简介:目的:构建HMGN2重组表达载体,探讨HMGN2分子抗菌作用.方法:用基因克隆的方法构建pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法纯化His-HMGN2融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定其分子量,行琼脂糖弥散法检测其抗菌功能.结果:成功构建了pET-32a-c(+)-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白对致病性大肠杆菌54080,54299以及金黄色葡萄球菌ATCC25923均有抗菌活性.结论:HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用.
简介:目的建立胰高血糖素样多肽2受体(glucagonlikepeptide-2receptor,GLP-2R)上调表达的Caco2细胞株,为研究GLP-2肠道保护机制构建体外模型。方法常规扩增抽提GLP-2R/pcDNA3.1质粒,经酶切、测序鉴定正确后,用脂质体转染法将其转染至Caco2细胞。G418抗性筛选,挑选耐药细胞克隆培养获得稳定细胞株。以HER293细胞、VE细胞、正常Caco2细胞及正常人小肠组织为对照,采用逆转录聚合酶链反应与蛋白质印迹法检测稳定转染细胞中mRNA及其蛋白的表达。结果扩增抽提GLP-2R/pcDNA3.1质粒后经酶切、测序结果正确。GLP-2RmRNA及其蛋白在HER293细胞及VE细胞中无表达,在正常Caco2细胞中表达微弱,在人小肠组织中有较强表达;转染GLP-2R后,Caco2/GLP-2R(+)细胞中GLP-2RmRNA及其蛋白表达明显增强。结论GLP-2R分布具有相对特异性,正常Caco2细胞中GLP-2R表达较弱;构建的caco2/GLP-2R(+)细胞模型成立,为深入研究GLP-2的作用机制奠定了良好基础。
简介:为了探讨足月胎盘组织源单个核细胞(humanmatureplacentatissue—derivedmononuclearcells,hPTMNC)中CD34^+细胞的体外增殖、分化能力,寻找新的造血干/祖细胞来源供临床应用,分别采用流式细胞术检测、造血干/祖细胞集落培养和体外无细胞因子长期培养的方法,测定胎盘组织源和脐血中的CD34^+细胞及其亚群和集落形成单位的数量。结果表明:胎盘组织源CD34^+细胞(2.74±0.61%)及其亚群CD34^+/CD38^-细胞(2.46±0.42%)、造血干/祖细胞集落CFU—GM(186.90±24.52)和BFU—E(101.40±13.35)水平都较脐血CD34^+细胞(1.73±0.32%)、CD34^+/CD38^-细胞(0.80±0.25%)、CFU—GM(136.90±25.15)、BFU—E(49.20±8.13)高;前者在体外无细胞因子培养条件下存活时间长,且细胞数量增加约2倍。结论:胎盘是胎儿期的造血器官,胎盘细胞成分更幼稚,是一种造血干/祖细胞移植的新的种子细胞。