简介:目的通过比较观察激素敏感的MCF-7细胞在体外干细胞培养和常规培养条件下雌激素受体(ER)变化及对内分泌治疗药物的敏感性变化,初步探讨肿瘤干细胞与内分泌耐药的关系。方法分别于常规培养及干细胞培养条件下(悬浮球培养)培养激素敏感的MCF-7细胞株,流式细胞仪检测分子表型CD44^+CD24^-/low与CD44+CD24+亚群细胞比例变化,免疫细胞化学法测定ERa和ERl3的表达变化,MTT法检测细胞对他莫西芬的敏感程度。分别以t检验、卡方检验、方差分析进行统计分析。结果干细胞培养条件下CD44^+CD24^-/low亚群细胞的比例为(1.60±0.08)%,比常规培养条件下的(0.27±0.08)%显著增加(t=-12.10,P=0.00),而CD44+CD24+亚群细胞比例由(5.59±0.88)%增至(30.63±4.40)%(t=-5.58,P=0.00)。干细胞培养条件培养下ERα和ERβ表达率较常规培养下调,分别由85.27%和90.53%降至69.43%和73.20%,差异有统计学意义(χ^2=214.64,P=0.00;χ^2=303.58,P=0.00),且对他莫西芬的敏感性降低,IC50值由(9.82±0.31)μmol/L升至(16.46±0.50)μmol/L,再次诱导分化后ER并未出现上调,对他莫西芬的敏感性仍旧降低(F=113.63,P=0.00)。结论与常规培养相比较,体外干细胞培养条件下可以培养出含高比例具有干细胞特性的CD44+CD24^-/low与CD44+CD24+亚群细胞的微球囊,其ER仍为阳性表达,但对他莫昔芬治疗敏感性减低,推测其可能是乳腺癌内分泌耐药的原因。
简介:摘要目的探究微小RNA(miR)-373-3p对胶质母细胞瘤细胞自噬和舒尼替尼敏感性的影响及其机制。方法体外常规培养U251细胞,采用50 μmol/L舒尼替尼作用72 h构建耐舒尼替尼U251细胞株。(1)采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测U251、耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达。将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、无义序列组、miR-373-3p模拟物组,后2组细胞分别转染miR-373-3p无义序列、miR-373-3p模拟物,采用RT-qPCR检测细胞miR-373-3p的表达。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组,转染后采用CCK-8法检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡率,免疫荧光染色检测细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达,Western blotting检测细胞凋亡、自噬相关蛋白的表达。(2)构建pGL3-自噬相关基因7(ATG7)野生型(WT)和pGL3-ATG7突变型(MUT)质粒,双荧光素酶报告分析系统检测miR-373-3p模拟物组、无义序列组细胞荧光素酶活性。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组,转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。(3)将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、ATG7阴性对照组、ATG7过表达组,转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。将U251细胞、耐舒尼替尼U251细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组,转染后采用CCK-8法检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡率,Western blotting检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果(1)与U251细胞比较,耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组、无义序列组比较,miR-373-3p模拟物组细胞miR-373-3p的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与U251组比较,耐舒尼替尼U251组细胞活性增加,凋亡率下降,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达升高,Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)/Caspase 3值降低,Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值增加,p62蛋白的表达减少。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较,miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率提高,Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达和活化Caspase 3/Caspase 3值升高,Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低,p62蛋白的表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与U251组比较,耐舒尼替尼U251组LC3荧光颗粒增多且荧光亮度升高;与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较,miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞荧光颗粒减少且亮度减弱。(2)对于pGL3-ATG7 WT质粒,miR-373-3p模拟物组荧光素酶活性低于无义序列组,差异有统计学意义(P<0.05)。与U251组比较,耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达增加;与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较,miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与空白对照组、ATG7阴性对照组比较,ATG7过表达组细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达均增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较,miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率较高,Bcl-2蛋白的表达降低,活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达升高,Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低,p62蛋白的表达升高;与miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组比较,miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组细胞活性增加,凋亡率降低,Bcl-2蛋白的表达升高,活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达降低,Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值升高,p62蛋白的表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-373-3p通过调控自噬而增强胶质母细胞瘤细胞舒尼替尼敏感性,其机制可能与靶向ATG7有关。
简介:摘要:某发射装置壳体材料原为 0Cr15Ni5Cu2Ti沉淀硬化不锈钢,因供应采购的板材翘曲不平,表面有麻点,影响后续零件加工与成型。现采用 15-5PH/AMS 5862板材进行零件加工成型与焊接。但公司无 15-5PH/AMS 5862沉淀硬化不锈钢板材的相关焊接试验数据。因此对 15-5PH/AMS 5862沉淀硬化不锈钢的焊接工艺进行试验研究,获得不同焊接工艺下焊缝的抗拉强度、金相组织等试验数据,为采用 15-5PH/AMS 5862沉淀硬化不锈钢成型、焊接,提供试验数据理论支持。
简介:胶体的水晶模板或蛋白石与一包装结束以脸为中心立方(fcc)格子被准备从单音由垂直沉积驱散聚苯乙烯(PS)范围。为单体先锋的渗入的提供的空空格压克力填写了的模板从随后的copolymerization每硫酸盐,以及微胶化吃了酸,压克力酰胺和铵。样品为完全移开PS范围形成PAM反的蛋白石水疗院胶化(IOHPAM)或PAM/PAA反的蛋白石水疗院胶化(IOHPAM/PAA)沉浸于dimethylbenzenephotonic晶体。PS范围坐飞机被代替范围,它通过窗户互连对方。对为IOHPAM和IOHPAM/PAA电影有二座山峰的pH表演的回答的学习,而是IOHPAM/PAA达到顶点到更高的pH的移动,和山峰与AA内容是独立的。
简介:TheimpactofpHchangesonmicrobialbiomasscarbon(Cmic)andmicrobialbiomassphosphorus(Pmic)wereexaminedfor3redsoilsundercitrusproductionwithdifferentlengthsofcultivation.SoilpHsignificantlyaffectedCmicandPmic.TheCmicandPmicchanges,asafunctionofsoilpH,appearedtofollowanormaldistributionwiththeoriginalsoilpHvalueattheapexandaspHincreasedordecreasedcomparedtotheoriginalsoilpH,CmicandPmicdeclined.Moreover,therewerecriticalpHvaluesatbothextremes(3.0ontheacidicsideand8.0to8.5onthealkalineside),beyondwhichmostofmicroorganismscouldneversurvive.TheeffectofpHonCmicandPmicwasalsorelatedtotheoriginalsoilpH.ThehighertheoriginalsoilpHwas,thelessCmicorPmicwereaffectedbypHchange.ItissuggestedthatsoilmicroorganismsthatgrowinasoilenvironmentwithamoreneutralsoilpHrange(I.e.pH5.5-7.5)mayhaveagreatertolerancetopHchangesthanthosegrowinginmoreacidicormorealkalinesoilpHconditions.