简介:脯氨酸内肽酶(Prolylendopeptidase,PEP)是一类能够特异性水解低分子质量多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的内切酶,与胶原蛋白的后期降解有密切关系。以淡水鱼草鱼为原料。采用硫酸铵分级沉淀。DEAE—Sephacel阴离子交换,Phenyl—Sepharose疏水层析和羟基磷灰石层析等方法从草鱼肌肉中分离纯化得到一种脯氨酸内肽酶。SDS—PAGE结果显示,草鱼PEP的分子质量为75ku。酶学性质分析表明,其最适pH为6.0,在pH5.5~7.5间有较好的稳定性。酶的最适温度为30℃,其热稳定性较差。PEP能够特异性分解肽链羧基端为脯氨酸残基的荧光底物,PEP的特异性抑制剂SUAM以及丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟对其有强烈的抑制作用。酶动力学研究表明,草鱼PEP的k为19.23μmol/L,kca为2.5s-1。肽指纹质谱分析结果表明,草鱼PEP与青锵鱼、罗非鱼、斑马鱼PEP的序列同源性分别为98-3%.96.1%和94.4%。
简介:目的:建立HPCE法测定ACE抑制活性的方法,并将其用于紫菜蛋白肽的ACE抑制反应动力学。方法:进样(压力3.5kPa、时间5s),温度30℃,分离电压20kV,检测波长228nm,硼酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH8.3,0.3mol/LNaCl)。结果:基于卡托普利的标准曲线方程为Y=4327C+23.7764(0.097~0.485mmol/L,r=0.9991),线性关系良好。马尿酸回收率在96%~104%之间,标准相对偏差为3.65%。紫菜蛋白肽对ACE的抑制反应为非竞争性抑制反应。结论:该方法准确可靠,可用于紫菜蛋白肽ACE抑制活性研究。
简介:目的:制备降解(低分子质量)壳聚糖并考察对肉品的保鲜效果。方法:采用H2O2均相氧化降解壳聚糖,以乌氏黏度法测其黏均分子质量;用牛津杯法测定降解壳聚糖对大肠杆菌、金葡菌、霉菌的抑菌圈直径;喷洒降解壳聚糖溶液于肉品表面,用表面涂抹法测定肉品在25℃放置过程中菌落总数的变化。结果:影响降解壳聚糖分子质量大小的因素顺序为:时间〉温度〉H2O2浓度〉HAc浓度;在反应时间6h、温度75℃、H2O2体积分数6%和HAc体积分数4%时,可得黏均相对分子质量为2300的可溶性壳聚糖;降解壳聚糖对大肠杆菌、金葡菌的抑菌率高于未降解壳聚糖,而对霉菌的抑菌性变化不大;经质量分数6%、黏均分子质量2300壳聚糖溶液喷洒肉品表面后,鲜猪肉4d、熟猪肉6d可保持良好色泽、弹性、气味,且菌落总数符合GB2726-2005要求。结论:低分子质量壳聚糖可作为肉品防腐保鲜剂。