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  • 简介:背景:目前关于联合应用Caspase抑制剂及Cocktail蛋白酶抑制剂在胰岛细胞分离纯化过程中对胰岛细胞的影响的研究还较少有报道。目的:比较Caspase抑制剂及Cocktail蛋白酶抑制剂对胰岛细胞在分离纯化及培养过程中的保护作用。方法:取新生猪,体外分离、纯化和培养猪胰岛,培养24h后分为3组:①空白对照组。②消化时加抑制剂组仅在消化过程中加入Caspase抑制剂及Cocktail蛋白酶抑制剂。③消化及培养时加抑制剂组在消化及培养的过程中均加入Caspase抑制剂及Cocktail蛋白酶抑制剂。AO-EB染色定性观察细胞形态及凋亡情况,流式细胞术定量检测细胞活力及凋亡。结果与结论:空白对照组β细胞所占百分比为66.91%,消化时加抑制剂组为84.58%,消化及培养时加抑制剂组为87.15%;空白对照组活细胞、凋亡细胞及死亡细胞的比例分别为56.52%、16.15%、21.25%,消化时加抑制剂组分别为62.27%、14.66%、14.47%,消化及培养时加抑制剂组分比为73.09%、6.83%、10.28%。结果表明,在消化以及体外培养的过程中均加入Caspase抑制剂及Cocktail蛋白酶抑制剂可明显减少细胞的损失,并且可以增加胰岛β细胞的百分比。

  • 标签: 组织构建 组织工程 胰岛细胞 CASPASE抑制剂 Cocktail蛋白酶抑制剂
  • 简介:摘要目的探讨全程C-反应蛋白联合白细胞检测在儿童呼吸道感染中的意义。方法选取我院诊治的60例呼吸道感染患儿作为研究对象,设为研究组,另选取同期在我院体检的60例健康儿童进行对照研究,设为对照组,两组儿童均进行全程C-反应蛋白及白细胞检测,对比其检测结果,分析检测的阳性率。结果对比两组儿童的全程C-反应蛋白及白细胞检测结果,研究组均明显高于对照组,差异显著(P<0.05);对比研究组患儿不同时期的全程C-反应蛋白及白细胞检测结果,入院初均明显高于恢复期,差异显著(P<0.05);对比研究组患儿不同病原体感染的全程C-反应蛋白及白细胞检测结果,细菌感染组均明显高于病毒感染组、支原体感染组,差异显著(P<0.05)。结论全程C-反应蛋白联合白细胞检测在儿童呼吸道感染中具有较高的应用价值,有助于提升临床诊断的准确率。

  • 标签: 全程C-反应蛋白 白细胞 检测 儿童呼吸道感染 意义
  • 简介:目的构建可注射型生物蛋白胶包埋骨髓基质细胞的工程化组织,体外培养并研究其生物学特性,探讨将可注射型生物蛋白胶作为组织工程支架用于临床的实验基础。方法体外培养浇铸有骨髓基质细胞的生物蛋白胶,通过倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜观察载体内细胞生长及载体降解情况,5-溴脱氧尿苷(5-Bromodeocyuridine,BrdU)掺入标记后免疫组化等方法研究可注射型载体内包埋细胞增殖情况。结果骨髓基质细胞包埋于生物蛋白胶内能很好地存活并增殖,2d后细胞呈典型的成纤维细胞形态;6d后生物蛋白胶边缘部分开始降解,细胞脱落至培养板;体外培养14d,细胞生长良好,大部分生物胶降解,脱落的细胞增多,贴壁生长的细胞形态正常;3周后生物蛋白胶完全降解。结论生物蛋白胶聚合后包埋的种子细胞能够正常增殖,生物蛋白胶是一种理想的适用于微创方法修复组织的可注射型组织工程培养和移植的支架。

  • 标签: 生物蛋白胶 骨髓基质细胞 组织工程 支架
  • 简介:本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest7.4软件分析电泳图谱,比较不同的实验条件对图谱的影响。结果显示:通过优化样品制备和电泳中的实验环节,获得了蛋白点分离清晰的图谱,平均蛋白点数为780±73,重复实验所得蛋白点匹配率为82±5%。结论:成功建立了人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,该方法适用于后续各亚型白血病比较蛋白组学研究。

  • 标签: 白血病 双向电泳 蛋白质组
  • 简介:目的检测细胞外基质蛋白-1(ECM1)在原发性肝癌中的表达,探讨其在肝癌转移中的临床意义.方法收集2008年6月至2009年12月安徽医科大学附属省立医院手术切除的60例原发性肝癌患者的癌组织及癌旁组织标本和9例肝外伤患者的正常肝组织标本,采用免疫组织化学染色和Westernblot法检测ECM1的表达,分析ECM1表达与肝癌临床病理特征之间的关系.率的比较采用x2检验和Fisher确切概率法,均数比较采用t检验.结果免疫组织化学染色显示ECM1主要表达在细胞质中.肝癌组织中ECM1阳性表达率为73%,显著高于癌旁组织的20%和正常肝组织的22%(x2=34.286,7.044,P<0.05).ECM1的表达水平与肝癌有无转移和TNM分期有关(x2=5.455,4.275,P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小、有无包膜、分化程度、血清AFP水平和HBsAg表达等无明显关系(x2=2.841,0.014,0.000,0.734,0.075,0.000,0.031,P>0.05).Westernb1ot检测结果显示肝癌组织中ECM1相对含量为25.49±4.61,显著高于癌旁组织的3.00±0.37和正常肝组织的2.94±0.21(t=31.962,31.699,P<0.05).结论ECM1在原发性肝癌组织中的表达高于癌旁和正常肝组织,且与肝癌有无转移和TNM分期有关,提示ECM1可能参与了肝癌的转移,可能是肝癌转移的预测指标之一.

  • 标签: 肝肿瘤 细胞外基质蛋白-1 转移
  • 简介:目的:通过内镜下观察口服腐蚀剂后上消化道黏膜损伤情况,探讨白细胞(WBC)、C-反应蛋白(CRP)与损伤程度之间关系,为病情判断提供依据,同时为进行早期干预治疗提供研究基础。方法:回顾性分析150例口服腐蚀剂致上消化道损伤患者,评估内镜下上消化道损伤程度,分析性别、年龄、WBC、CRP与损伤程度之间的相关性,同时将相关性因素与损伤分级进行两两比较。结果:根据Zargar损伤分级标准,将上消化道损伤分级,可分为Grade0、Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲa、Ⅲb级,将患者一般情况、WBC、CRP进行Spearman秩相关分析,得出WBC、CRP与损伤相关,差异有统计学意义(P〈0.05);将WBC、CRP与食管、胃分级之间进行K-Wallis秩和检验比较,发现WBC、CRP值越高,消化道损伤程度越严重。结论:WBC、CRP为消化道损伤严重程度的相关因素,同时WBC、CRP值越高,消化道损伤程度越严重。

  • 标签: 腐蚀剂 上消化道损伤 白细胞 C-反应蛋白
  • 简介:蛋白酶(Calpain)是一类钙离子依赖性的高度保守的蛋白水解酶,被认为与细胞骨架蛋白重整、细胞转化和迁移、加快细胞循环等有关。近年来研究发现Calpain参与的细胞转化和迁移可能与癌症有一定的关系。本文对近年来关于Calpain的表达、作用及调控等方面对前列腺癌细胞作用的研究进展作一综述,并对其在前列腺癌基础研究与靶点治疗中的意义作一展望。

  • 标签: Calpain(钙蛋白酶) 前列腺癌
  • 简介:本研究旨在探讨曲古菌素A(trichostatinA,TSA)高效低毒的抗癌机理.应用细胞培养、MTT法,免疫细胞化学技术和Annexin-V-FITC/PI双标流式细胞术观察TSA对HL-60细胞和正常人外周血单个核细胞(normalhumanperipheralbloodmononuclearcell,NPBMNC)的生长抑制,组蛋白乙酰化水平以及诱导凋亡的影响.结果表明:TSA能够以时间、剂量依赖性方式抑制HL-60细胞增殖,36小时IC50为100ng/ml.TSA能够诱导HL-60细胞凋亡,其作用也呈时间、剂量依赖性.TSA在显著诱导HL-60细胞凋亡的浓度和时间范围内对NPBMNC无明显的诱导凋亡作用.TSA处理4小时后,HL-60细胞和NPBMNC组蛋白乙酰化水平上调显著高于未用TSA各组(P<0.05),但两者之间无显著性差异(P>0.05).结论:TSA对HL-60细胞有明确的抑制增殖能力;TSA有明确的诱导HL-60细胞凋亡的能力,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系HL-60生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一;与NPBMNC相比较,TSA能够选择性诱导HL-60细胞凋亡;TSA选择性抑制HL-60细胞的机理与TSA调控HL-60细胞和NPBMNC组蛋白乙酰化水平的差异无关.

  • 标签: 曲古菌素A 组蛋白乙酰化 细胞凋亡 HL-60细胞
  • 简介:【摘要】目的 分析伴癫痫(epilepsy,EP)发作的髓鞘少突胶质细胞蛋白抗体相关疾病(myelin oligodendrocyte glycoprotein antibody disease, MOGAD)的临床特点。方法  回顾性分析2018年5月-2023年5月本院就诊的25例伴EP发作的MOGAD患者的临床资料,分析其临床特点。结果 25例伴EP发作的MOGAD患者EP类型部分型发作占比最高56.00%、单纯部分性发作最低8.00%;体温升高和/或头痛表现最突出占比68.00%、其次为意识障碍占比32.00%;脑脊液检查白细胞升高率80.00%、蛋白水平升高率12.00%、葡萄糖和氯化物水平降低率4.00%;寡克隆区带阳性率44.00%;血液检查结果:寡克隆区带阳性率4.00%、MOG 抗体阳性率100.00%、NMDAR 抗体率8.00%、结缔组织相关抗体率12.00%、抗甲状腺相关抗体率8.00%;MRI异常率:头部84.00%、脊髓40.00%、视神经36.00%;行大剂量激素静脉冲击治疗68.00%;复发率4.00%。结论   伴EP发作的MOGAD患者男性占比较高,常见的非特异性临床表现为体温升高和/或头痛、脑脊液白细胞增高、意识障碍等,患病初期通过激素或联合免疫球蛋白治疗,能取得良好的预后。

  • 标签: 癫痫 髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病 临床特点
  • 简介:目的探讨sonichedgehog(SHH)信号通路是否在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中被活化,研究SHH信号通路是否参与PDGF诱导的VSMC增殖。方法体外培养人VSMC,施加PDGF刺激后应用激光共聚焦显微成像、Western-Blot及qRT-PCR检测SHH信号通路分子mRNA的表达变化;分别应用慢病毒介导的RNAi及SHH信号通路特异抑制剂cyclopamine阻断SHH通路后,用细胞计数、BrdU掺入法及Ki67染色评价细胞增殖情况。结果激光共聚焦显微成像及Western-blot及qRT-PCR均显示PDGF能够活化SHH信号通路蛋白shh、patched1及Gli2的表达;阻断SHH信号通路后,PDGF诱导VSMC增殖的作用明显减弱。结论SHH信号通路在PDGF诱导的VSMC增殖中有重要作用。

  • 标签: SHH 血小板源性生长因子 血管平滑肌细胞 增殖
  • 简介:目的研究老瓜头生物总碱对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制与促进凋亡的作用。方法采用小鼠黑色素瘤B16细胞,MTT法检测老瓜头生物总碱对B16细胞增殖的抑制作用,通过琼脂糖凝胶电泳、Hoechst33258染色、Caspase-3和Caspase-8活性检测,观察老瓜头生物总碱诱导细胞凋亡的作用和机制。结果MTT检测显示老瓜头生物总碱抑制B16细胞增殖,呈现时间依赖性和浓度依赖性,作用24、48、72h的IC50分别为0.97、0.98、0.16mg·L^-1;选用浓度0.25、0.5、1mg·L^-1老瓜头生物总碱孵育B16细胞24h,经DNALadder检测出现阶梯状DNALadder,片段100~200bp,呈现细胞凋亡裂解;0.5、1mg·L^-1老瓜头生物总碱孵育B16细胞24h后Rhodamine123染色与空白对照组相比显示荧光降低,且随浓度增加,荧光降低增加;凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8活性增强,0.5、1mg·L^-1老瓜头生物总碱药物组与对照组相比有显著性差异(P〈0.05,P〈0.01)。结论老瓜头生物总碱可抑制B16细胞增殖,诱导B16细胞凋亡,可通过增强凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8活性诱导凋亡。

  • 标签: 老瓜头生物总碱 凋亡 黑色素瘤B16细胞 小鼠
  • 简介:目的探讨白介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)在骨关节炎(OA)患者滑膜组织中的表达及临床意义。方法2012年1月至2014年6月选取中山大学附属第一医院下肢骨科住院患者30例,术前诊断明确,排除免疫系统紊乱、免疫功能缺陷及结缔组织病。30例患者分为OA组及对照组,其中OA患者行人工膝关节置换术15例,胫骨平台粉碎性骨折或(和)股骨髁粉碎性骨折行切开复位内固定手术共15例为非OA患者作为对照组,术中取膝关节滑膜组织进行免疫组化检测IRAK-4的表达,以及收集关节液检测白细胞介素-1(IL-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎性因子水平。两组间比较采用两独立样本的t检验,两组间阳性表达百分比采用Mann-WhitneyU检验,P〈0.05为差异有统计学意义。结果免疫组化结果显示OA患者IRAK-4表达明显高于对照组。在OA患者中滑膜组织IRAK-4蛋白呈100%强阳性表达,对照组中15例只有3例呈弱阳性表达,阳性表达率为20%,两组间比较具有统计学差异(P〈0.01)。同时酶联免疫吸附检测(ELISA)显示OA患者关节液中IL-1与TNF-α的表达与对照组比较存在统计学差异(均P〈0.001)。结论OA患者滑膜组织高表达IRAK-4,作为Toll样受体/白细胞介素-1受体(TLR/IL-1R)信号途径的一个重要胞内激酶连接体,IRAK-4可能参与调控一系列炎性因子释放。

  • 标签: 骨关节炎 滑膜 白细胞介素1 肿瘤坏死因子Α
  • 简介:摘要目的探讨愈痫灵颗粒对致痫大鼠海马神经元细胞凋亡及其调控蛋白(Bcl-2、Bax、C-fos)表达的影响。方法建立癫痫大鼠模型,以丙戊酸钠为西药对照,愈痫灵颗粒为中药对照,免疫组化法检测海马神经元细胞Bcl-2、Bax、C-fos的表达,HE染色法检测凋亡细胞。结果造模后致痫大鼠海马神经元细胞凋亡增加,Bcl-2、Bax、C-fos基因蛋白在大鼠海马区的表达增加,差异有统计学意义(P<0.01);药物干预后,与模型组比较,愈痫灵颗粒组神经元细胞凋亡减轻,Bcl-2表达增加,Bax、C-fos的表达降低。结论愈痫灵颗粒对癫痫大鼠的治疗作用与其减轻神经元细胞凋亡、调节海马神经元细胞Bcl-2、Bax、C-fos的表达有关。

  • 标签: 愈痫灵颗粒 癫痫 海马神经元细胞 细胞凋亡 细胞凋亡调控蛋白
  • 简介:摘要目的探讨针对手足口病患儿测定外周血白细胞(WBC)、空腹血糖和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的变化及临床意义。方法2015年1月至2016年12月我院儿科手足口病患儿,根据病情严重程度分为普通病例50例和重症病例46例,并选取同期48例正常体检儿童为对照组,手足口病患儿采取对症治疗,测定两组患儿治疗前后及对照组的WBC、空腹血糖和hs-CRP水平。结果普通组和对照组治疗前外周血WBC计数对比无差异,重症组外周血WBC计数较对照组和普通组水平高(P<0.05),普通组和对照组在治疗后空腹血糖、hs-CRP计数较治疗前下降(P<0.05),三组在治疗前空腹血糖和hs-CRP计数两两对比具有统计学意义(P<0.05)。结论手足口病患儿外周血WBC、空腹血糖和hs-CRP水平较正常儿童水平较高,治疗后出现下降,三项指标的联合检测可有效的诊断病情的严重程度。

  • 标签: 手足口病 外周血白细胞计数 空腹血糖 超敏C反应蛋白
  • 简介:自1993年中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)被发现以来,这种小分子分泌性蛋白一直被用于进行各种生物标记物的研究,如肿瘤和炎症等,然而近年来最引起重症医学工作者注目的是其在非选择性重症患者中表现出了很好的急性肾损伤(acutekidneyinjury,AKI)早期诊断和预测能力,而且NGAL在重症患者病情和预后的评估方面也得到一些临床研究结果的支持.

  • 标签: 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 脓毒症 急性肾损伤