简介：环介导等温扩增技术（LAMP）是一种核酸扩增技术，该方法最大的优点是能够在63℃～65℃的等温条件下扩增特定DNA序列，并在30～60min内可以观察到结果。LAMP已经成功用于许多病毒的检测，本文主要概述与LAMP技术相关的最新发展现状，以及国外应用该技术检测食物致病菌、动物病毒、临床微生物等方面进展。LAMP作为一种快速、简便、灵敏、特异，无需贵重检测设备而易普及的检测技术，在一些基层实验室、流行病学调查和检验检疫等领域具有广阔的应用前景。

简介：摘要：目的 探讨环介导等温扩增法（ LAMP）检测结核分枝杆菌的应用价值。方法 选取我中心 2019年 1月到 2020年 1月期间临床诊断为肺结核的 70例患者的痰标本，分别运用 LAMP法与荧光染色法涂片法进行检测，分析检验结果。结果 70例标本中， LAMP法与荧光染色法涂片法的阳性检出率分别为 45.71%（ 32/70）、 28.57%（ 20/70），与荧光染色法涂片法对比， LAMP法的灵敏度为 95%（ 19/20）、特异度为 76%（ 38/50），总体一致率为 81.43%（ 57/70）。两种方法一致性对比差异具有统计学意义（ P<0.05），两者一致性良好。在检测时间上，与涂片法相比，大批量标本检测中 LAMP法所用时间较短。结论 痰标本检测中， LAMP法阳性检出率优于荧光染色法涂片法，批量检测性好，具有较好的临床应用前景。

简介：目的：研究环介导等温扩增法在不同临床样本中的结核病诊断价值。方法使用环介导等温扩增法检测肺泡灌洗液、局部穿刺液、腹水和脑脊液中的结核分枝杆菌复合群的特异性基因IS1081,并与实时荧光定量PCR进行比较。结果在荷菌量较高的肺泡灌洗液和局部穿刺液中,环介导等温扩增法敏感性比实时荧光定量PCR低（80%vs92%）；在荷菌量极低的腹水和脑脊液中,环介导等温扩增法敏感性比实时荧光定量PCR高（34．6%vs15．4%）,但特异性略有下降（80%vs93．3%）；综合计算所有样本的敏感性,环介导等温扩增法与实时荧光定量PCR无显著差别（56．9%vs52．9%）。结论环介导等温扩增法具有较高敏感性和特异性,可以用于结核病诊断。

简介：摘要目的探究应用环介导等温扩增技术诊断菌阴性肺结核的临床价值。方法选取我院2017年1月至2017年12月期间收治的120例疑似菌阴性肺结核患者作为研究对象。对所有患者留取痰标本（357份），应用直接涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法、TB-LAMP等温扩增法进行检测，并根据敏感性及特异性进行临床统计分析及随访观察。结果在检测的357例痰标本中，直接涂片抗酸染色法检出阳性标本75份，阳性率21.01%（75/357）；培养检出阳性标本98份，阳性率27.45%（98/357）；LAMP检出阳性标本96份，阳性率26.89%（96/357）。以改良罗氏培养基培养法检测结果为标准，涂片法灵敏度为72.45%（71/98），特异性为97.9%；LAMP灵敏度为92.86%（91/98），特异性为98.2%，P<0.05，差异有统计学意义。结论LAMP在诊断菌阴性肺结核患者时灵敏度、特异性均较高，具有较高的菌阴性肺结核诊断价值，值得临床大力推广及应用。

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简介：摘要：性传播疾病是一个重大的全球问题，建立快速简单的方法进行防控监管刻不容缓。传统的PCR方法检测病原体虽然兼具了高特异性和高灵敏度，但是其需要专业的检测人员操作，同时对设备的要求较高，难以用于基层。环介导等温扩增是一种在短时间内实现性传播病原体多目标检测的可行工具。本文提出了一种同时检测沙眼衣原体和解脲脲原体的方法，检测灵敏度高，稳定性好，能够为性传播疾病感染早期的诊断筛查提供良好的参考依据。

简介：摘要伴随医学进步，操作简单、反应快速且无设备和专业技术人员依赖的即时检测（POCT）有望实现对患者进行连续监测、诊断、管理和筛查，是体外诊断行业的重要发展方向。结合新技术原理，在提高灵敏度、特异性的前提下进一步实现定性至精确定量的转变是POCT发展的必然。在POCT平台开发过程中，具有高效扩增特性及简单、快速且低成本特点的环介导等温扩增（LAMP）技术扮演着越来越重要的角色。本文概述了LAMP技术作用机制及基于LAMP技术开发POCT平台的研究进展和临床应用，总结了目前基于LAMP技术的POCT平台存在的不足及未来发展方向。

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简介：摘要目的建立基于SYBR Green I颜色判定的检测新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）ORF1ab基因的逆转录环介导等温扩增方法（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP），为诊断SARS-CoV-2提供简便、快速和准确可靠的工具。方法基于GenBank中SARS-CoV-2 ORF1ab基因序列保守区设计引物，经引物筛选和RT-LAMP反应体系优化后进行灵敏度和特异性评价，并与实时荧光定量RT-PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）方法进行比较。结果基于颜色判定的RT-LAMP方法可在65℃45 min内完成SARS-CoV-2的快速检测，检测限为3 copies/reaction，与qRT-PCR的敏感度一致。RT-LAMP检测人冠状病毒OC43、人冠状病毒NL63和乙型流感病毒核酸样本结果为阴性，具有较好的特异性。经SARS-CoV-2临床样本验证，RT-LAMP与qRT-PCR的检测符合率达100%。结论基于颜色判定的RT-LAMP方法灵敏度高、特异性强，适用于SARS-CoV-2的快速可视化检测，具有应用于SARS-CoV-2样本的初筛及基层卫生医疗机构和现场推广的潜力。

简介：摘要目的建立环介导等温扩增技术（LAMP）用于检测B7-H3基因，以评价肿瘤患者的预后转归。方法收集临床病理阳性样本并用荧光定量PCR检测，然后根据B7-H3基因序列设计LAMP引物并优化反应条件。用LAMP方法检测收集的临床样本，计算阳性率，并比较LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果建立的LAMP体系特异性和灵敏性良好。通过对临床样本的检测，B7-H3阳性样本的LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义（P<0.05）。结论LAMP对B7-H3基因的检测具有较好的特异性，操作简便，适合在基层医院应用。

简介：摘要感染仍是婴幼儿致病的重要原因。因年龄小、免疫功能不健全，儿童感染具有"急"、"重"、"致病原复杂"等特征，往往会造成严重后果，其快速、准确诊断尤为重要。然而，现有病原检测手段仍较为局限，存在检测效率低、周期长、受制于实验条件及人员等缺点，较难普及。以环介导等温扩增技术为基础的病原学检测手段效率高、反应成本低廉、操作简单，在儿童病原的快速、准确、低成本检测中具有巨大应用潜力，特别适合在基层医疗单位进行推广。环介导等温扩增技术与纸基微流控芯片、智能自动化系统、数字化系统等技术结合后，无疑将为儿童临床病原学诊断带来重大革新。

简介：摘要目的通过罗氏固体培养法,对环介导等温扩增技术(LAMP)和实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测痰结核分枝杆菌的优劣评价。方法选择临床经罗氏固体培养为阳性痰标本68份,阴性标本68份,分别采用LAMP和RT-PCR方法进行结核分枝杆菌检测结果，两者阳性检出率分别为88.2%.85.3%,两者差异没有统计学意义(P＞0.05);培养阳性标本经LAMP、RT—PCR检测结果灵敏度分别为91.2%和82.4%,两者差异没有统计学意义(P＞0.05);培养阴性标本经LAMP、RT—PCR检测结果的特异性分别为85.3%和88.2%,两者差异没有统计学意义(P＞0.05)。结论LAMP检测法阳性率高于RT-PCR法,但两者之间的差别尚无统计学意义,LAMP具有简单快速、准确,LAMP检测阳性标本灵敏度比RT-PCR好,LAMP检测阴性标本特异性稍低,LAMP具有简单、快速、准确,不需要昂贵的检验设备和严格的实验室设置，更适合基层结核病的实验诊断推广应用。

简介：摘要目的建立实时荧光环介导等温扩增（Real-time Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP）技术检测皮肤癣的方法，实现皮肤癣菌病的快速实验室诊断。方法通过在NCBI官网查找下载皮肤癣菌中毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属临床分离率较高的菌种rRNA序列（18S rRNA, ITS1, 5.8S rRNA, ITS2和28S rRNA），运用DNASTAR Lasergene软件进行分析比对，寻找出毛癣菌属内高度保守的靶序列，且该段靶序列要与其他属存在差异，运用Primer Explorer V5设计LAMP引物。提取须癣毛癣菌NBRC6202基因组DNA作为模板筛选引物以及建立LAMP检测毛癣菌属的反应体系，以红色毛癣菌ATCC28188基因组DNA作为模板测试其敏感性和稳定性，以毛癣菌属以外的其他真菌、细菌基因组DNA验证LAMP反应体系的特异性。结果筛选的4套引物里，primer2的扩增效果较好，可在22 min检测出须癣毛癣菌，且可以特异地检测出红色毛癣菌、指间毛癣菌、疣状毛癣菌、许兰毛癣菌、紫色毛癣菌。本研究建立的毛癣菌属RT-LAMP检测方法的最低检测限为1 pg/μL；在10 000 pg/μL、100 pg/μL和1 pg/μL三个浓度的分别10次重复检测实验中平均CT值和CV%分别为9.24±0.30，3.29%、10.57±0.54，5.12%、15.95±0.52，3.24%。结论实验建立的毛癣菌属LAMP检测方法在特异性、敏感性和稳定性三方面均表现出优越的性能，能快速准确地检测出毛癣菌属常见菌种，具有良好的临床应用前景。

简介：摘要等温扩增技术是在恒温条件下进行扩增的一类新型核酸扩增技术。基于该技术建立的方法操作简便，且具有较高的灵敏度与特异性，在临床与科研等方面展现了较好的应用前景。本文就环介导等温扩增、交叉引物扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的等温扩增和滚环扩增等技术的原理、特点及应用进行了综述。

简介：摘要目的建立一种实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增（reverse transcription recombinase-aided amplification，RT-RAA）技术检测寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）的方法，以实现ZIKV的现场快速筛查及诊断。方法通过基因组序列比对，选择ZIKV保守序列设计RT-RAA特异性引物和探针，并用系列稀释的ZIKV重组质粒与毒株核酸验证方法的灵敏性与重复性，通过检测登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒等其他虫媒病毒验证方法的特异性。结果建立的RT-RAA方法可在39 ℃恒温条件下30 min内对ZIKV进行高效扩增，检测系列稀释的ZIKV重组质粒，其95%检测限可达到15拷贝/反应，特异性强，与登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒虫媒病毒无交叉反应，且重复性好。结论本研究建立的ZIKV的RT-RAA等温扩增方法，具有反应迅速，无需精密仪器，操作简单等优点，适合于应急快速检测。

简介：摘要目的采用环介导恒温扩增技术建立快速检测儿童呼吸道合胞病毒的方法。方法收集福建省立医院2011—2012年儿科疑似急性呼吸道感染患儿的呼吸道分泌物标本137份，同时采用环介导恒温扩增技术(LAMP)和荧光定量PCR技术检测儿童呼吸道分泌物中呼吸道合胞病毒特异性RNA，分析两者的灵敏性和特异性。结果LAMP法在恒温条件下进行，特异性好，其灵敏度和可靠性与荧光定量PCR方法相当。结论LAMP方法具有灵敏度高、特异性强等优点，仅需简易设备就能快速、高效、简便地对病原微生物进行鉴定，是一种快速检测呼吸道合胞病毒的新方法。

简介：摘要目的基于重组酶介导的扩增技术(recombinase aided amplification，RAA)和CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)检测，建立一种快速、灵敏且特异的重要境外输入性病毒检测方法。方法以流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus，YEV)、西尼罗病毒(West Nile virus，WNV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)、登革病毒(Dengue virus，DENV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)、寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)为检测对象，设计特异性RAA扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)，建立RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应，评价方法的灵敏度和特异性，使用登革热疑似临床样本进行检测，并与荧光RT-PCR技术进行比较，同时检测其余7种病毒临床模拟样本。结果RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能在39 ℃条件下，40~52 min内检测出8种输入性传染病病原体，灵敏度达到1~10拷贝/μl，并且这8种病原体之间无交叉反应，临床样本均可100%检测出。结论建立的RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能够灵敏、特异且快速地检测出8种境外输入性传染病病原体。

简介：从褐菖鲉肝脏中克隆了热休克蛋白HSC70基因,利用环介导等温扩增技术（loop-mediatedisothermalamplification,LAMP）建立HSC70基因的定量检测方法。为检测该方法的可行性,将褐菖鲉分别暴露于石油水溶性成分（water-solublefraction,WSF）20、60、180μg·L-11d后,利用real-timePCR及LAMP技术同时测定褐菖鲉肝HSC70mRNA表达量,两种方法测定结果基本一致,证实LAMP技术可用于褐菖鲉肝HSC70基因的定量。为更细致了解石油WSF影响褐菖鲉肝脏HSC70基因表达的剂量-效应关系,将褐菖鲉分别暴露于25、50、75、100、125、150、175μg·L-1WSF中,5d后采样,用LAMP技术定量检测HSC70mRNA。结果表明,HSC70mRNA表达量在50μg·L-1浓度组即被显著诱导,在75μg·L-1浓度下达到最大值,这说明褐菖鲉肝HSC70基因对石油污染较敏感,有潜力作为海洋石油污染的生物标志物。

简介：采用交叉引物等温扩增方法对食品中肺炎克雷伯氏菌建立快速检测方法,通过对18株肺炎克雷伯氏菌检测全部为阳性、29株其他阴性相关菌株检测为阴性,证明具有良好的特异性.通过对纯菌液、DNA浓度、实际样品检测等四方面进行灵敏度评估,DNA检测灵敏度为75.8fg/反应,纯菌液为96CFU/mL,经增菌步骤,样品中菌体检测灵敏度为9.6CFU/100g.该检测方法通过与参考方法比较其灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率及相对准确性几方面参数,符合ISO相关要求.该等温扩增方法的灵敏度为98.4%,特异性为98.5%,假阳性率为1.5%,假阴性率为1.6%,相对准确性为98.5%.该方法可用来对食品中肺炎克雷伯氏菌进行快速初筛检测.

简介：摘要目的基于逆转录重组酶介导的恒温扩增（reverse transcriptional recombinase aided amplification，RT-RAA）技术，建立一种快速，灵敏，简便的SARS-CoV-2棘突蛋白（S）H146Y突变检测方法。方法针对SARS-CoV-2棘突蛋白H146Y突变区域设计RT-RAA特异性引物和荧光探针，使用优化的RT-RAA方法进行恒温扩增检测，评价方法的灵敏度和特异性，并与二代测序技术进行比较。结果基于荧光信号的RT-RAA方法能在39 ℃，30 min完成检测，SARS-CoV-2 S蛋白H146（S-H146）野生株和Y146（S-Y146）突变株检测限均为10 copies/μL，能够依据荧光值明显区分S-H146毒株与S-Y146毒株的重组质粒或临床样本，且和五种常见呼吸道感染病毒无交叉反应，与二代测序技术方法一致性高。结论建立的RT-RAA荧光检测方法具有灵敏度高，特异性强，适用于SARS-CoV-2 S蛋白H146Y突变株的快速检测，为基层医疗机构提供了新的鉴定方法。