简介:摘要目的分析靶向乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)-T细胞对表达HBsAg的肝癌细胞的杀伤作用。方法构建HBsAg-CAR基因,通过慢病毒载体将其转导入T细胞(健康捐献者的血液中获取),制备HBsAg-CAR-T细胞。制备CD19-CAR-T细胞作为Mock组,未转导的T细胞为Untransduced组。上述三种效应细胞分别与肝癌细胞共同培养,检测三组细胞对肝癌细胞的杀伤作用及抗肿瘤细胞因子(肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、白细胞介素2等)释放水平。建立免疫缺陷NPG小鼠PLC/PRF/5肝癌皮下成瘤模型,随机分组,尾静脉注射HBsAg-CAR-T细胞(实验组,n=5)或未转导的T细胞(对照组,n=5),注射后第15天测量肿瘤体积。结果体外培养过程中,HBsAg-CAR-T细胞具有较高的增殖能力及存活率,CAR的表达稳定。与表达HBsAg的肝癌细胞共培养后,HBsAg-CAR-T组释放的抗肿瘤细胞因子明显高于Mock组及Untransduced组,差异均有统计学意义(均P<0.05);HBsAg-CAR-T组对HBsAg表达阳性的肝癌细胞的杀伤率明显高于Mock组及Untransduced组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验组NPG小鼠肿瘤体积为(250.8±62.8)mm3,低于对照组小鼠肿瘤体积(757.5±102.6)mm3,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HBsAg-CAR-T细胞能够特异性识别并杀伤HBsAg阳性肝癌细胞,并释放高水平的抗肿瘤细胞因子。
简介:摘要目的探讨血浆SEPT9基因甲基化联合血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原724(CA724)检测在结直肠癌诊断中的临床应用价值。方法选取2018年5月至2021年10月陕西省宝鸡市中心医院和云南省新昆华医院收治的219例结直肠病变患者,包括病理诊断结直肠癌149例、结直肠息肉70例,选择同期体检健康者100名作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定血浆SEPT9基因甲基化状态,电化学发光法测定血清CEA和CA724的水平。比较各组3项指标表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析3项指标单独及联合诊断结直肠癌的效果。结果结直肠癌组SEPT9基因甲基化阳性率(74.50%,111/149)高于结直肠息肉组(22.86%,16/70)和健康对照组(1.00%,1/100),差异有统计学意义(P<0.001);结直肠癌组CEA阳性率(46.98%,70/149)高于结直肠息肉组(40.00%,28/70)和健康对照组(3.00%,3/100),差异有统计学意义(P<0.001);结直肠癌组CA724阳性率(38.93%,58/149)高于结直肠息肉组(32.86%,23/70)和健康对照组(2.00%,2/100),差异有统计学意义(P<0.001)。SEPT9基因甲基化、CEA和CA724单独诊断结直肠癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.823(95% CI 0.753~0.891)、0.788(95% CI 0.725~0.852)、0.689(95% CI 0.624~0.754)。SEPT9基因甲基化诊断结直肠癌的最佳临界Ct值为36.5,灵敏度为90.30%,阳性预测值为84.68%,均高于CEA和CA724;CEA诊断结直肠癌的最佳临界值为8.80 ng/ml,特异度(77.50%)和阴性预测值(78.48%)均高于SEPT9基因甲基化和CA724;3项指标联合检测的临界值取3项指标单项最佳临界值时的灵敏度(97.66%)、阳性预测值(93.98%)、阴性预测值(81.25%)、AUC(0.846,95% CI 0.749~0.944)均较单项指标高。结论血浆SEPT9基因甲基化、血清CEA和CA724联合检测诊断结直肠癌,灵敏度和准确度高,三者可以优势互补,提高诊断效率,对于结直肠癌的诊断具有较高的临床价值。
简介:摘要目的探讨血清微小核糖核酸-34a(miR-34a)、癌抗原15-3(CA15-3)和癌抗原125(CA125)联合检测在乳腺癌复发转移监测中的价值。方法根据患者影像学及病理组织学检查将2016年1月至2020年12月武汉科技大学附属普仁医院诊治的96例女性乳腺癌患者分为复发转移组(39例)与未复发转移组(57例),实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-34a相对表达量,酶联免疫吸附法检测血清CA15-3和CA125水平。采用受试者操作特征曲线(ROC)分析血清miR-34a、CA15-3和CA125及三者联合检测对乳腺癌患者术后复发转移监测的作用。计量数据比较采用t检验,计数资料比较采用χ2检验。结果复发转移组乳腺癌患者血清miR-34a相对表达量显著低于未复发转移组乳腺癌患者(miR-34a相对表达量0.41±0.04比0.97±0.06),血清CA15-3和CA125水平显著高于未复发转移组乳腺癌患者[CA15-3为(79.62±3.77) U/ml比(14.89±2.14) U/ml,CA125为(152.56±13.77) U/ml比(19.32±2.13) U/ml],差异均有统计学意义(t=20.807、9.478、36.663,P值均<0.05)。血清miR-34a预测乳腺癌患者复发转移的敏感度为87.4%,特异性为69.5%;血清CA15-3预测乳腺癌患者复发转移的敏感度为89.1%,特异性为72.5%;血清CA125预测乳腺癌患者复发转移的敏感度为72.4%,特异性为82.7%。miR-34a、CA15-3和CA125三者联合检测敏感度为91.8%,特异性为89.1%。结论乳腺癌复发转移患者血清miR-34a表达显著降低,血清CA15-3和CA125水平显著升高,三者联合检测在乳腺癌复发转移监测中具有重要临床价值。
简介:摘要 目的:分析2868例呼吸道七项病毒抗原检出率及性别差异、季节分布情况,为临床诊疗及疫情监控提供依据。方法:收集2018年5月至2020年6月送至西安金域医学检验所检测的2868 例呼吸道感染病例样本,采用直接免疫荧光法(IFA)检测7 种呼吸道病毒抗原,包括呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、甲型流感病毒(IFVA)、乙型流感病毒(IFVB)和副流感病毒 1、2、3 型(PIV1、2、3),并进行统计学分析。结果:收集的2868例样本中,病毒抗原检测阳性251例,阳性率为8.75 %。其中呼吸道合胞病毒抗原检出最多,阳性率为5.06 %,其次依次为 ADV(1.64 %)、PIV3(1.05 %)、IFA(0.56 %)、IFB(0.21 %)、PIV1(0.17 %)、PIV2 (0.07 %)。男性、女性的阳性检出率比较差异无统计学意义(P > 0.05)。七种呼吸道病毒抗原在不同季节检出率有差异,春季与秋季检出率比较差异有统计学意义(P < 0.05);夏季与秋季检出率比较差异有统计学意义(P < 0.05);秋季和冬季检出率比较(P > 0.05)无明显差异。RSV秋冬季节阳性率高,占秋季阳性率75.28 %,冬季次之70.00 % ; 夏季ADV占65.38 %, PIV 3占 30.77 %,春季PIV 3检出率最高可达57.69 %。结论:阳性率最高的是呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、副流感病毒 3 型(PIV3)。其流行与季节交替变化有明显关联,特别是秋冬季节。
简介:摘要目的基于Au@Ag NPs的SERS侧流免疫层析(LFIA)建立一种快速、高灵敏定量检测人腺病毒(HAdV)的方法。方法首先合成出双层拉曼分子5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (DTNB)修饰的Au@Ag NPs,再结合HAdV特异性抗体得到SERS探针,基于抗原-抗体的特异性反应在免疫层析条检测线处形成"三明治"免疫复合结构,通过收集并分析检测线上的SERS信号,可以实现对HAdV抗原的快速检测。其次,分别对该检测方法的灵敏度、重复性和特异性进行评价。结果基于双层DTNB修饰的Au@Ag NPs SERS-LFIA可在15 min内对HAdV实现定性/定量检测,其可视化检测结果为10 ng/ml,最低检出限达0.1 ng/ml,定量范围为0.1 ng/ml~1 000 ng/ml。此SERS免疫层析方法对HAdV的检测具有良好的重复性和特异性,与登革热病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒和埃博拉病毒五种新突发传染性病毒均无交叉反应。结论该研究提出的基于Au/DTNB@Ag/DTNB NPs的SERS-LFIA可以实现对HAdV的快速和高灵敏检测,在HAdV的现场即时检测领域具有巨大潜力。
简介:摘要嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法是近年来极具发展前景的免疫过继疗法之一。CAR-T免疫原性与抗嵌合抗原受体(CAR)特异性免疫反应可导致CAR-T体内扩增能力下降及存活时间缩短,从而导致原发疾病复发,限制其临床应用。CAR-T免疫原性的影响因素众多,其中研究最为广泛的是鼠源性单链可变区(scFv)构建CAR结构所产生的免疫原性。目前已有多种降低CAR-T免疫原性,从而延长CAR-T体内存活时间,增强疗效的方法,如解决CAR结构非人源化问题等。为了深入探讨影响CAR-T免疫疗法疗效及安全性的相关因素,笔者拟就CAR-T的免疫原性、其产生的免疫反应进行阐述,同时探讨可降低CAR-T免疫原性的相关措施,以期进一步增加CAR-T免疫疗法的临床应用。
简介:摘要目的探讨抗B细胞成熟抗原(BCMA)嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)再次治疗复发难治多发性骨髓瘤(RRMM)的疗效和安全性。方法回顾性分析2017年1月至2021年6月因首次抗BCMA CAR-T治疗(CART1)失败或复发,在河南省中医院接受抗BCMA CAR-T再次治疗(CART2)的10例RRMM患者临床资料。总结CART2患者的治疗情况、疗效及不良事件,并与CART1的客观缓解率(ORR)、中位持续缓解时间(DOR)及不良反应发生率进行比较。结果10例患者中,男性8例,女性2例,中位年龄57岁(41~70岁)。CART1患者3个月ORR为90%,中位DOR为16.0个月(3.0~27.0个月)。CART2使用人源抗BCMA CAR-T治疗6例,鼠源抗BCMA CAR-T治疗4例。CART2患者3个月ORR为40%,中位DOR 8.5个月(3.0~11.0个月)。CART1用鼠源抗BCMA CAR-T的9例患者中,CART2仍用鼠源抗BCMA CAR-T再治疗的4例患者无一例有效;用人源抗BCMA CAR-T再次治疗的6例患者中,4例(66.7%)达到部分缓解(PR)及以上缓解。CART1的10例患者发生1~2级细胞因子释放综合征(CRS),7例出现不同程度的白细胞计数、中性粒细胞绝对计数(ANC)和血小板计数减少;CART2有效的4例患者均发生1~2级CRS,均出现不同程度的白细胞计数、ANC和血小板计数减少,无一例发生免疫效应细胞相关神经毒性综合征。结论抗BCMA CAR-T再次治疗RRMM有效、安全。CART2的ORR和DOR低于CART1,常见不良反应为CRS和血细胞减少。
简介:摘要目的评价快速免疫层析法抗原检测在新型冠状病毒症状性感染患者中的诊断价值。方法前瞻性研究,研究对象为2022年5月20日至6月5日复旦大学附属儿科医院(上海市新型冠状病毒感染患儿定点医院)新型冠状病毒肺炎隔离病房确诊住院的76例新型冠状病毒症状性感染的患儿和其确认感染的55例陪护家属。连续采集其鼻咽拭子标本,采用实时荧光定量反转录PCR方法检测新型冠状病毒核酸,同时用免疫层析法检测新型冠状病毒抗原。评价抗原检测结果与核酸循环阈(Ct)值变化的相关性及新型冠状病毒抗原检测在患者发病后不同时期的灵敏度与特异度,采用Kappa检验分析2种检测方法的一致性。结果新型冠状病毒症状性感染患者中,患儿76例(男41例、女35例),患病年龄5(2,9)岁;陪护家属55例(男8例,女47例),患病年龄38(32,41)岁。对采集的所有478份鼻咽拭子样本同时进行了新型冠状病毒抗原与核酸扩增检测。自发病至新型冠状病毒核酸检测转阴性的任何时期,快速抗原检测的总体灵敏度和特异度分别为48.2%(119/247)和98.3%(227/231),抗原检测与核酸检测显示中等度的一致性(κ=0.46,P<0.05)。Ct值≤25,抗原检测灵敏度均为100.0%(82/82);Ct值为26,灵敏度为8/10;Ct值为30,灵敏度为4/15;Ct值为35,灵敏度为8.3%(3/36);Ct值>35,抗原检测均为阴性。发病1~2、3~5、6~7、8~10、>10 d抗原检测的灵敏度分别为5/8、90.2%(37/41)、88.9%(24/27)、45.0%(36/80)、18.7%(17/91),特异度分别为5/5、5/5、2/2、94.1%(32/34)、98.9%(183/185)。病程2~7 d,患者鼻咽拭子的Ct值均<26;病程第8天时,Ct值为28.7±5.0,病程第13天时,Ct值为34.5±2.9,病程第14天后,Ct值均>35。结论快速免疫层析法抗原检测新型冠状病毒在发病后7 d内具有较高的灵敏度和特异度,其灵敏度与患者的病毒载量呈正相关和发病时间呈负相关。
简介:摘要急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是儿童时期最常见的恶性肿瘤,其中急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)占儿童ALL的10%~15%。随着MICM分型、危险度分层及多药联合强化疗的应用,T-ALL患儿的预后已得到改善,但总生存率和无事件生存率仍<70%,复发/难治T-ALL总生存率<10%。CDl9嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞治疗儿童难治性复发B-ALL缓解率已达70%~90%,但CAR在难治复发T-ALL中仍面临许多挑战。随着CAR-T细胞及CAR-NK细胞靶向治疗的出现及应用,复发/难治T-ALL的预后将有望得到改善。