简介：摘要目的初步探讨第二代结肠胶囊内镜的临床应用。方法纳入2017年7月至2018年12月于浙江大学医学院附属第一医院行结肠胶囊内镜检查的所有门诊和住院患者40例。由具有小肠或结肠胶囊内镜丰富判读经验的消化内科主任医师分析检查结果，观察胶囊在胃、小肠和结肠的通过时间，以及结肠清洁程度评分、胶囊检查完成率、病变检出情况和检查过程中的不良反应。采用卡方检验和Student′t检验进行统计学分析。结果65.0%(26/40)的患者在胶囊运行时间内完成全消化道检查，胃通过时间为(0.92±0.74) h，小肠通过时间为(3.93±1.51) h，结肠通过时间为(4.89±0.61) h。完成全消化道检查患者的胶囊运行时间短于未完成全消化道检查者[(9.44±3.53) h比(15.47±2.09) h]，差异有统计学意义(t＝6.79，P<0.01)。结肠准备合格率为67.5%(27/40)。结肠准备合格患者胶囊结肠通过时间、胶囊排空时间与结肠准备欠佳患者比较[分别为(4.43±3.33) h比(5.96±2.44) h，(9.06±3.91) h比(10.29±2.47) h]差异均无统计学意义(t＝1.17、0.81，P均>0.05)。结肠胶囊内镜共发现33例(82.5%)患者存在消化道病变，其中食管病变3例，包括炎症与占位；胃病变21例，包括慢性胃炎、黏膜隆起、息肉和溃疡；小肠病变9例，包括息肉、溃疡和血管畸形；结肠病变19例，包括憩室、息肉、直肠炎、溃疡和糜烂、血管畸形、内痔；存在2种及以上病变的患者有11例。所有患者在检查过程中均未出现任何不良反应，均在吞入胶囊48 h内排出胶囊。结论第二代结肠胶囊内镜可用于全消化道检查，具有较高的安全性和耐受性。

简介：摘要侵袭性曲霉病通常发生在免疫功能缺陷的患者中，骨关节部位的曲霉病比较少见，由于感染的部位深，培养阳性率低，诊断往往比较困难。现报道1例天然关节曲霉病病例，患者反复腰痛2年余，通过关节腔积液的第二代测序技术检测确诊，予有效的抗真菌治疗后患者病情缓解。

简介：摘要 :不同类型的机械故障在振动信号中会反映出不同的波形特征 ,选用不适当的小波基函数会冲淡故障的特征信息 ,给故障诊断造成困难。第二代小波变换可以通过设计预测系数和提升系数获得具有某种特性的小波基函数。本文介绍了第二代小波变换的原理 ,研究了预测系数和提升系数与低通和高通滤波器系数之间的关系 ,根据信号的特征构造了基于插值细分方法的双正交小波 ,在旋转机械的轴系不对中故障诊断中取得了满意的效果。

简介：【摘要】目的 探讨 TCT联合第二代杂交捕获法对宫颈癌及癌前筛查的临床意义；方法 取 150例有宫颈糜烂、接触性出血、溃疡及乳头样增生等症状患者，进行 TCT、 HC2-HPV-DNA、和病理活检三种方法检查的患者 150例为研究对象。结果 TCT检测对宫颈低度、高度病变的检出率为 42.4%， HC2-HPV检测对宫颈低度、高度病变的阳性检出率为 57.4%，第二代杂交捕获法联合 TCT检测阳性率为 66.7%，宫颈癌检测率为 100%。结论 第二代杂交捕获法联合 TCT对宫颈癌及癌前筛查有重要的临床推广意义。

简介：摘要病原学的精准诊断对感染性疾病的诊断非常重要。宏基因组学第二代测序技术检测具有无偏倚性、广覆盖、快速等优点，能覆盖更广范围的病原体。本专家共识就第二代测序技术的临床应用范围、样本采集、分析解读和诊断效能等方面进行证据总结和意见推荐，建立中国感染病原体宏基因组学检测的标准规范。

简介：摘要目的探讨脑脊液第二代测序技术诊断艾滋病相关进行性多灶性白质脑病(progressive multifocal leukoencephalopathy，PML)患者的临床表现、影像学表现、脑脊液表现、治疗和预后特点。方法纳入2017年10月至2019年1月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的10例通过第二代测序技术诊断为艾滋病相关PML的患者，分析其临床资料。采用描述性分析。结果10例艾滋病相关PML患者中，男8例，女2例；年龄为(38.7±8.2)岁。CD4＋T淋巴细胞计数中位数为46/μL，人类免疫缺陷病毒RNA中位数为5.99×104拷贝/mL。10例患者中，4例表现为运动障碍，3例表现为头晕、共济失调，2例表现为认知功能下降，1例表现为言语障碍；3例在整个病程中出现抽搐。影像学表现：任何部位均可出现病变，3例病变位于小脑幕下，7例位于小脑幕上。10例患者中，4例脑脊液蛋白质轻度增高，细胞数为(0～10)×106/L，糖、氯化物均正常；脑脊液JC病毒序列数为3～12 531，中位数为67。10例患者均接受抗病毒治疗，方案中均包含整合酶抑制剂；2例患者死亡，其余8例均存活，其中5例症状好转，3例未见好转，2例存活时间超过1年。结论艾滋病合并PML较为少见，在临床表现、脑脊液常规检测结果和影像学表现的基础上，应用脑脊液第二代测序技术有助于诊断PML，且强效抗病毒治疗方案能改善患者预后。

简介：摘要胰腺癌病死率高，5年生存率仅有8%。PDAC占所有胰腺恶性肿瘤约90%，早期诊断困难，手术切除是其唯一可能的治愈方法，治疗方式一直缺少突破性进展。二代测序(NGS)可以发现PDAC的突变基因，运用NGS的PDAC分子分型提出了PDAC的潜在治疗靶点和发生机制。NGS还可以应用于生物标志物的检测，有助于早期诊断和术后随访。对患者进行NGS检测可以对药物作用靶点进行筛选，提供个体化治疗的可能。

简介：摘要鹦鹉热衣原体的主要宿主为鹦鹉及鸟类，人类通过直接接触或呼吸道吸入感染。临床上对鹦鹉热衣原体肺部感染较为重视而对于病原体的血行播散缺乏关注。本文报道2例通过二代测序检测出下呼吸道分泌物及血液中高核酸序列数鹦鹉热衣原体的病例，考虑病原体吸入致肺炎，并入血造成血流感染。对传统培养无法明确的少见、复杂病原体感染以及经验性抗感染治疗无效的重症感染，二代测序技术是有效的补充手段。

简介：摘要感染是儿童常见的疾病谱，精准、快速的病原体诊断能帮助临床医师有的放矢地进行治疗，改善患儿预后。传统的病原体诊断方法存在耗时长、灵敏度低等缺陷，近些年来二代测序技术不断发展并应用于临床，成为病原学诊断的新方法。其中宏基因二代测序技术应用最多，它可以无偏移地将标本中所有病原体的核酸都检测出来，此技术包括了样本采集、核酸提取、文库制备、高通量测序、生物信息分析和报告解读几个基本步骤。由于整个流程涉及临床、微生物、生物信息多个领域，故对于报告结果的判读需要临床医生结合患者及其他辅助诊断手段仔细斟酌反复求证。临床医生需要了解二代测序的优势和局限性，才能更好地利用这项技术服务于患者。

简介：摘要目的通过与细菌培养及血清生物学标志对比，探讨二代测序技术(NGS)对人工关节置换术后假体周围感染(PJI)的诊断价值。方法选取2017年7月到2019年12月在聊城市人民医院关节外科因假体周围感染或无菌性松动行关节翻修手术，排除初始关节液无法采集到，通过关节内注射生理盐水获得样本的患者及其他部位存在感染病灶的患者，共纳入患者35人(35例)根据美国肌骨骼感染协会(MSIS)的诊断标准，15例患者纳入感染组，20例患者纳入非感染组。术前两组患者常规检查血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白介素6(IL-6)及D-二聚体(D-Dimer)。所有患者术前均行关节穿刺，穿刺液检测白细胞计数、白细胞分类、细菌培养及NGS。计算ESR、CRP、PCT、IL-6及D-Dimer的受试者操作特性曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)。计算NGS、细菌培养及各项血清学标志物的诊断精确度、敏感性及特异性。结果髋关节19例(54.3%)，膝关节16例(45.7%)。男性21例(60.0%)，女性14例(40.0%)，年龄67.0(62.0，74.0)岁。感染组15例患者中NGS结果阳性14例(93.3%)，细菌培养结果阳性7例(46.7%)。非感染组NGS结果阴18例(90.0%)。ESR及D二聚体的AUC分别为0.667和0.572(均为P>0.05)。CRP、IL-6及PCT的AUC分别为0.827、0.767及0.808(均为P<0.01)。NGS、细菌培养、CRP、IL-6及PCT的精确度分别为0.91、0.74、0.77、0.74及0.83。NGS与CRP、IL-6、PCT、细菌培养两两比较，总体检测结果差异有统计学意义(P<0.01)。NGS与CRP、IL-6、PCT、细菌培养两两比较，NGS敏感性更高(P<0.05)。NGS与CRP比较特异性更好(P<0.05)。NGS与IL-6、PCT及细菌培养比较，特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论NGS比细菌培养及常用的血清学标志物有更高的精确度及敏感性，在PJI的诊断中具有更大的价值。

简介：摘要目的了解分化中晶状体的转录谱，包括mRNA、长链非编码RNA（lncRNA）和环状RNA（circRNA）。方法实验研究。提取人源性分化晶状体RNA并纯化。然后使用Illumina HiSeq 2500对16、23、25周晶状体总RNA样本进行测序，并使用生物信息学工具进行分析，筛选出最高表达和差异表达的mRNA和lncRNA；用维恩图分析3个时期晶状体的重叠基因表达情况；分析晶状体特异性基因的表达趋势，并用实时荧光定量PCR验证。结果在16、23、25周晶状体中分别获得67 518 311、99 440 160和67 262 320条映射序列。基因重叠表达分析显示，前1 000个高表达mRNA、前300个高表达lncRNA和前100个高表达circRNA中分别有740、170、69个在16、23、25周晶状体中同时表达。晶状体特异性基因表达分析显示，晶状体蛋白（CRY）AA、CRYGA、CRYGB、CRYGC、CRYGD、CRYGEP和CRYGS基因表达随晶状体分化时间上调，缝隙连接（GJ）蛋白GJA3和GJA8基因表达随晶状体分化时间下调。结论晶状体转录组表达谱显示不同分化阶段晶状体的高表达mRNA、lncRNA和circRNA中重叠表达者占半数以上，且均高表达晶状体特异性蛋白基因，如CRY、GJ蛋白基因等。（中华眼科杂志，2020，56：356-363）

简介：摘要目的探讨乳腺癌甲醛固定石蜡包埋（formalin-fixed and paraffin-embedded，FFPE）穿刺样本杂交捕获法二代测序（next-generation sequencing）样本优选条件。方法纳入多中心乳腺癌FFPE穿刺样本共计435例，选取燃石36基因检测试剂盒二代测序数据分析。纳入样本保存时间、切片厚度、降解等级、建库后的浓度、核酸片段大小、下机数据质量等质控信息。结果435例样本中111例核酸总量低于30 ng，剩余28例DNA质量低于C级，最终296例进入质控分析。保存时间分布为：<1年188例；1~2年74例；>2~3年34例，其DNA降解程度分布为：A级（>2 500 bp）67例（22.6%）；B级（1 500~2 500 bp）155例（52.4%）；C级（<1 500 bp）74例（25.0%）。预文库质控合格样本（300 ng）的分布为：A级65例（97.0%）；B级138例（89.0%）；C级64例（86.0%）。终文库片段大小280 bp以上合格样本分别为：A级66例（98.5%）；B级151例（97.4%）；C级72例（97.3%）。保存<1年、1~2年、>2~3年样本根据下机数据插入片段质控合格（>170 bp），所占比率分别为：156例（83.0%）、45例（60.8%）和25例（73.5%）。降解程度分布分别为：A级 54例（80.6%）；B级 127例（81.9%）；C级 46例（62.2%）。结论FFPE穿刺样本杂交捕获法二代测序样本优选条件：（1）切片总厚度不低于50 μm；（2）保存时间优选<1年样本；（3）核酸降解优选A级。

简介：摘要我国重症社区获得性肺炎常见病原体为肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、病毒以及嗜肺军团菌等，由诺卡菌引起两肺弥漫性病变为影像特征的CAP较为少见。因诺卡菌培养时间较长，故临床工作中易造成漏检。通过本例患者的诊治过程提示气管内深部痰涂片检查对发现诺卡菌可能具有重要提示意义。可以提醒临床微生物室检验员延长培养时间。近年来微生物二代基因测序诊断技术对发现少见菌，如诺卡菌及该菌种的鉴定价值很大。尽早明确重症社区获得性肺炎的病原体是救治成功的关键。

简介：摘要：目的 了解上海市郊区“二代居民”对养老中医疗服务的满意度及需求 。方法　在上海市华新镇，采用自行设计问卷随机分层对截止 2018 年 7 月 1日完成普通签约的 488名“二代居民”进行问卷调查。结果 1 、基本信息 488人中，男性 291 人、女性 197 人 ; 父母就医情况 :344 人是由子女代配药或陪同， 142 人是由父母自己配药。 2 、医疗项目满意度 84.8 ％对目前给养老提供的医疗服务项目满意或非常满意 ， 82.2 %对给老年人慢性病配药的数量满意或非常满意 ; 慢性病配药时长 :56.8% 选择 1 个月， 25.6% 选择 2 个月， 9.4% 选择 3 个月。 3 、医疗服务 父母就医医院选择方面： 74.8% 选择社区卫生服务中心或卫生室，其中选择的原因前三位是 44.4% 是等候时间短、 35.6% 是医疗费用低报销比例大、 9.03% 有熟悉的医务人员，最希望得到的医疗服务项目前三项分别是医生上门诊治（ 81.6% 选择）、上门输液（ 46.9% 选择）、免费的体检（ 41.6% 选择）；在上门医疗服务风险承担上， 17.2% 愿意全部承担， 58.8% 部分承担， 23.9% 不愿意承担；在前三医疗上门服务项目中费用承担方面：家庭医生上门诊疗费用选择比例前三的是 31-50 元（ 17.4% ）、 10-30 元（ 44.5% ）、 10 元以下（ 33.8% ），上门输液费用选择比例前三的是 31-50 元（ 22.1% ）、 10-30 元（ 33.8% ）、 10 元以下（ 37.1% ），上门抽血费用选择比例前三的是 31-50 元（ 20.1% ）、 10-30 元（ 39.5% ）、 10 元以下（ 37.3% ）。

简介：摘要目的探讨宏基因二代测序技术检测尿路感染患者尿液中多瘤病毒的临床价值。方法2018年9月至2020年4月复旦大学附属中山医院收治的送检尿液宏基因二代测序的尿路感染患者共33例。采用随机扩增法、脱氧核糖核酸纳米球、华大基因公司BGI-500测序平台及BWA算法为基础的比对法等技术对尿液标本的核酸提取物进行二代测序分析，以尿标本中多瘤病毒核酸序列数>100为入选标准，分析检出多瘤病毒的类型、深度、覆盖度、丰度及序列数等参数。采用Taq Man探针实时定量聚合酶链反应（PCR）法验证并检测多瘤病毒DNA载量。结果30.3%（10/33）的患者尿标本中检出JC多瘤病毒，其中1例合并检出BK多瘤病毒。所有患者在检测前均使用抗菌药物治疗，但仅一例尿培养阳性。JC多瘤病毒检出的深度均值为35.9，覆盖度均值96.8%，相对丰度均值92.6%，唯一比对序列数均值为3 154。实时定量PCR法检测10例患者尿中JC多瘤病毒DNA载量在5.84×103~6.55×108拷贝/ml，均值为6.82×107拷贝/ml，其中9例患者（均为免疫受损者）的病毒载量超过5×104拷贝/ml，与宏基因二代测序结果基本相符。每1 M数据中的严格比对序列数（RPM）与CD4+T细胞计数存在线性负相关（R2=0.84，P=0.004）。其中1例患者经西多福韦治疗后症状及尿检指标好转，随访尿液宏基因二代测序检查JC多瘤病毒的序列数及RPM值明显下降，实时定量PCR法证实尿中病毒DNA载量亦下降。结论宏基因二代测序技术在病毒性尿路感染的诊断中有着重要意义。西多福韦可能是治疗多瘤病毒尿路感染的一个选择。

简介：摘要目的分析宏基因组二代测序(mNGS)技术在重症肺炎病原菌未明患者中的应用价值。方法回顾性分析扬州大学附属医院2019年6月至2020年2月采用肺泡灌洗液mNGS技术辅助诊疗的重症肺炎病原菌未明患者8例的临床资料，包括肺泡灌洗液涂片、培养、mNGS检测等结果，分析患者的临床特点与mNGS检测情况。依据mNGS结果并结合临床医师的判断，将是否明确为病原菌分为病原菌确定组、病原菌未确定组，比较两组辛普森菌群多样性指数。结果8例患者中，男5例，女3例；年龄范围41～71岁，中位年龄62.5岁。除1例患者无慢性疾病外，其余患者合并糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、肾脏移植等。8例患者mNGS检测阳性，3例患者常规检测阳性。病原菌确定组(n＝5)与病原菌未确定组(n＝3)辛普森菌群多样性指数比较，差异有统计学意义[(0.398±0.222)比(0.763±0.061)，t＝2.709，P＝0.035]。2例患者mNGS检测阳性与常规检测阳性结果不同。3例卡氏肺孢子虫mNGS检测阳性患者的核酸序数为120～15 580，相对丰度为24.6%～99.8%。结论肺泡灌洗液mNGS技术有助于医师快速、全面掌握病原菌信息，特别适用于重症肺炎病原菌未明患者。

简介：摘要目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）多样本二代测序（NGS）检测基因突变状态的临床意义，为个体化靶向治疗提供依据。方法回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院2016年6月至2019年2月收治的NSCLC患者51例，收集患者的年龄、性别、吸烟情况、病理类型、肿瘤分期、胸膜侵犯情况、脑膜侵犯情况等资料，对组织、脑脊液、胸腔积液及血浆标本行NGS检测。采用χ2检验或Fisher确切概率法分析驱动基因[表皮生长因子受体（EGFR）、间变性淋巴瘤激酶（ALK）、c-ros癌基因1（ROS1）]突变状态与患者临床病理特征之间的相关性，采用Cohen Kappa系数分析比较不同标本间NGS检测结果的一致性。结果51例患者中7例送检了3种不同类型标本，其中3例脑脊液标本驱动基因突变均阳性，2例胸腔积液标本存在双基因突变。驱动基因突变多见于女性[90.48%（19/21）比50.00%（15/30），χ2=9.107，P=0.003]、非吸烟[80.00%（24/30）比47.62（10/21），χ2=5.829，P=0.016]、腺癌[72.34%（34/47）比0，P=0.017]和合并恶性胸腔积液[92.86%（13/14）比56.76%（21/37），χ2=4.443，P=0.035]患者，差异均有统计学意义，但驱动基因突变率在不同年龄和肿瘤分期患者间差异均无统计学意义（均P>0.05）。37例患者血浆标本与配对组织标本间驱动基因突变检测结果一致率为70.27%（26/37），κ值为0.430，二者一致性良好。结论晚期NSCLC伴脑膜转移的患者行脑脊液基因检测具有较高的应用价值，伴胸腔积液患者行胸腔积液基因突变状态检测是筛选靶向治疗药物的有效手段。多样本NGS检测能更好地反映基因突变状态，可用于指导NSCLC患者个体化靶向治疗。

简介：摘要目的探讨二代冷冻球囊消融上腔静脉（SVC）的有效性和安全性。方法连续纳入2017年1月至2018年12月中国医学科学院阜外医院心律失常中心接受二代冷冻球囊治疗阵发性心房颤动（房颤）患者共806例。所有患者先行肺静脉隔离，最终23例患者电生理检查证实SVC起源触发灶，其中，男12例，年龄（58.1±6.2）岁。将28 mm冷冻球囊放置于SVC-右心房交界处进行冷冻隔离。回顾性分析术中隔离时间、隔离温度、冷冻次数等冷冻参数、并发症及术后随访情况。结果23例患者术中均可实时记录SVC电位，18例（78.3%，18/23）成功冷冻消融隔离SVC，冷冻1~4（2.1±1.1）次，SVC隔离时间为7~40（22.3±14.0） s，冷冻时间为30~150（96.0±23.6） s。术中5例（21.7%，5/23）患者出现一过性膈神经损伤，2例患者首次冷冻时出现一过性窦房结损伤。随访6~24（13.2±5.8）个月，4例患者出现房颤复发。结论二代冷冻球囊可有效隔离SVC，一过性膈神经损伤发生率相对较高，术中需密切关注膈神经情况。

简介：摘要目的研究脑脊液二代测序(Next-generation sequencing，NGS)在中枢神经系统布鲁菌感染诊断中的应用价值。方法对2018年1至6月郑州大学人民医院住院并临床疑诊为中枢神经系统布鲁菌感染的3例患者的临床资料进行回顾性分析，3例患者均行常规脑脊液及NGS检测，并进行病原分析。结果3例患者中2例有牛羊接触史，1例有饮用生羊奶史，急性起病，主要症状为头痛、发热。影像学表现为柔脑膜、腰髓或脑室旁受累。脑脊液常规白细胞计数升高，以单核细胞为主，蛋白质水平增加，葡萄糖水平降低。脑脊液NGS检出布鲁菌的核酸序列数为(47～16 411)条，覆盖度为(0.092～4.340)%。结论脑脊液NGS能够辅助中枢神经系统布鲁菌感染的临床诊断。

简介：摘要目的通过二代冷冻球囊消融隔离犬上腔静脉（SVC），探讨其有效性和安全性，为临床开展冷冻球囊消融SVC提供证据。方法本研究共选取14只犬，通过二代冷冻球囊消融SVC，根据冷冻球囊消融时间用随机数字表法随机分为2组：90 s组和120 s组。术前行SVC造影显示SVC-右心房交界处，将28 mm冷冻球囊放置于SVC-右心房交界处进行冷冻。术后观察40~60 d后再次行电生理检查，之后处死行组织学病理检查。比较术中冷冻参数、并发症及术后窦房结恢复时间等指标。结果2组犬均成功隔离SVC。90 s组与120 s组犬在SVC隔离时间[（24.3±8.1）s对（22.7±9.0）s，P=0.297]、隔离温度[（-23.4±12.5）℃对（-21.5±11.1）℃，P=0.370）]及最低温度[（-51.2±6.2）℃对（-53.3±7.0）℃，P=0.195]均差异无统计学意义。术中90 s组1只犬出现暂时性膈神经损伤，120 s组1只犬出现一过性窦性心动过缓。术后平均观察51 d，90 s组有1只犬出现SVC电位恢复，120 s组全部犬SVC电位均保持隔离（85.7%对100.0%，P=0.299）。术后组织病理显示所有隔离的SVC均达到环形冷冻透壁损伤，高倍镜下未发现窦房结及膈神经损伤。结论二代冷冻球囊可安全有效的消融SVC，且有效冷冻剂量为90 s。