简介:大米蛋白是优质蛋白,然而,当前存在着严重的掺假现象。为降低生产成本,向大米产品中添加非蛋白含氮物质。采用大米蛋白作为研究对象,以尿素等为干扰物,利用Lowry、CBB、凯氏定氮法,研究干扰物对蛋白质含量测定方法的影响。研究发现,三聚氰胺的加入量低于300g/kg时,对测定结果无明显干扰作用,误差基本保持在3%以内;尿素的含量在低于100g/kg时,对测定结果无明显干扰作用,而随着加入量的继续增大,使CBB法和Lowry法的测定数据均有一定程度的下降,其中CBB法表现更为明显;硫酸铵对蛋白质含量的测定的影响最为微弱,添加量超过50g/kg时,蛋白质的测定结果反而呈现下降的趋势。分析表明,相比较凯氏定氮法、CBB法,Lowry法准确度更高,但由于蛋白质所含的氨基酸种类和比例不同,因而适合蛋白质的测定方法也不同,应根据情况选择最优方法,力求达到最佳效果。
简介::改良双缩脲比色法测定食品中蛋白质含量。最大吸收峰为 540nm。线性范围为 0.00-55.13mg/25ml,该方法与凯氏定氮法用 t 检验法检验无显著差异 关键词:蛋白质;双缩脲反应;比色测定;凯氏定氮 中图分类号:O629.73 文献标识码:B 文章编号: improved method of biuret spectrometry determines content of protein in food YUE-Qiu-hong, (Xi’an zhongyuan International Certification Techical Services Co.LTD, Xi’an, 710068, China) Abstract:An improved method of biuret spectrometry determines the content of protein in food. The optimum absorbance peak gives 540nm.A positive correlation exists between absorbance and protein content in the rage of 0.00-55.13mg/25ml.This method is not apparently different from Kjeldahl by t-test. Key words:Protein; Biuret; Spectrometry; Kjeldahl 前言部分。 凯氏定氮法测定蛋白质含量结果准确,但耗时太长,危险性高,对环境污染大。双缩脲法传 统方法显色时间较长,溶液澄清度不好,重现性差。双缩脲反应受温度,时间影响较大,一般常温下 (20-25℃) 需 1h ,40℃需 15min,60℃需 5-10min。另外加入异丙醇可降低淀粉的溶解性,有利于蛋白质的提取和显色。 为了提高蛋白质测定的速度及结果的准确性,通过对双缩脲的改良,并与凯氏定氮法比较,以确定改良后的双缩脲法的可行性。 材料与方法 蛋白质中含有两个以上的肽键,能与 Cu2+在碱性条件下发生双缩脲反应,生成紫红色络合物,其颜色深浅与蛋白质含量成正比,而与蛋白质分子量无关。 材料与试剂 0.15mol/L KOH (分析纯 天津金汇太亚化学试剂有限公司) 谷朊粉 (山东成武山河粉业有限公司 ) ,全蛋粉(济南顺发食品有限公司 ) 双缩脲试剂:60ml 4%CuSO4.5H2O(分析纯,天津金汇太亚化学试剂有限公司生产 )200ml 2.5%酒石酸钾钠(分析纯辽宁嘉诚精细化学品有限公司生产 ) , 6 0m l 5 m o l/L KO H ,用蒸馏水定容至 50 0m l。 异丙醇(分析纯 苏州市相城区圣昊精细化工厂 ) 仪器与设备 UV-VIS 分光光度计 (北京美国哈希 HACH 公司) 25ml 具色塞比管 离心机 (80-2 型 常州拓兴实验仪器厂) 超级恒温水浴震荡器 (HZS-H 型 哈尔滨东联电子技术开发有限公司) 注明所用仪器型号(放在仪器名称前)、生产厂商、主要和关键配件、条件。 方法 标准溶液的配置 称取 2.0g 谷朊粉,0.15 mol/L KOH 溶解定容至 100ml,充分摇匀后粗滤, 以此滤液做为标准蛋白 液 。 取 此 滤 液 5 m l 做 凯 氏 定 氮 , 计 算 出 1 m l 中 含 蛋 白 质 的 量 ( mg ) 。 实验条件的确定: