次之，ET最低，3组突变负荷分别为（73.9±18.3）%、（59.9±25.2）%、（25.0±16.5）%。JAK2 V617F突变负荷与PV、ET、MF患者的白细胞计数均呈正相关（r值分别为0.626、0.675、0.796，均P<0.01）。JAK2 V617F突变负荷与PV、ET患者的预后评分均呈正相关（r值分别为0.296、0.404，均P<0.05）。结论BCR-ABL阴性MPN患者JAK2 V617F突变负荷与临床病理因素相关，JAK2 V617F突变高负荷患者预后不良。

简介：目的探讨慢性期慢性粒细胞白血病患者BCR-ABL和PTENmRNA表达的变化及临床意义。方法观察43例慢性期慢性粒细胞白血病患者，基于6个月BCR-ABL是否下降≥10％分为两组，比较组内及组间PTEN表达水平的关系。结果有效组患者初治时和伊马替尼治疗6个月后PTENmRNA表达水平差异有统计学意义（P=0．031），无效组差异无统计学意义（P=0．455）。两组患者6个月后PTEN表达水平较初治时升高倍数间差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗有效组BCR-ABL与PTEN表达水平呈负相关（r=3．174，P〈0．01）。结论慢性粒细胞白血病中，PTEN表达量随着BCR-ABL水平的变化而变化，并且治疗有效组PTEN与BCR-ABL水平呈负相关。

简介：Objective:Toinvestigatetheinvitrocleavageabilityandeffectsonapoptosisandcellgrowthofthebcr-ablfusiongenespecificmulti-unitribozymes.Methods:Threefusionpointspecificribozymesweredesignedandthemulti-unitribozymes'invitrotranscriptionvectorandretroviralvectorwereconstructed.Theinvitrocleavageabilitywastested.TheretroviralvectorwastransfectedintoK562cellandtheeffectsonproliferation,apoptosis,cellcycleandcellstructurewereobserved.Results:Multi-unitribozymeshadinvitrocleavageefficiencyof70.8%,whichwasmoreefficientthansingle-unitanddouble-unitribozymes.TransfectionoftheretroviralvectoroftheribozymeintoK562cells,inducedinhibitionofcellgrowthandapoptosis.TheincorporationrateofDNAinribozymestransfectedK562cellswasgreatlydecreasedalongwithtimepassed,withaninhibitionrateofmorethan50%after96hoftransfection.UnderFCM,18.4%ofthecellsunderwentapoptosis72haftertransfectionandmorecellswereblockedinGphase,withtheratioinSphasegreatlydecreased(41.9%).Underelectronmicroscope,compactionofnuclearchromatinandapoptosisbodieswereobserved.Conclusion:Multi-unitribozymesspecifictobcr-ablfusiongenecanbeusedtotreatCMLandtopurgebonemarrowforself-grafting.

简介：目的：探讨实时荧光定量聚合酶链反应法（real-timePCR）检测BCR/ABL少见融合型别在BCR/ABL常见型别阴性慢性髓系白血病（CML）中的临床应用价值。方法：收集2012年7月至2015年12月期间FISH检测或染色体核型分析存在Ph染色体的CML病例2490例,其中BCR/ABLP210,P190和P230定量检测均为阴性的病例12例,对该12例样本采用实时荧光PCR法定量检测b2a3（e13a3）、b3a3（e14a3）、e6a2、e8a2和e1a3等5种罕见BCR/ABL融合型别。结果：12例样本中e1a3、e8a2、b2a3、b3a3和e6a2型别阳性分别为1、2、5、4和0例,阳性率分别为8.33%、16.67%、41.67%、33.33%和0%;总阳性率为100%,以b2a3型和b3a3型为主。结论：实时荧光PCR法定量检测BCR/ABL少见融合型别,可用于临床疑似CML而BCR/ABL常见型别定量检测阴性病例的诊断及微小残留病变监测。

简介：利用分子生物学方法,我们将K562细胞林bcr/ablmRNA0.3kb的接合区cDNA片段用聚合酶链反应扩增并插入到质粒pGEM-4-Z载体中。经限制酶切分析和荧光标记M13引物法DNA序列测定,证实重组质粒pB3A2中有0.3kb的插入片段与K562mRNA接合区序列完全一致。我们分离到的接合区DNA可用于bcr/abl基因的检测及其反义核酸抑制的研究。

简介：摘要目的探索慢性髓性白血病（CML）患者外周血样本的存储和运输对实时定量PCR（RQ-PCR）检测BCR-ABL（P210）转录本水平的影响。方法采集84例CML患者外周血样本，根据储存时间（0、6、12、24、48和72 h）、温度[室温（18~24 ℃）和低温（2~8 ℃）]以及振荡条件（振荡时长3、6和12 h）设置不同分组，RQ-PCR法检测不同条件下外周血样本BCR-ABL（P210）转录本水平。本研究将BCR-ABL拷贝数、ABL拷贝数和BCR-ABL（P210）转录本水平等原始数据进行对数转化（log10N）。结果①琼脂糖凝胶电泳结果显示：室温条件下，储存48、72 h的样本RNA出现显著降解；②储存温度方面，总体样本中，室温储存48、72 h的样本BCR-ABL拷贝数检测水平显著低于低温储存的样本（P<0.05）；然而BCR-ABL（P210）转录本水平在低温储存与室温储存条件下检测结果差异无统计学意义（P>0.05）；③储存时间方面，与基线的3.35±1.60相比，总体样本的BCR-ABL拷贝数检测结果仅在室温储存储存下48 h（2.93±1.59）和72 h（2.79±1.42）显著下降（P<0.05）；与基线的5.47±0.35相比，总体样本中ABL拷贝数检测结果在48 h（低温5.29±0.30，室温5.06±0.38）和72 h（低温5.11±0.54，室温4.64±0.79）均显著下降（P<0.05）。但是，与基线的-0.56±1.51相比，无论低温或室温条件下，不同储存时间（6、12、24、48和72 h）的样本BCR-ABL（P210）转录本水平检测结果无显著改变（P>0.05）；④振荡方面，与基线的-0.60±1.37相比，振荡3、6、12 h的样本BCR-ABL（P210）转录本水平检测结果无显著改变（P>0.05）。结论样本储存时间、储存温度及运输振荡因素可以影响BCR-ABL、ABL拷贝数的检测结果，但对BCR-ABL（P210）转录本水平定量检测结果无显著影响。

简介：摘要目的探索慢性髓性白血病（CML）患者外周血样本的存储和运输对实时定量PCR（RQ-PCR）检测BCR-ABL（P210）转录本水平的影响。方法采集84例CML患者外周血样本，根据储存时间（0、6、12、24、48和72 h）、温度[室温（18~24 ℃）和低温（2~8 ℃）]以及振荡条件（振荡时长3、6和12 h）设置不同分组，RQ-PCR法检测不同条件下外周血样本BCR-ABL（P210）转录本水平。本研究将BCR-ABL拷贝数、ABL拷贝数和BCR-ABL（P210）转录本水平等原始数据进行对数转化（log10N）。结果①琼脂糖凝胶电泳结果显示：室温条件下，储存48、72 h的样本RNA出现显著降解；②储存温度方面，总体样本中，室温储存48、72 h的样本BCR-ABL拷贝数检测水平显著低于低温储存的样本（P<0.05）；然而BCR-ABL（P210）转录本水平在低温储存与室温储存条件下检测结果差异无统计学意义（P>0.05）；③储存时间方面，与基线的3.35±1.60相比，总体样本的BCR-ABL拷贝数检测结果仅在室温储存储存下48 h（2.93±1.59）和72 h（2.79±1.42）显著下降（P<0.05）；与基线的5.47±0.35相比，总体样本中ABL拷贝数检测结果在48 h（低温5.29±0.30，室温5.06±0.38）和72 h（低温5.11±0.54，室温4.64±0.79）均显著下降（P<0.05）。但是，与基线的-0.56±1.51相比，无论低温或室温条件下，不同储存时间（6、12、24、48和72 h）的样本BCR-ABL（P210）转录本水平检测结果无显著改变（P>0.05）；④振荡方面，与基线的-0.60±1.37相比，振荡3、6、12 h的样本BCR-ABL（P210）转录本水平检测结果无显著改变（P>0.05）。结论样本储存时间、储存温度及运输振荡因素可以影响BCR-ABL、ABL拷贝数的检测结果，但对BCR-ABL（P210）转录本水平定量检测结果无显著影响。

简介：摘要

简介：摘要目的分析酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药的慢性髓性白血病（CML）患者BCR-ABL激酶区突变状况、类型和影响因素。方法回顾性分析2001年6月至2019年9月就诊于北京大学人民医院并发生TKI耐药的CML患者的BCR-ABL激酶区突变状况。采用Sanger测序法检测BCR-ABL激酶区突变，二元Logistic回归模型进行多因素分析。结果共纳入804例CML患者，发生1 093例次TKI耐药，其中对伊马替尼、尼洛替尼、达沙替尼耐药分别为576（52.7%）、238（21.8%）、279（25.5%）例次。伊马替尼、尼洛替尼和达沙替尼耐药患者BCR-ABL突变检出率分别为50.5%、63.9%和57.3%，T315I突变检出率均最高，分别为12.3%、27.3%和34.1%。此外，检出率≥5%的突变类型在伊马替尼耐药患者中为Y253F/H（7.5%）和F359V/C/I（5.6%），在尼洛替尼耐药患者中为F359V/C/I（12.2%）、Y253F/H（11.8%）和E255K/V（10.5%），在达沙替尼耐药患者中为F317L/V/I/C（11.5%）和E255K/V（5.4%）。多因素分析显示，TKI减停用药史是影响BCR-ABL突变检出的共同因素，无TKI减停用药史患者突变检出率更高。此外，男性、年龄小、无共存疾病、诊断至服用当前TKI间隔较长、开始服用当前TKI时为进展期、继发耐药、耐药时处于进展期或血液学耐药与较高比例检出BCR-ABL突变相关。发生治疗失败至筛查BCR-ABL突变时间间隔、耐药时当前TKI和总TKI服用时间也与突变检出率相关。服用达沙替尼或尼洛替尼、继发耐药与检出T315I突变相关。结论CML患者发生TKI耐药时，半数以上的患者检测出BCR-ABL突变，其中T315I突变比例最高，人口学、疾病状态和TKI用药等临床特征与BCR-ABL突变的检出率和类型相关。

简介：摘要目的探讨RAF抑制剂SB590885、JAK抑制剂AZD1480、PI3K-mTOR双靶点抑制剂BEZ235等BCR-ABL下游通路抑制剂体外对慢性粒细胞白血病（CML）细胞的作用及BEZ235对CML细胞增殖、凋亡及伊马替尼敏感性的影响。方法用不同浓度药物处理K562细胞，采用MTS法检测K562细胞的增殖抑制率，计算各药物48 h半数抑制浓度（IC50）；采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率，流式细胞术PI单染色法检测细胞周期。以不同浓度药物处理K562细胞、伊马替尼耐药的T315I突变的人CML KBM7R细胞、伊马替尼耐药的CML患者原代细胞，采用MTS法检测细胞增殖抑制率，分别计算各药物48 h的IC50。分别单用1.0 μmol/L BEZ235、1.0 μmol/L伊马替尼或两者联合处理KBM7R细胞或CML患者原代细胞，采用流式细胞术PI单染色法检测KBM7R细胞周期，流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测CML患者原代细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测KBM7R细胞p-AKT、cleaved Caspase-3、Cyclin D1蛋白的表达情况。结果SB590885、AZD1480、BEZ235均能抑制K562细胞的增殖，三者处理K562细胞48 h的IC50分别为（11.49±3.14）、（4.83±1.26）、（0.37±0.21）μmol/L。SB590885、AZD1480、BEZ235均能促进K562细胞的凋亡，与未经药物作用的对照组比较，细胞凋亡率均升高（均P<0.01）。SB590885和BEZ235诱导细胞G0/G1期阻滞（均P<0.05），AZD1480诱导细胞G2/M期阻滞（P<0.05）。BEZ235可抑制K562、KBM7R细胞以及患者原代细胞的增殖，其48 h的IC50分别为（0.37±0.21）、（0.43±0.27）、（0.49±0.24）μmol/L。与单用伊马替尼组相比，0.2 μmol/L BEZ235与不同浓度伊马替尼联用可增加对K562、KBM7R细胞和患者原代细胞的增殖抑制，降低伊马替尼的IC50，其中，伊马替尼单用和联合BEZ235处理48 h后，K562细胞的伊马替尼IC50分别为（0.14±0.05）、（0.09±0.04）μmol/L（t=1.351，P=0.249），KBM7R细胞分别为（3.93±2.29）、（0.44±0.22）μmol/L（t=2.837，P=0.047），原代细胞分别为（3.12±1.53）、（0.39±0.23）μmol/L（t=3.925，P=0.042）。未经药物作用的对照组、单用1.0 μmol/L BEZ235、单用1.0 μmol/L伊马替尼及两药联合处理24 h后患者原代细胞凋亡率分别为（4.9±1.4）%、（13.1±3.2）%、（8.8±2.0）%、（40.6±6.0）%，差异有统计学意义（F=71.031，P<0.01）。与单用伊马替尼相比，BEZ235联合伊马替尼处理12 h的KBM7R细胞p-AKT、Cyclin D1蛋白的表达降低，cleaved Caspase-3蛋白的表达升高。结论BCR-ABL下游通路抑制剂可有效抑制K562细胞的增殖，促进细胞凋亡。BEZ235能够抑制K562细胞、伊马替尼耐药的T315I突变的KBM7R细胞以及伊马替尼耐药的CML患者原代细胞的增殖，促进细胞凋亡，与伊马替尼具有协同作用。