简介：摘要增生性瘢痕（HS）影响患者功能与美观，给患者带来沉重的心理负担，但其具体的分子生物学水平发病机制尚不明确，因此该病仍然是临床难防难治疾病之一。微小RNA（miR）是一类具有调节基因表达作用的单链内源性非编码RNA。miR在HS的成纤维细胞内的异常转录可影响下游信号通路或蛋白的转导与表达，对miR及其下游信号通路、蛋白的探究有助于深入了解瘢痕增生的发生和发展机制。该文总结并分析近年来miR与多种信号通路如何参与HS的形成与发展，并进一步概述miR与HS中靶基因之间的相互作用。

简介：摘要目的探讨食管癌患者血清微小RNA（miR）-195表达及临床意义。方法回顾性分析2015年4月至2019年4月在北京怀柔医院105例食管癌患者的临床资料。采用实时定量荧光聚合酶链反应法检测血清miR-195相对表达量，并与同期90例健康体检者比较。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，分析血清miR-195相对表达量诊断食管癌的效能；生存分析采用Kaplan-Meier法，比较采用log-rank检验；采用多因素Cox分析影响食管癌患者预后的独立危险因素。结果食管癌患者血清miR-195相对表达量明显低于健康体检者（4.39 ± 1.86比7.17 ± 2.37），差异有统计学意义（t = 9.155，P<0.05）。以食管癌患者血清miR-195相对表达量平均值作为阈值，>4.39为高表达，50例；≤ 4.39为低表达，55例。血清miR-195相对表达量与肿瘤直径、TNM分期、浸润程度和淋巴结转移有关（P<0.05），而与性别、年龄、病理类型和分化程度无关（P>0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清miR-195相对表达量诊断食管癌的曲线下面积为0.819（95% CI 0.758~0.879，Z = 10.265，P<0.05），约登指数0.539，截断值取6.03时灵敏度为82.86%，特异度为71.11%。血清miR-195低表达患者中位生存时间明显短于高表达患者（25.7个月比36.6个月），5年总生存率明显低于高表达患者（18.2%比38.0%），差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Cox分析结果显示，miR-195和肿瘤直径是影响食管癌患者预后的独立危险因素（HR = 0.377和0.418，95% CI 1.276~5.599和1.478~7.608，P<0.01）。结论食管癌患者血清miR-195相对表达量明显低于健康人群，且miR-195表达越低，患者预后越差，miR-195可以作为食管癌患者早期诊断和预后评估的指标之一。

简介：摘要脓毒症是指宿主对感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍综合征，是导致急性肾损伤（AKI）发生的重要原因之一。脓毒症性急性肾损伤（SA-AKI）发病率高，预后差，病死率高，其发病过程十分复杂，且发病机制还未完全阐明。因此，寻找对SA-AKI早期诊断、治疗、疾病发展及预后判定有效的生物标志物是亟待解决的临床实际问题。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-135a沉默对急性肾损伤大鼠肾功能保护作用并探讨其分子机制。方法将2018年6月到2019年12月购自河南实验动物中心的60只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和miR-135a组。miR-135a组通过腹腔注射沉默miR-35a的腺相关病毒1×1011 vg/只；对照组和模型组通过腹腔注射对照miRNA腺相关病毒1×1011 vg/只。3组大鼠接种15 d后，模型组和miR-35a组连续15 d注射庆大霉素50 mg/kg建立急性肾损伤模型；对照组连续15 d注射等体积生理盐水。建模成功48 h后处死小鼠，采用自动生化仪分析大鼠血肌酐和血尿氮水平；采用苏木精-伊红(HE)染色分析肾脏病理学变化；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析趋化因子2(CCL2)和趋化因子3(CCL3) mRNA表达水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组大鼠外周血炎性因子水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-135a靶蛋白叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)表达水平。计量资料比较采用单因素方差分析。结果miR-135a组大鼠肾组织病理评分[(5.19±1.38)分]显著低于模型组[(8.09±3.09)分]，差异有统计学意义(t＝3.193，P<0.05)。miR-135a组大鼠造模48 h后血肌酐和尿素氮水平[(73.76±9.43)、(12.60±4.01) mmol/L]显著低于模型组[(130.37±10.54)、(29.43±5.12) mmol/L]，差异有统计学意义(t＝2.941、3.019，P<0.05)。miR-135a组大鼠肾组织CCL2和CCL3 mRNA表达水平(1.59±0.12、1.73±0.19)显著低于模型组(3.42±0.38、2.51±0.29)，差异有统计学意义(t＝2.012、2.240，P<0.05)。miR-135a组大鼠血清白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平[(165.76±14.36)、(196.250±15.65) pg/ml]显著低于模型组[(252.32±21.44)、(318.02±27.36) pg/ml]，差异有统计学意义(t＝3.212、3.937，P<0.05)。miR-135a组大鼠肾组织FoxO1蛋白表达水平(0.29±0.09)显著高于模型组(0.12±0.07)，差异有统计学意义(t＝2.719，P<0.05)。结论miR-135a沉默通过上调FoxO1蛋白表达水平，降低急性肾损伤大鼠炎症水平，保护大鼠肾功能。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-486对小鼠酒精性脂肪肝病的影响。方法同源的miR-486敲除小鼠(购自江苏集萃药康生物有限公司)杂合子交配得到子一代，选取8周龄子一代分为miR-486敲除对照组(KO-PAIR组)、miR-486敲除实验组(KO-ETOH组)、野生对照组(WT-PAIR组)和野生实验组(WT-ETOH组)，每组8只。实验组小鼠喂食5%TP4030D酒精饲料，对照组喂食TP4030C对照饲料，每只小鼠每天喂食15 ml，喂养4周。实验最后1 d上午酒精组联合1次酒精(31.5%)灌胃，对照组用糊精灌胃，每只100 μl。9 h后处死小鼠收集其肝组织和血清。肝组织切片行苏木精-伊红(HE)和饱和油红O染色；检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平；实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法(Western blot)检测脂质代谢相关分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的mRNA和蛋白水平；评估酒精性脂肪肝病的严重程度，并探讨机制。多样本间比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验分析。结果HE染色和饱和油红O染色显示，WT-ETOH组肝脏脂肪变最严重，KO-ETOH组脂肪变明显改善。与WT-ETOH组比较，KO-ETOH组的血清ALT、AST和TNF-α均明显降低[(124.875±38.591) U/L比(45.500±20.333) U/L，(190.750±23.789) U/L比(140.625±31.794) U/L，(73.407±17.121) μg/L比(50.056±12.717) μg/L，F＝32.503、5.876、30.865，P<0.05]，差异有统计学意义；与WT-ETOH组比较，KO-ETOH组AMPK的mRNA水平较高(0.61±0.09比1.06±0.11，F＝21.249，P<0.01)，差异有统计学意义，而ACC的mRNA水平较低(1.98±0.23比1.23±0.12，F＝68.584，P<0.01)，差异有统计学意义；Western blot实验检测进一步验证了这一结果。结论miR-486敲除可以减轻小鼠酒精性脂肪肝病，其机制可能是通过调节脂质代谢来实现的。

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简介：摘要微小RNA（miRNA）是一类内源性的、在进化上高度保守的非编码单链小RNA，其在多种生物和代谢过程中发挥着重要作用，包括信号转导及细胞增殖、分化和凋亡。miRNA可以担任抑癌基因或者癌基因，与肿瘤的形成有着密切的联系。近年来的研究结果显示，miRNA与甲状腺癌关系密切，参与了甲状腺癌的发生、发展过程，这与其具有的高侵袭性特征也存在相关性。笔者主要综述miRNA在不同类型甲状腺癌中的最新研究进展。

简介：无

简介：摘要目的探讨微小RNA-205(miR-205)在人增生性瘢痕中的表达及作用。方法采用实验研究方法。收集于2019年10月—2020年1月在北部战区总医院就诊的符合入选标准的6例增生性瘢痕患者[男1例、女5例，年龄(36±7)岁]的增生性瘢痕组织及同时期于同单位就诊的6例符合入选标准的外伤患者[男2例、女4例，年龄(38±9)岁]行皮瓣移植手术后剩余的正常皮肤组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测miR-205和血小板反应蛋白1(TSP-1)的mRNA表达情况。取增生性瘢痕组织，培养第3～5代成纤维细胞(Fb)，用于后续实验。取2批增生性瘢痕Fb，分成TSP-1＋miR-205对照组、TSP-1＋miR-205模拟物组和TSP-1突变＋miR-205对照组、TSP-1突变＋miR-205模拟物组，分别转染相应的序列。转染后48 h，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测荧光素酶和肾荧光素酶的表达，并计算两者比值，以此表示TSP-1的活性。取2批增生性瘢痕Fb，分为miR-205对照组、miR-205模拟物组、miR-205抑制物组及miR-205对照组、miR-205模拟物组、miR-205模拟物＋TSP-1组，分别转染相应的序列，转染后0(即刻)、12、24、36、48 h，用酶标仪检测细胞活力。取2批增生性瘢痕Fb，同细胞活力检测实验进行分组及处理，转染后24 h，行Hoechst 33258染色，观察细胞核皱缩情况，以此反映细胞凋亡情况。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、t检验及χ2检验。结果增生性瘢痕组织中miR-205的mRNA表达量为0.54±0.05，明显低于正常皮肤组织中的1.26±0.07(t＝8.213, P<0.01)。增生性瘢痕组织中TSP-1的mRNA表达量为1.46±0.07，明显高于正常皮肤组织中的0.68±0.11(t＝6.031，P<0.01)。转染后48 h，TSP-1＋miR-205模拟物组细胞表示TSP-1活性的荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.532±0.028，明显低于TSP-1＋miR-205对照组的0.998±0.012(t＝26.500，P<0.01)；TSP-1突变＋miR-205模拟物组细胞荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.963±0.012，与TSP-1突变＋miR-205对照组的0.976±0.010相近(t＝0.816，P>0.05)。转染后12、24、36、48 h，miR-205模拟物组细胞活力明显低于miR-205对照组(t＝6.169、12.670、27.130、12.670，P<0.05或P<0.01)；转染后0、12、24、36、48 h，miR-205抑制物组细胞活力明显高于miR-205对照组(t＝6.169、7.221、7.787、7.835、13.030，P<0.05或P<0.01)。转染后12、24、36、48 h，miR-205模拟物组细胞活力明显低于miR-205对照组和miR-205模拟物＋TSP-1组(t＝8.118、26.970、39.550、42.490，14.570、12.240、36.830、45.220，P<0.05或P<0.01)。转染后24 h，与miR-205对照组相比，miR-205模拟物组细胞凋亡增加，miR-205抑制物组细胞凋亡减少。转染后24 h，与miR-205模拟物组相比，miR-205对照组和miR-205模拟物＋TSP-1组细胞凋亡减少。结论miR-205可以通过抑制TSP-1的表达，抑制人增生性瘢痕Fb的增殖，促进Fb的凋亡，可能成为增生性瘢痕潜在的治疗靶点。

简介：摘要目的探讨微小RNA-627（miR-627）在人增生性瘢痕中的表达及作用。方法采用实验研究方法。收集2019年10月—2020年1月于北部战区总医院就诊的符合入选标准的6例增生性瘢痕患者［男2例、女4例，年龄（34±11）岁］的增生性瘢痕组织、同期于同单位就诊的6例符合入选标准的外伤患者［男3例、女3例，年龄（35±13）岁］行皮瓣移植手术后剩余的正常皮肤组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测miR-627的mRNA表达。取增生性瘢痕组织，培养第3~5代成纤维细胞（Fb），经鉴定后用于后续实验。取增生性瘢痕Fb，分为miR-627阴性对照组、miR-627模拟物组和miR-627抑制物组，分别转染对应的序列，转染后0（即刻）、12、24、36、48 h，用噻唑蓝法检测细胞活力；转染后24 h，用流式细胞术检测细胞凋亡情况；转染后24 h，用蛋白质印迹法检测胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）、Ⅰ型胶原和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平。取2批增生性瘢痕Fb，一批分为IGF-Ⅰ野生型+miR-627阴性对照组、IGF-Ⅰ野生型+miR-627模拟物组，另一批分为IGF-Ⅰ突变型+miR-627阴性对照组、IGF-Ⅰ突变型+miR-627模拟物组，分别转染对应的序列，转染后48 h，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒分别检测荧光素酶和肾荧光素酶的表达，并计算两者比值，反映IGF-Ⅰ的活性。取增生性瘢痕Fb，分为miR-627阴性对照组、单纯miR-627模拟物组和miR-627模拟物+IGF-Ⅰ组，分别转染对应的序列，转染后24 h，采用蛋白质印迹法检测IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达水平。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验及χ2检验。结果增生性瘢痕组织中miR-627的mRNA表达量为0.47±0.06，显著低于正常皮肤组织中的1.12±0.23（t=15.090，P<0.01）。转染后12、24、36、48 h，miR-627模拟物组细胞活力明显低于miR-627阴性对照组（t=9.918、34.370、13.580、61.550，P<0.05或P<0.01），miR-627抑制物组细胞活力明显高于miR-627阴性对照组（t=4.722、8.616、13.330、14.000，P<0.05或P<0.01）。转染后24 h，与miR-627阴性对照组的细胞凋亡率（8.42±0.47）%相比，miR-627模拟物组的（10.89±0.35）%显著升高（t=7.301，P<0.01），miR-627抑制物组的（5.00±0.22）%显著下降（t=11.510，P<0.01）。转染后24 h，与miR-627阴性对照组细胞IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原和α-SMA的蛋白表达相比，miR-627模拟物组明显下降（t=25.470、5.282、7.415，P<0.01），miR-627抑制物组明显升高（t=15.930、8.857、9.763，P<0.01）。转染后48 h，IGF-Ⅰ野生型+miR-627模拟物组细胞IGF-Ⅰ的荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.463±0.061，明显低于IGF-Ⅰ野生型+miR-627阴性对照组的0.999±0.011（t=16.852， P<0.01）；IGF-Ⅰ突变型+miR-627模拟物组细胞IGF-Ⅰ的荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.934±0.021，与IGF-Ⅰ突变型+miR-627阴性对照组的0.930±0.023相近（t=1.959，P>0.05）。转染后24 h，单纯miR-627模拟物组细胞IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原和α-SMA的蛋白表达量1.623±0.070、1.363±0.042、1.617±0.025均较miR-627阴性对照组的2.723±0.045、2.147±0.067、2.533±0.055明显降低（t=22.831、7.280、26.220，P<0.01），miR-627模拟物+IGF-Ⅰ组细胞IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原、α-SMA的蛋白表达量2.477±0.102、1.760±0.046、2.387±0.049均较单纯miR-627模拟物组明显升高（t=3.830、8.286、3.436，P<0.05或P<0.01）。结论人增生性瘢痕中miR-627表达下调；miR-627可通过靶向抑制IGF-Ⅰ的表达从而抑制人增生性瘢痕Fb的增殖，促进Fb的凋亡。

简介：摘要目的探讨食管癌患者血清微小RNA（miR）-195表达及临床意义。方法回顾性分析2015年4月至2019年4月在北京怀柔医院105例食管癌患者的临床资料。采用实时定量荧光聚合酶链反应法检测血清miR-195相对表达量，并与同期90例健康体检者比较。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，分析血清miR-195相对表达量诊断食管癌的效能；生存分析采用Kaplan-Meier法，比较采用log-rank检验；采用多因素Cox分析影响食管癌患者预后的独立危险因素。结果食管癌患者血清miR-195相对表达量明显低于健康体检者（4.39 ± 1.86比7.17 ± 2.37），差异有统计学意义（t = 9.155，P<0.05）。以食管癌患者血清miR-195相对表达量平均值作为阈值，>4.39为高表达，50例；≤ 4.39为低表达，55例。血清miR-195相对表达量与肿瘤直径、TNM分期、浸润程度和淋巴结转移有关（P<0.05），而与性别、年龄、病理类型和分化程度无关（P>0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清miR-195相对表达量诊断食管癌的曲线下面积为0.819（95% CI 0.758~0.879，Z = 10.265，P<0.05），约登指数0.539，截断值取6.03时灵敏度为82.86%，特异度为71.11%。血清miR-195低表达患者中位生存时间明显短于高表达患者（25.7个月比36.6个月），5年总生存率明显低于高表达患者（18.2%比38.0%），差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Cox分析结果显示，miR-195和肿瘤直径是影响食管癌患者预后的独立危险因素（HR = 0.377和0.418，95% CI 1.276~5.599和1.478~7.608，P<0.01）。结论食管癌患者血清miR-195相对表达量明显低于健康人群，且miR-195表达越低，患者预后越差，miR-195可以作为食管癌患者早期诊断和预后评估的指标之一。

简介：摘要目的观察尿道上皮细胞中微小RNA(miR)-155-5p通过靶向BTB-CNC异体同源体1(BACH1)促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应，从而参与尿道狭窄的发生和发展。方法生信分析结果BACH1可能是miR-155-5p的直接靶标，然后将miR-155-5p mimics或mimics NC与pmiR-Glo-BACH1-WT或pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染到SV-HUC-1细胞中，转染48 h后，检测荧光素酶活性。将BACH1小干扰RNA(siRNA)转染到SV-HUC-1细胞中，pcDNA3.1-BACH1转染到SV-HUC-1细胞中。转染24 h后，用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血管内皮生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原(collagen IV)的信使核糖核酸(mRNA)水平，同时应用蛋白质印迹法(Western blot)检测VEGF、FN和Collagen Ⅳ的蛋白质水平。两组间分析采用单因素方差分析。结果miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-WT共转染的细胞，与miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染的细胞比较的荧光活性明显下降(FLUCR与RLUCR比率为0.54±0.05比0.95±0.07，F＝73.65，P<0.05)。然而，无论转染pmiR-Glo-BACH1-MUT或pmiR-Glo-BACH1-WT，模拟对照细胞中的荧光强度都无明显变化(比率为1.03±0.04比1.01±0.03 F＝0.548，P>0.05)。IL-1β、IL-6和TNF-α水平在BACH1敲低细胞中增加(分别为615.57±29.44比285.37±23.97，F＝226.939；818.53±41.16比502.63±24.38，F＝130.824；596.63±41.16比366.57±28.84，F＝88.349)，P<0.01，但在BACH1过表达细胞中下降(分别为122.70±15.94比298.87±12.44，F＝227.675；282.50±33.16比511.30±39.76，F＝58.585；129.83±9.31比374.80±25.40，F＝245.926，P<0.01)。此外，VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(分别为1.65±0.08比0.96±0.06，F＝149.555；2.00±0.12比0.97±0.07，F＝160.243；1.65±0.06比0.96±0.02，F＝369.388，P<0.01)和蛋白质水平(分别为1.50±0.10比1.01±0.09，F＝38.382；1.42±0.10比0.99±0.09，F＝31.339；1.30±0.06比0.95±0.05，F＝62.642，P<0.01)也因BACH1敲低而增加，但因SV-HUC-1细胞中BACH1过表达而下降(mRNA水平分别为0.39±0.04比0.97±0.04，F＝340.18；0.52±0.04比0.94±0.03，F＝204.165；0.43±0.01比1.03±0.11，F＝47.206；蛋白水平分别为0.42±0.08比0.97±0.12，F＝45.375；0.52±0.05比0.96±0.12，F＝33.781；0.58±0.05比0.99±0.11，F＝36.900，P<0.01)。结论miR-155-5p通过靶向BACH1促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应。

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA，miR)调控胰腺癌吉西他滨耐药的分子作用机制。方法反转录聚合酶链反应(qPCR)检测来自桂林医学院附属医院2015年1月至2018年12月收治的胰腺癌患者的临床标本miR-23a-5p表达水平，细胞实验检测miR-23a-5p对吉西他滨处理下肿瘤蛋白53诱导的核蛋白1(TP53INP1)及细胞增殖和凋亡相关因子表达的影响，噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡情况。荧光素酶报告实验检测miR-23a-5p和TP53INP1是否直接作用。构建胰腺癌皮下成瘤小鼠模型，检测动物体内miR-23a-5p瘤体大小和吉西他滨耐药性的影响，组间比较采用多重比较检验或t检验。结果耐药组织中miR-23a-5p的表达量显著高于不耐药组(2.267±0.334，t＝4.355，P<0.01)，miR-23a-5p直接靶向调控TP53INP1降低其表达(0.423±0.095，t＝5.649，P<0.01)，miR-23a-5p过表达组(IC50＝13.23)胰腺癌细胞增殖活性显著高于对照组(IC50＝8.32，t＝5.119，P<0.01)，细胞凋亡比例[(15.080±0.838)%]显著低于对照组[(30.710±0.566)%，t＝7.163，P<0.01]，TP53INP1和miR-23a-5p共处理组(IC50＝7.932)胰腺癌细胞增殖水平显著低于miR-23a-5p单独处理组(IC50＝12.570，t＝12.57，P<0.01)，凋亡水平[(32.350±3.212)%]显著高于miR-23a-5p单独处理组[(15.680±1.358)%，t＝6.764，P<0.01]，动物实验结果表明敲低miR-23a-5p吉西他滨处理后显著抑制肿瘤生长[(169.090±25.889) cm3，t＝4.351，P<0.01；(0.097±0.031) g，t＝3.776，P<0.01]，差异均有统计学意义。结论miR-23a-5p介导TP53INP1调控胰腺癌细胞凋亡和吉西他滨耐药。

简介：摘要目的探讨微小RNA（miR）-216a-5p在妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘中的表达及其对滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响及可能机制。方法收集2018年10月至2019年10月烟台市烟台山医院的28例GDM孕妇（GDM组）和28例正常孕妇（对照组）胎盘组织，将体外培养HTR-8/SVneo细胞分为空白组（正常培养）、模拟物（mimics）-NC组（转染mimics-NC）和miR-216a-5p mimics组（转染miR-216a-5p mimics），采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织和各组HTR-8/SVneo细胞中miR-216a-5p表达水平，Transwell实验检测各组HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移，免疫印迹法（Western blot）检测各组HTR-8/SVneo细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指E盒结合蛋白-1（ZEB1）和N-钙黏附分子（N-cadherin）蛋白表达，双荧光素酶报告基因实验检测miR-216a-5p和ZEB1的靶向关系。结果与对照组比较，miR-216a-5p在GDM组胎盘组织中表达明显升高（2.86±0.35 vs 0.96±0.07, P<0.05）；与mimics-NC组比较，miR-216a-5p mimics组细胞中miR-216a-5p和E-cadherin蛋白表达水平明显升高[（1.01±0.08）vs（22.48±3.26），（0.25±0.03）vs（0.68±0.05）]，而细胞侵袭、迁移能力和细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达水平明显降低[（106.83±9.35）vs（59.16±5.28），（205.48±18.25）vs（87.32±6.50），（0.65±0.05）vs（0.35±0.02），（0.55±0.04）vs（0.32±0.03），（0.50±0.03）vs（0.36±0.02）]（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-216a-5p可与ZEB1靶向结合。结论miR-216a-5p在GDM患者胎盘组织中表达上调，可能通过靶向调控ZEB1表达抑制滋养层HTR-8/SVneo细胞转移。

简介：摘要目的探讨微RNA（miR）-19b-3p对胰腺癌PANC-1细胞原癌基因鼠双微体4（MDM4）表达和细胞增殖、凋亡活性的影响。方法采用脂质体转染法转染micrONrno-miR-19b-3p mimic（拟似组）、micrOFF mmu-miR-19b-3p inhibitor（阻遏组）和Lipofectamine 2000转染试剂（阴性组）至人胰腺癌PANC-1细胞，并以未特殊处理正常生长的PANC-1细胞作为空白组，采用荧光显微镜观察各组细胞转染是否成功，使用荧光实时定量PCR法检测微RNA-19b-3p转录水平以判断转染效率。转染24、48、72 h采用MTT法检测各组细胞增殖活性，采用荧光实时定量PCR法检测细胞内微RNA-19b-3p、MDM4含量，转染72 h采用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后PANC-1细胞凋亡情况。转染72 h采用免疫印迹法检测各组PANC-1细胞MDM4蛋白表达水平。结果转染后48 h 4组均有明显绿色荧光，微RNA-19b-3p转染PANC-1细胞转染效率为72.1%。转染24、48、72 h时拟似组PANC-1细胞增殖活性、微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平都高于空白组、阴性组和阻遏组（均P<0.05），阻遏组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平低于空白组、阴性组和拟似组（均P<0.05），空白组和阴性组细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平差异无统计学意义（均P>0.05）。空白组、阴性组、拟似组和阻遏组4组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达均与时间呈现正相关（细胞增殖活性r=0.629、0.582、0.524、0.472，微RNA-19b-3p mRNA表达水平r=0.449、0.475、0.501、0.399，FL-MDM4表达水平r=0.504、0.423、0.447、0.431，S-MDM4表达水平r=0.472、0.428、0.414、0.408，均P<0.05）。转染72 h时拟似组细胞凋亡水平低于空白组、阴性组、阻遏组[（2.02±0.48）%比（3.48±0.63）%、（3.52±0.52）%、（8.23±0.82）%，均P<0.05]，阻遏组细胞凋亡水平高于空白组、阴性组和拟似组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。转染72 h拟似组MDM4蛋白表达水平高于空白组、阴性组和阻遏组[（1.162±0.114）比（0.749±0.126）、（0.663±0.137）、（0.347±0.092），均P<0.05]，阻遏组MDM4蛋白表达水平低于空白组和阴性组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论微RNA-19b-3p可能通过影响MDM4表达，进而影响p53基因活性，促进胰腺癌的增殖，微RNA-19b-3p可能成为治疗胰腺癌新的靶点。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1靶向微小RNA(miR)-149-5p对于脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法采用Lipofectamine 2000进行细胞转染构建si-NEAT1组、过表达miR-149-5p组和miR-149-5p抑制组，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖抑制率，双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1靶向调控miR-149-5p，Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数，蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达，组间比较采用t检验。结果人胶质瘤细胞U251中NEAT1水平(1.03±0.05)明显增加(t＝13.613，P<0.01)，而miR-149-5p(0.41±0.07)则是明显降低(t＝12.111，P<0.01)。抑制NEAT1表达，si-NEAT1组细胞增殖抑制率明显增加[(29.48±2.67)%，t＝13.809，P<0.01]，而细胞迁移数[(35.33±7.57)个]和侵袭数[(27.33±6.81)个]则明显降低(t＝4.395、4.962，P<0.05)，磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平明显降低(t＝6.959、8.661，P<0.05)。过表达miR-149-5p，细胞增殖抑制率[(29.32±6.41)%]同样明显增加(t＝6.922，P<0.05)，细胞迁移数(35.67±6.51)和侵袭数(28.00±8.89)同样明显降低(t＝4.392、4.471，P<0.05)，p-Akt和p-mTOR水平明显降低(t＝4.337、9.981，P<0.05)。NEAT1-WT活性受到miR-149-5p的抑制(t＝15.251，P<0.01)，转染pc-DNA-NEAT1能显著降低miR-149-5p(t＝8.178，P<0.01)，而转染si-NEAT1则明显上调miR-149-5p(t＝5.988，P<0.05)。与si-NEAT1+抗NC组比较，si-NEAT1+抗miR-149-5p组细胞增殖抑制率表达明显降低(t＝7.955、13.261，P<0.05)，而迁移细胞数、侵袭细胞数、p-Akt和p-mTOR水平明显增加(t＝4.841、3.784、5.589、4.572，P<0.05)。结论Lnc NEAT1靶向miR-149-5p调控Akt/mTOR信号通路可促进脑胶质瘤细胞增殖和转移，抑制miR-149-5p表达可逆转抑制Lnc NEAT1表达后对于脑胶质瘤细胞增殖和转移的影响。

简介：摘要目的探讨顺铂对肝癌细胞衰老的诱导作用。方法使用2 μg/ml顺铂处理人肝癌细胞系HepG2，采用MTS法检测细胞增殖、流式细胞系检测细胞周期变化、RT－PCR和Western blot检测衰老相关基因p19、p21表达量、免疫荧光法检测p21表达情况；裸鼠移植人肝癌模型腹腔注射相应药物，检测肝癌生长转移及p21蛋白表达。结果随着顺铂处理时间延长，顺铂组增殖率较对照组降低，差异有统计学意义(t＝8.958，P<0.05)。流式细胞检测显示，顺铂组和对照组G2期细胞分别为19.90%±0.42%、12.57%±0.84%，细胞停滞于G2期(t＝14.415，P<0.05)。顺铂组与对照组p19基因相对表达量分别为(2.23±0.05)、(1.00±0.02)；p21基因相对表达量分别为(3.26±0.11)、(1.00±0.02)，p19及p21表达均升高(分别t＝43.750，56.541，均P<0.05)；顺铂组裸鼠瘤体体积较对照组缩小，p21蛋白表达水平较对照组增加(P<0.05)。结论顺铂可通过p19/p21相关途径诱导肝癌细胞衰老。

简介：

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-216a、miR-324-5p、miR-29a在急性胰腺炎（AP）患者外周血中表达的意义及与胰腺炎并发肝损伤的相关性。方法采用病例对照研究设计，选取2017年6月至2019年5月商丘市第一人民医院收治的130例AP患者，分为轻症AP组（MAP组）和中重症AP组（SAP组），肝损伤组54例（MAP 20例、SAP 34例）与非肝损伤组76例（均为MAP）；另选取40名健康志愿者为健康组。比较MAP组、SAP组、健康组以及肝损伤组与非肝损伤组外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a表达水平，并分析其与临床指标相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血各miRNA水平对AP并发肝损伤的预测价值。结果MAP组、SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于健康组，miR-324-5p水平低于健康组（均P<0.01）；SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于MAP组，miR-324-5p水平低于健康组（均P<0.01）。Balthazar CT评分、急性生理与慢性健康状况评分（APACHEⅡ）评分、C反应蛋白水平、住院时间与外周血miR-216a、miR-29a水平均呈正相关（均P<0.05），与miR-324-5p水平呈负相关（均P<0.05）。肝损伤组外周血miR-216a、miR-29a水平高于非肝损伤组，且在肝损伤组中SAP患者高于MAP患者（均P<0.05）；肝损伤组外周血miR-324-5p水平低于非肝损伤组，且肝损伤组中SAP患者低于MAP患者（均P<0.05）。外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a预测AP并发肝损伤的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.694、0.750、0.814。结论miR-216a、miR-29a水平在AP患者外周血中表达增高，miR-324-5p水平降低，与Balthazar CT评分、APACHEⅡ评分、C反应蛋白水平、住院时间关系密切，且对AP并发肝损伤有一定预测价值，其中miR-29a预测价值最高。

简介：摘要目的观察尿道上皮细胞中微小RNA(miR)-155-5p对转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路的影响，从而参与创伤性尿道狭窄炎症和纤维化的调节。方法将miR-155-5p mimics及miR-155-5p inhibitor转染到尿道上皮细胞SV-HUC-1中，转染24 h后使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SV-HUC-1细胞中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白细胞介素(IL)-1β和IL-6的水平。qPCR和蛋白印记分别检测血管内皮生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ)、TGF-β、Smad3和Smad7的mRNA和蛋白表达水平。组间分析采用单因素方差分析。结果IL-1β、IL-6和TNF-α的水平在转染miR-155-5p mimics后增加(496.27±18.87比255.77±21.40，F＝213.184；931.93±78.50比494.90±30.81，F＝80.569；915.70±30.02比486.60±25.05，F＝361.323，P<0.01)，但在转染miR-155-5p inhibitor后下降(140.10±14.77比294.07±10.26，F＝219.855；257.63±33.75比495.47±29.66，F＝84.052；275.47±30.31比484.20±25.34，F＝83.746，P<0.01)。miR-155-5p mimics增加了SV-HUC-1细胞中VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(1.87±0.08比0.96±0.07，F＝251.787；1.78±0.12比0.96±0.06，F＝116.780；2.04±0.12比0.98±0.06，F＝197.344)和蛋白质水平(1.55±0.05比0.98±0.12，F＝60.460；2.28±0.04比1.00±0.11，F＝391.095；1.97±0.06比0.99±0.06，F＝407.516)，但miR-155-5p inhibitor降低了SV-HUC-1细胞中VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(0.47±0.06比0.99±0.07，F＝104.457；0.54±0.06比0.98±0.08，F＝58.767；0.39±0.03比0.96±0.07，F＝162.360)和蛋白质水平(0.35±0.03比0.98±0.09，F＝137.388；0.32±0.05比0.99±0.09，F＝127.047；0.43±0.05比0.98±0.06，F＝137.224，P<0.01)。转染miR-155-5p mimics后TGF-β和Smad3的mRNA表达水平(2.42±0.07比1.01±0.05，F＝817.164；1.87±0.08比0.95±0.02，F＝399.340，P<0.01)和蛋白表达水平(1.56±0.13比0.99±0.05，F＝51.031；1.27±0.02比0.98±0.07，F＝48.519，P<0.05)升高，转染miR-155-5p inhibitor后下降mRNA水平(0.41±0.03比1.02±0.06，F＝249.053；0.38±0.05比1.00±0.04，F＝342.250)和蛋白水平(0.14±0.07比1.02±0.08，F＝194.139；0.72±0.03比1.02±0.09，F＝30.899，P<0.01)；而Smad7的mRNA水平(0.43±0.05比0.97±0.02，F＝301.655)和蛋白水平(0.20±0.03比0.95±0.04，F＝684.122)被miR-155-5p mimics下调并被miR-155-5p inhibitor上调(mRNA水平为2.16±0.07比0.97±0.07，F＝433.500；蛋白水平为1.40±0.09比0.98±0.07，F＝41.779，P<0.01)。结论miR-155-5p通过激活TGF-β/Smad信号通路，从而参与创伤性尿道狭窄炎症和纤维化的调节。