简介:[摘要 ] 目的:探讨半枝莲对肿瘤细胞周期阻滞机制。方法:检索 TCMSP获取半枝莲活性化合物,从 Drug bank等数据库检索作用靶点,导入 Metascape进行 GO功能富集和 KEGG通路富集,运用 Cytoscape构建化合物 -靶点 -生物功能 -信号通路 -药理作用的网络。结果:获得活性化合物 11个;靶点 12个; GO功能 BP过程 10条;信号通路 hsa04110。结论:半枝莲可能抑制 DNA损伤检查点关键蛋白,进而阻滞肿瘤细胞周期。
简介:摘要面对各种因素导致的DNA损伤,细胞有一套应答修复机制。其中细胞周期阻滞在DNA损伤应答修复中扮演了重要角色,为修复受损DNA创造了条件。关于细胞周期调控的研究集中于细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与细胞周期检查点等方面。在DNA损伤修复过程中,损伤位点募集的磷脂酰肌醇-3-激酶样激酶(PIKKs)可引起细胞周期检查点相关蛋白的激活,导致细胞周期阻滞。在碱基切除修复、核苷酸切除修复、错配修复、DNA双链断裂修复等常见的DNA损伤修复途径中,招募的损伤修复相关蛋白在细胞周期调控中也起到一定的作用。因此综述了主要DNA损伤修复形式与细胞周期阻滞之间的关系及研究进展。
简介:摘要目的探讨阿魏酸通过调节磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路诱导食管癌细胞周期阻滞和自噬的机制。方法2018年12月至2019年6月于中国科学院细胞库购买食管癌细胞ECA109和正常细胞Het-1A进行实验;体外培养食管癌细胞ECA109,分别使用不同浓度的阿魏酸作用正常细胞Het1-A和食管癌细胞ECA109,检测阿魏酸对两者的毒性影响。将食管癌细胞分为:对照组(Ctrl)、低剂量阿魏酸组(5 μmol/L)、中剂量阿魏酸组(10 μmol/L)和高剂量阿魏酸组(20 μmol/L);分别使用对应剂量的阿魏酸处理食管癌细胞,使用蛋白质印迹检测细胞核增殖抗原(Ki-67)和增殖细胞核抗原(PCNA)、周期相关蛋白p21、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、Cyclin E的表达、自噬相关蛋白p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达、PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达;使用免疫荧光检测LC3水平;加入通路激活剂3-methyladenine 5 mmol/L后,再次蛋白质印迹检测通路相关蛋白的表达、不同周期细胞比例和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值。采用SPSS 22.0对所得的数据进行分析,组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。结果与Ctrl组比较,10 μmol/L组Ki-67、PCNA、Cyclin D1、Cyclin E、p62蛋白,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比例,S期细胞比例均显著降低(1.22±0.10、1.03±0.15、0.86±0.08、1.10±0.08、0.81±0.13、0.81±0.13、0.71±0.15、0.66±0.14、43.00±4.00比0.81±0.03、0.67±0.07、0.51±0.09、0.54±0.06、0.54±0.07、0.45±0.07、0.37±0.06,t= 3.515、4.508、5.201、4.607、8.069、8.316、7.721、5.569、5.257,P均<0.05);与Ctrl组比较,20 μmol/L组Ki-67、PCNA、Cyclin D1、Cyclin E、p62蛋白,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比例,S期细胞比例均显著降低(1.22±0.10、1.03±0.15、0.86±0.08、1.10±0.08、0.81±0.13、0.81±0.13、0.71±0.15、0.66±0.14、43.00±4.00比0.37±0.06、0.19±0.08、0.14±0.05、0.19±0.03、0.12±0.03、0.23±0.04、0.14±0.03,t=5.210、8.687、8.390、7.587、11.369、13.368、12.114、9.017、10.007,P均<0.05)且20 μmol/L组低于10 μmol/L组;与Ctrl组比较,10 μmol/L组p21蛋白、每个细胞中LC3+数目、G0/G期细胞比例、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值显著升高(t=5.970、6.301、8.987、9.237,P均<0.05)。与Ctrl组比较,20 μmol/L组p21蛋白、每个细胞中LC3+数目、G0/G期细胞比例、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值显著升高(0.25±0.09、0.06±0.02、42.00±5.00、0.06±0.02比1.05±0.08、0.64±0.10、69.00±7.00、0.64±0.10,t=11.369、15.307、13.337、18.204,P均<0.05)且20 μmol/L组高于10 μmol/L组;与Ctrl组比较,加入通路激活剂组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值、S期细胞数目显著升高(0.81±0.13、0.71±0.15、0.66±0.14比1.26±0.05、1.09±0.06、0.88±0.08,t=5.021、4.018、3.997、7.251,P均<0.05),G0/G期细胞比例、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ的比值显著降低(t=5.778、6.017,P均<0.05);与加入通路激活剂组比较,加入阿魏酸20 μmol/L和通路激活剂组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值、S期细胞比例显著降低(1.26±0.05、1.09±0.06、0.88±0.08比0.83±0.09、0.74±0.06、0.70±0.04,t=2.361、2.875、3.018、3.116,P均<0.05),G0/G期细胞比例、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ的比值显著升高(t=2.698、3.014,P均<0.05)。结论阿魏酸使用剂量>10 μmol/L时可以有效激活食管癌细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进食管癌细胞的自噬,抑制其增殖并将管癌细胞周期阻滞于G0/G期。
简介:目的了解晚期糖基化终末产物(AGE)对表皮角质形成细胞细胞周期的影响及其可能的信号通路。方法体外制备AGE修饰的蛋白质(AGE—HSA,150m-g/L)作为干预手段。将原代培养的表皮角质形成细胞分为:正常组,采用无血清DK—SFM培养液培养;AGE干预组,采用含150mg/LAGE—HSA的DK—SFM培养液培养;对照组以10μmol/LU0126处理后同正常组条件培养;干预对照组以上述U0126处理后同AGE干预组条件培养。采用流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1、B1以及细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)和p44/42丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达。结果与正常组比较,AGE干预组s期和G2/M期细胞百分比均显著降低(P〈0.05);对照组、干预对照组G2/M期细胞百分比亦显著降低,分别为(9.7±1.1)%、(9.8±0.7)%(P〈0.05)。与正常组比较,其余3组细胞周期蛋白D1表达下降,其中干预对照组该蛋白仅有微弱表达:正常组、AGE干预组CDK4、细胞周期蛋白B1、p44/42MAPK蛋白表达相似,对照组、干预对照组的3种蛋白表达显著低于前2组。结论AGE通过下调细胞周期蛋白D1的表达阻碍表皮角质形成细胞的细胞周期进程。
简介:本研究探讨研究三氧化二砷(As2O3)对人淋巴瘤Raji细胞株凋亡诱导的作用特点及其机制。用MTT比色法观察不同浓度As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应,电子显微镜观察不同浓度As2O3作用不同时间后细胞的凋亡形态,DNA-ladder琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带,流式细胞术检测Raji细胞凋亡、细胞周期分布。结果表明:1—8μmol/LAs2O3能明显抑制Raji细胞的活力,并存在一定的量效、时效关系。2—8μmol/L浓度的As2O3可以诱导Raji细胞周期阻滞及凋亡,而1μmol/LAs2O3不诱导细胞凋亡,只是通过细胞周期阻滞作用抑制细胞增殖。结论一定浓度三氧化二砷可以抑制Raji细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡。细胞周期阻滞伴随细胞凋亡而发生。
简介:目的研究姜黄素(Cur)对K562细胞和HL-60细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系。方法用流式细胞光度术对K562细胞和HL-60细胞进行细胞周期检测,用蛋白免疫印迹检测细胞周期蛋白水平。结果姜黄素0—10mg/L作用24h可将K562细胞和HL-60细胞阻滞于G0/G1期,该期细胞比例增加;阻断细胞从S期向G2/M期转化,G2/M期细胞比例减少;姜黄素作用24h减少K562细胞和HL-60细胞CyclinD1、CyclinB1的蛋白水平,但几乎不影响K562细胞和HL-60细胞CyclinA的蛋白水平。结论姜黄素扰乱K562细胞和HL-60细胞的细胞周期进程与CyclinD1和CyclinB1的蛋白水平减少有一定关系。
简介:目的:探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对人胆管癌QBC-939细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:PEITC处理QBC-939细胞后,采用MTT法检测细胞活力;运用流式细胞技术检测细胞凋亡率;Hoechst33342染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态;使用流式细胞技术检测细胞周期。设置对照组:加入和药物等体积的DMSO。结果:20、30、40、50μmol/L的PEITC作用于QBC-939细胞24h后,细胞活力分别为(88.07±2.40)%、(68.02±4.04)%、(52.57±1.91)%、(36.37±3.42)%,较对照组明显降低(P〈O.05);30μmol/L的PEITC处理QBC-939细胞12、18、24、48h后,细胞活力分别为(90.74±2.96)%、(78.22%±4.85)%、(69.67±4.58)%、(40.48±2.59)%,较对照组明显降低(P〈0.05)。QBC-939细胞经30μmol/L和50umol/L的PEITC作用处理24h后,细胞凋亡率分别为(30.51±2.77)%、(58.62±3.75)%,较对照组显著升高(P〈0.05);GJM期的细胞比例从(5.06±1.86)%上升到(16.96±2.71)%、(26.68±1.85)%,差异有统计学意义(P〈O.05)。结论:PEITC可通过诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞而发挥抗胆管癌作用,并具有时间-剂量依赖性。
简介:摘要目的探讨高压氧(HBO)联合替莫唑胺(TMZ)对肺癌A549细胞周期和凋亡的影响及其作用机制。方法人肺癌A549细胞培养完成后,按照实验设计分成对照组、HBO组、TMZ组和HBO+TMZ组,分别予以不作任何处处理、0.2 MPa HBO处理3 h、50 μmol/L TMZ处理24 h及0.2 MPa HBO预处理3 h后加入50 μmol/L TMZ处理24 h。CCK-8实验检测A549细胞增殖情况,流式细胞术检测A549细胞凋亡及细胞周期情况,Western blotting实验检测A549细胞AKT/mTOR信号通路蛋白的表达水平。结果HBO+TMZ组A549细胞存活率明显低于其他3组(P<0.05或P<0.01)。对照组、HBO组、TMZ组和HBO+TMZ组细胞凋亡率分别(6.73±1.47)%、(8.52±0.87)%、(32.78±3.49)%、(49.61±5.74)%,HBO+TMZ组细胞凋亡率明显高于其他3组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞周期实验结果显示,HBO+TMZ组中G2/M期A549细胞数量增加,细胞比例为35.81%,明显高于其他3组(P<0.05)。HBO+TMZ组A549细胞p-AKT和mTOR蛋白表达量明显低于其他3组(P<0.01)。结论HBO与TMZ联用能够明显提高对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,并诱导细胞凋亡,其作用机制是通过调控AKT/mTOR信号通路,将A549细胞阻滞在细胞的G2/M期实现的。
简介:摘要目的探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)对大鼠角质形成细胞细胞周期蛋白(Cyclin) D1的影响及其机制。方法体外培养原代大鼠角质形成细胞,免疫组织化学鉴定原代角质形成细胞;实验分组:对照组、pADM组、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路激动剂SKL2001组、pADM+Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535组;采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析大鼠角质形成细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子以及细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。两组间比较采用非配对t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果pADM组Wnt/β-catenin信号通路相关分子Wnt3a,β-catenin,LEF-1和细胞周期蛋白Cyclin D1表达水平高于对照组(Wnt3a,qPCR:2.489±0.414比1.210±0.242,t=4.068,P<0.05;Western blot:0.571±0.043比0.217±0.071,t=7.401,P<0.05;β-catenin,qPCR:2.594±0.244比0.818±0.188,t=9.877,P<0.05;Western blot:0.794±0.031比0.420±0.026,t=16.12,P<0.05;LEF-1,qPCR:2.816±0.190比0.896±0.090,t=9.702,P<0.05;Western blot:0.700±0.124比0.276±0.090,t=4.781,P<0.05;Cyclin D1,qPCR:2.708±0.305比0.922±0.095,t=15.720,P<0.05;Western blot:0.554±0.097比0.166±0.067,t=5.723,P<0.05);pADM+FH535组Wnt3a,β-catenin,LEF-1和Cyclin D1表达水平低于pADM组(Wnt3a,qPCR:0.350±0.049比0.964±0.159,F=49.890,P<0.05;Western blot:0.192±0.106比0.485±0.028,F=47.780,P<0.05;β-catenin,qPCR:0.431±0.149比0.919±0.074,F=39.430,P<0.05;Western blot:0.174±0.013比0.386±0.048,F=49.950,P<0.05;LEF-1,qPCR:0.502±0.067比0.954±0.112,F=79.130,P<0.05;Western blot:0.091±0.037比0.377±0.055,F=121.000,P<0.05;Cyclin D1,qPCR:0.264±0.049比0.962±0.037,F=105.500,P<0.05;Western blot:0.111±0.053比0.297±0.023,F=137.300,P<0.05)。结论pADM有类似于Wnt/β-catenin信号通路激动剂的作用,其可通过激活Wnt/β-catenin信号通路提高大鼠角质形成细胞中Cyclin D1的表达,FH535可阻断pADM对Cyclin D1的激活作用。