简介:摘要目的探讨脑胶质瘤中p16及p53基因的表达及其相关性分析。方法采用免疫组化方法检测43例已确诊人脑胶质瘤中p16及p53的表达。结果p16表达缺失率为60.5%,p53阳性率为48.8%。P16表达缺失在Ⅲ级(43.6%)、Ⅳ级(85.7%)脑胶质瘤中显著高于Ⅰ-Ⅱ级(22.2%)(P<0.05)。p53表达阳性在Ⅲ级(62.5%)、Ⅳ级(64.3%)脑胶质瘤中显著高于Ⅰ-Ⅱ级(15.4%)(P<0.05)。p16阳性且p53阴性(即正常)者在Ⅱ级中为18.2%(2/11),在Ⅲ、Ⅳ级病例中均为0;pl6缺失表达伴P53突变(均异常)者在Ⅱ级肿瘤中仅为16.7%(1/6),而在Ⅲ、Ⅳ级病例中两者复合改变者为40.0%(8/20)。两种基因的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小及发病部位无相关性。结论P16、P53基因异常对脑胶质瘤的形成及其发展有重要作用,p16、p53在脑胶质瘤中的异常表达与肿瘤的分化程度相关。
简介:应用DNA聚合酶链式反应(PCR)技术,对p16抑癌基因(CDKN2)进行体外定点突变,在p16cDNA中引入第48位密码子CCG(Pro)→CTG(Leu)和第74位密码子GAC(Asp)→AAC(Asn)突变,构建了p16-P48L和p16-D74N突变体。野生型和突变型p16cDNA克隆于pcDNA3构建pCMV-p16、pCMV-p16P48L和pCMV-p16D74N真核表达载体,导入纯合缺失p16基因的人肺癌细胞株H460,经RNA点杂交、RNA印迹和细胞免疫化学染色,检测到P16表达。通过比较表达野生型和突变型P16的H460细胞在~3H-TdR掺入及细胞所在周期的差异,证实P16表达抑制细胞进入S期,而P48L和D74N突变体对细胞进入S期没有什么影响,提示P48L和D74N突变导致P16蛋白功能丧失。
简介:摘要目的探讨miR-520c-3p对糖尿病肾脏病患者近端肾小管上皮细胞焦亡的影响及其分子机制。方法收集2019年6月至2020年12月在郑州大学第一附属医院就诊的糖尿病肾脏病患者(DKD组,4例)和糖耐量正常肾脏肿瘤手术者(正常对照组,4例)的肾脏组织。HE染色、过碘酸-希夫染色(PAS)和透射电镜观察肾脏组织病理学变化。取生长状态良好的人近端肾小管上皮(HK-2)细胞传代至培养板内,并分成如下8组:正常葡萄糖组(NG,5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,30.0 mmol/L葡萄糖)、抑制物组(正常葡萄糖+转染miR-520c-3p抑制物)、抑制物对照组(正常葡萄糖+转染miR-520c-3p抑制物阴性对照物)、模拟物组(高糖+转染miR-520c-3p模拟物)、模拟物对照组(高糖+转染miR-520c-3p模拟物阴性对照物)、模拟物+TXNIP共转染组(高糖+共转染miR-520c-3p模拟物+TXNIP)、共转染阴性对照组(高糖+共转染miR-520c-3p模拟物+TXNIP阴性对照物)。活细胞动态实时监测细胞活性,碘化丙啶(PI)染色检测细胞焦亡情况;免疫荧光染色、荧光原位杂交、实时定量PCR和Western blotting法检测miR-520c-3p、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)和细胞焦亡分子NOD样受体蛋白3(NLRP3)、活化半胱氨酸蛋白酶-1(cl-caspase-1)、消皮素D(GSDMD)的mRNA和蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液白细胞介素-1β(IL-1β)含量;双荧光素酶报告基因实验明确miR-520c-3p和TXNIP之间的相互作用。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果与对照组相比,DKD组肾脏组织肾小管炎性细胞增多,伴随miR-520c-3p表达水平下降,TXNIP表达升高(均P<0.05);肾小管特异性标志物水通道蛋白1(AQP1)与NLRP3和GSDMD焦亡蛋白共定位均增加。在HK-2细胞中,与NG组相比,HG组焦亡细胞增多,伴随miR-520c-3p表达水平下降,TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和细胞上清液IL-1β浓度升高(均P<0.05);与模拟物对照组相比,模拟物组中miR-520c-3p表达量更高,TXNIP mRNA表达量更低,TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和IL-1β浓度更低(均P<0.01),TXNIP和NLRP3共表达定位减少(P<0.05);与抑制物对照组相比,抑制物组中miR-520c-3p表达量更低,TXNIP mRNA表达量更高,TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和IL-1β浓度更高(均P<0.01)。与共转染阴性对照组相比,模拟物+TXNIP共转染组的TXNIP和NLRP3共表达定位增加,TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平更高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明,TXNIP是miR-520c-3p直接作用靶点,miR-520c-3p通过靶向调节TXNIP表达,抑制高糖诱导的细胞焦亡。结论miR-520c-3p通过抑制TXNIP/NLRP3途径减轻高糖诱导的近端肾小管上皮细胞焦亡。
简介:摘要目的研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133,并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133,采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组,A组不作任何处理,B组转染空质粒,C组转染pCDNA3. 1+miRNA-144-3p质粒,采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量,采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)值;采用CCK-8法检测各组增殖率,采用流式细胞术检测各组凋亡率。结果顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05];B组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义(P>0.05);C组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组(P<0.05),细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组(P<0.05)。结论miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性,促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。
简介:摘要目的研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133,并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133,采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组,A组不作任何处理,B组转染空质粒,C组转染pCDNA3. 1+miRNA-144-3p质粒,采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量,采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)值;采用CCK-8法检测各组增殖率,采用流式细胞术检测各组凋亡率。结果顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05];B组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义(P>0.05);C组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组(P<0.05),细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组(P<0.05)。结论miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性,促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。
简介:目的:研究miR-152分子对NK细胞杀伤JEG-3细胞效应的影响。方法:在滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染pre-miR-152(实验组),Cy3标记的pre-miRNA-control(阴性对照),空白对照(NC)为未转染的JEG-3细胞。转染48h进行NK细胞的细胞毒测定,观察各组NK细胞对JEG-3细胞的杀伤效应。结果:与对照组相比,实验组NK细胞对JEG-3细胞的平均杀伤率显著增高(P〈0.05),且随着效靶比的增高,杀伤率也增大。空白对照组与阴性对照组之间的NK细胞杀伤能力无显著差异(P〉0.05)。结论:miR-152可以提高NK细胞对滋养细胞的杀伤作用。
简介:摘要目的探讨1例特殊面容合并多发畸形患儿的遗传学病因并分析其与临床表型的相关性。方法选取2020年11月4日因"孕妇胎膜早破、双胎妊娠(双绒毛膜双羊膜囊)、妊娠期糖尿病"于孕34+6周自然分娩出生的1例患儿作为研究对象,应用常规G显带方法分析患儿的染色体核型,再用高通量测序法分析患儿拷贝数变异(CNVs)的情况。结果患儿为男性,顺产出生,表现为特殊面容、尿道下裂、隐睾、四肢肌张力低等。患儿染色体核型为46,XY,del(3)(p26),高通量测序结果提示染色体3p26.3-p25.3 (60 000-9 860 000)存在约9.80 Mb的缺失,共涉及33个蛋白编码基因。结论3p26.3p25.3缺失可能是患儿的致病原因,需对其进行持续随访,提高生存质量。
简介:Inthisstudy,weinvestigatetheinfluenceofdopingonthechargetransferanddevicecharacteristicsparametersinthebulkheterojunctionsolarcellsbasedonpoly(3-hexylthiophene)(P3HT)andamethanofuUerenederivative(PCBM).Organicsemiconductorsarealsoknowntobenotpureandtheyhavedefectsandimpurities,someofthemarebeingchargedandactasp-typeorn-typedopants.Calculationsofthesolarcellcharacteristicsparametersversusthep-dopinglevelhavebeendoneatthreedifferentn-dopings(N_d)thatconsistof5×10~(17)cm~(-3),10~(18)cm~(-3),and5×10~(18)cm~(-3).Weperformtheanalysisofthedopingconcentrationthroughthedrift-diffusionmodel,andcalculatethecurrentandvoltagedopingdependency.Wefindthatatthreedifferentn-dopantlevels,optimump-typedopingisaboutN_p=6×10~(18)cm~(-3).Simulationresultshaveshownthatbyincreasingdopinglevel,V_(oc)monotonicallyincreasesbydoping.CellefficiencyreachesitsmaximumatsomewhathigherdopingasFFhasitspeakatN_p=3×10~(18)cm~(-3).Moreover,thispaperdemonstratesthattheoptimumvalueforthep-dopingisaboutN_p=6×10~(18)cm~(-3)andoptimumvalueforn-dopantisN_d=10~(18)cm~(-3),respectively.Thesimulatedresultsconfirmthatdopingconsiderablyaffectstheperformanceoforganicsolarcells.
简介:Thecopolymerizationofp-diethynylbenzene(PDEB)withphenylacetylene(PhA),4,4’-diethynylbiphenyl(DEBP)orm-diethynylbenzene(MDEB)arestudiedbyvaryingmoleratiosofmonomers.WhenthemoleratiosofPDEB/PhAarelessorequalto1/5,thecopolymersaresolubleandfusible,buttheothercopolymersareinsolubleandinfusible.Theresultsshowthatthegoodsolventofcross-linkedcopolymersisbenzeneandtheirsolubilityparameteris9.15cal0.5.cm(-1.5).Andtheirswellability(θp),Hugginsparameter(χ),density(d425)andtheaveragemolecularweightsbetweencrosslinks(c)aremeasured.Itisfoundthatθpandcofcopolymersaregreaterbutd425islessthanthatofrespectivehomopolymers.IRspectrashowthatthecopolymershavetransoidconfigurationandsmallnumberofunreactedethynylgroupsexistinthecopolymers.Themechanismaboutthepolymerizationoracetylenicderivativesinitiatedby(Ph3P)2PdCl2isdiscussed.