简介：摘要目的观察黄体酮对切口痛大鼠机械缩足反射阈值（paw mechanical withdraw threshold, PMWT）、脊髓神经激肽-1受体（neurokinin-1 receptor, NK-1R）、血浆P物质表达的影响，探讨黄体酮对疼痛影响的可能机制。方法采用随机数字表法将24只健康成年雄性Wistar大鼠分为对照组（C组）、黄体酮组（P组，术前3 h肌内注射1.5 mg/100 g）、米非司酮组（M组，术前3 h灌胃1.5 mg/100 g），每组8只。按照Brennan法制备足底切口痛模型，测定大鼠给药前（T0）、手术前（T1）、手术后1 h (T2）、手术后3 h (T3）4个时间点的术侧足PMWT。在T3时间点采用免疫印迹法测定脊髓NK-1R水平，用ELISA法测定血浆P物质水平。结果与C组比较，P组和M组T2、T3时PMWT升高（P<0.05），且P组PMWT高于M组（P<0.05）。与C组比较，P组和M组T3时脊髓NK-1R及血浆P物质水平减低（P<0.05），且P组脊髓NK-1R及血浆P物质水平低于M组（P<0.05）。结论黄体酮能够抑制切口疼痛，可能与黄体酮受体结合状态抑制脊髓NK-1R的表达及P物质生成和（或）释放有关。

简介：摘要目的探讨miRNA-522-3p（miR-522-3p）在胃癌组织和细胞中的表达及其对RSU1表达的调控，以及体外对胃癌细胞生物学功能的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测山西白求恩医院2019年5月至2020年6月确诊的50例胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织中miR-522-3p的相对表达水平。将胃癌MGC-803细胞和BGC-823细胞分为miR-522-3p抑制剂组（转染miR-522-3p抑制剂）和空载体组（转染空载体），采用CCK-8法检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞的划痕愈合能力，流式细胞术检测细胞凋亡能力；通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-522-3p和RSU1的靶向相关性，蛋白质印迹法检测RSU1蛋白的变化。结果qRT-PCR结果显示，与癌旁组织比较，胃癌组织中miR-522-3p的相对表达水平上调，差异具有统计学意义（0.84±0.31比0.48±0.22，t＝2.93，P<0.05）。不同肿瘤长径和病理分级的胃癌组织中miR-522-3p的相对表达水平差异有统计学意义（均P<0.05）。体外实验表明，48、72 h时miR-522-3p抑制剂组MGC-803细胞、BGC-823细胞的细胞增殖率均下降（均P<0.05），MGC-803、BGC-823细胞转染miR-522-3p抑制剂后，能抑制MGC-803、BGC-823细胞的划痕愈合能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-522-3p能靶向结合RSU1的3'UTR，并影响其荧光活性；蛋白质印迹法结果显示，miR-522-3p抑制剂可促进RSU1蛋白的表达。结论miR-522-3p可能通过调控RSU1表达参与胃癌的进展，其可能是潜在的治疗靶标。

简介：摘要回顾性分析我院收治的120例行输尿管软镜(FURS)治疗肾结石患者的临床资料，采用虚拟现实技术测量影像学相关数据。单因素分析结果显示肾盂肾盏高度(H)、肾盏漏斗部长度(L)、肾盂容积(P)、结石密度(E)和结石表面积(S)与结石清除率密切相关。根据上述因素构建H.L.P.E.S.评分系统，预测FURS术后结石清除率。H.L.P.E.S.、S.O.L.V.E.评分系统的受试者工作特征曲线下面积分别为0.921、0.754, H．L.P.E.S.评分系统具有更高的预测价值。

简介：摘要目的探究微小RNA(miR)-373-3p对胶质母细胞瘤细胞自噬和舒尼替尼敏感性的影响及其机制。方法体外常规培养U251细胞，采用50 μmol/L舒尼替尼作用72 h构建耐舒尼替尼U251细胞株。(1)采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测U251、耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达。将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、无义序列组、miR-373-3p模拟物组，后2组细胞分别转染miR-373-3p无义序列、miR-373-3p模拟物，采用RT-qPCR检测细胞miR-373-3p的表达。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组，转染后采用CCK-8法检测细胞活性，TUNEL染色检测细胞凋亡率，免疫荧光染色检测细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达，Western blotting检测细胞凋亡、自噬相关蛋白的表达。(2)构建pGL3-自噬相关基因7(ATG7)野生型(WT)和pGL3-ATG7突变型(MUT)质粒，双荧光素酶报告分析系统检测miR-373-3p模拟物组、无义序列组细胞荧光素酶活性。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组，转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。(3)将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、ATG7阴性对照组、ATG7过表达组，转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。将U251细胞、耐舒尼替尼U251细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组，转染后采用CCK-8法检测细胞活性，TUNEL染色检测细胞凋亡率，Western blotting检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果(1)与U251细胞比较，耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达下调，差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组、无义序列组比较，miR-373-3p模拟物组细胞miR-373-3p的表达升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与U251组比较，耐舒尼替尼U251组细胞活性增加，凋亡率下降，B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达升高，Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)/Caspase 3值降低，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值增加，p62蛋白的表达减少。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率提高，Bcl-2蛋白的表达降低，Bax蛋白的表达和活化Caspase 3/Caspase 3值升高，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，p62蛋白的表达增加，差异均有统计学意义(P<0.05)；与U251组比较，耐舒尼替尼U251组LC3荧光颗粒增多且荧光亮度升高；与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞荧光颗粒减少且亮度减弱。(2)对于pGL3-ATG7 WT质粒，miR-373-3p模拟物组荧光素酶活性低于无义序列组，差异有统计学意义(P<0.05)。与U251组比较，耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达增加；与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与空白对照组、ATG7阴性对照组比较，ATG7过表达组细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达均增加，差异均有统计学意义(P<0.05)。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率较高，Bcl-2蛋白的表达降低，活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达升高，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，p62蛋白的表达升高；与miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组细胞活性增加，凋亡率降低，Bcl-2蛋白的表达升高，活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达降低，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值升高，p62蛋白的表达减少，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-373-3p通过调控自噬而增强胶质母细胞瘤细胞舒尼替尼敏感性，其机制可能与靶向ATG7有关。

简介：摘要目的探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血（aSAH）患者高压氧治疗后血清miR-193b-3p水平的变化及其意义。方法选择2019年1月至2020年9月商丘市第一人民医院急诊科收治的176例aSAH患者作为研究对象，根据治疗90 d后患者的改良Rankin量表评分（mRS）将其分为预后良好组（n=128）和预后不良组（n=48）。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-193b-3p相对表达水平；用Logistic回归分析aSAH患者预后的风险因素；用受试者工作特征（ROC）曲线评价miR-193b-3p诊断aSAH患者预后的价值；用限制性立方样条拟合Logistic回归分析miR-193b-3p与aSAH患者预后的量效关系。结果预后良好组患者治疗前后血清miR-193b-3p的相对表达水平均高于同期预后不良组（P<0.05），治疗后2组患者血清miR-193b-3p的相对表达水平均明显降低（P<0.05）。治疗后miR-193b-3p诊断aSAH预后的ROC曲线下面积（AUC）、灵敏度和特异度分别为0.818、68.75%和85.94%。Hunt-Hess Ⅲ~Ⅳ级、脑血管痉挛、高格拉斯哥昏迷评分（GCS）和高C反应蛋白（CRP）水平是aSAH预后的独立危险因素（P<0.05），治疗后miR-193b-3p相对表达水平高是aSAH预后的独立保护因素（P<0.05）。治疗后miR-193b-3p与aSAH预后呈非线性关系（P<0.05）。结论aSAH患者高压氧治疗后血清miR-193b-3p相对表达水平明显降低，与aSAH预后不良有关。

简介：AbstractBackground:Sepsis, a serious condition with high mortality, usually causes sepsis associated encephalopathy (SAE) that involves neuronal cell death. However, the cell death programs involved and their underlying mechanisms are not clear. This study aimed to explore the regulatory mechanisms of different cell death programs in SAE.Methods:A neonatal rat model of SAE was established by cecal ligation and perforation. Survival rate and vital signs (mean arterial pressure and heart rate) were monitored, nerve reflexes were evaluated, and cortical pathological changes were observed by hematoxylin and eosin staining. The expression of pyroptosis, apoptosis, and necroptosis (PANoptosis)-related proteins, mitogen-activated protein kinase (MAPK), and its upstream regulator toll-like receptor 9 (TLR9) were detected. The expression of TLR9 in neurons was observed by immunofluorescence staining. The ultrastructure of neurons was observed by transmission electron microscope.Results:First, PANoptosis was found in cortical nerve cells of the SAE rats. Meanwhile, the subunits of MAPKs, p38 MAPK, Jun N-terminal kinase, and extracellular signal-regulated kinase (ERK) were activated. After pharmacologically inhibiting each of the subunits, only p38 MAPK was found to be associated with PANoptosis. Furthermore, blocking the p38 MAPK signaling pathway activated necroptosis but inhibited apoptosis and pyroptosis. When necroptosis was pharmacologically inhibited, apoptosis and pyroptosis were reactivated. Finally, we found that the expression of TLR9, a regulator of MAPKs, was significantly increased in this model. After down-regulation of TLR9, p38 MAPK, and ERK signaling pathways were inhibited, which led to the inhibition of PANoptosis. Further analysis found that down-regulation of TLR9 improved the survival rate and reduced the pathological changes in SAE rats.Conclusions:Our study showed that the programs comprising PANoptosis are activated simultaneously in SAE rats. TLR9 activated PANoptosis through the p38 MAPK signaling pathway. TLR9 may work as a potential target for SAE treatment.

简介：摘要目的探究miR-375-3p调控结直肠癌细胞放射敏感性的作用和机制。方法在结直肠癌细胞HCT116及HT29中过表达miR-375-3p，利用CCK-8法检测细胞增殖能力，利用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，利用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡，利用流式细胞术检测细胞周期分布。过表达miR-375-3p后，检测γ-H2AX foci形成点数量、同源重组(HR)及非同源性末端连接(NHEJ)修复效率，分析miR-375-3p表达对DNA双链断裂(DSBs)以及其修复效率的影响；利用生物信息学预测miR-375-3p在HR修复通路中的下游靶基因，利用双荧光素酶报告基因法进一步验证miR-375-3p表达对靶基因重组蛋白A (RAD51)表达调控作用。最后，利用荧光定量PCR技术检测经60Co γ射线2、6 Gy照射后HCT116细胞miR-375-3p的表达量；抑制miR-375-3p表达，经0、1、2、4、6 Gy不同剂量照射后，分析miR-375-3p表达变化对结直肠癌细胞HCT116放射敏感性的影响。结果过表达miR-375-3p显著抑制了结直肠癌细胞HCT116及HT29的增殖及克隆形成能力，诱发其细胞凋亡、G1期周期阻滞和DSBs损伤，下调了Rad51表达，显著降低了HR修复效率[miR-375-3p(3.55 ± 0.30)%，miR-nc(1.97 ± 0.15)%；t＝10.055，P<0.05]；双荧光素酶报告基因实验显示miR-375-3p能够靶向Rad51 3′UTR区域结合(t＝5.013，P<0.05)；电离辐射能诱导miR-375-3p表达，抑制其表达显著降低了结直肠癌细胞放射敏感性(t＝6.460、5.619、10.150，P<0.05)。结论miR-375-3p能够靶向抑制Rad51表达，下调DSBs的HR修复效率，增强结直肠癌细胞的放射敏感性。

简介：摘要美托洛尔和普罗帕酮是心血管疾病常用药物。2药均通过肝脏细胞色素P450（CYP）2D6代谢，但普罗帕酮不仅是CYP2D6底物，也是CYP2D6抑制剂，与美托洛尔联用可能发生相互作用，导致不良反应发生。这种相互作用也取决于CYP2D6基因型。对于CYP2D6基因表型为慢代谢型（PM）和中间代谢型（IM）的患者，美托洛尔和普罗帕酮联用时可因普罗帕酮对CYP2D6的抑制而导致美托洛尔血药浓度升高。因此，应尽量避免美托洛尔与普罗帕酮联用。对于需要2药联合治疗的患者，用药期间应注意监测患者血压、心率、心电图变化，有条件者应检测CYP2D6基因型并根据检测结果调整药物剂量。

简介：摘要目的探讨神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule，NCAM)衍生肽P2对缺血性脑卒中大鼠神经功能损伤的修复作用及机制。方法提取并培养原代皮质神经元，氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)造模后采用CCK-8法观察不同浓度P2对OGD条件下皮质神经元活性的影响，Western blot检测凋亡相关蛋白及细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal regulated kinase 1/2，Erk1/2)的表达。选取清洁级雄性SD大鼠进行动物实验，采用大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion，MCAO)建立大鼠脑卒中缺血/再灌注损伤动物模型，造模成功的大鼠按照随机数字表法分为假手术组、MCAO组和MCAO+P2组，每组12只。术后MCAO+P2组大鼠每日一次皮下注射1 mg/kg P2，持续至术后14 d，其余两组大鼠均皮下注射等体积0.9%氯化钠溶液。平衡木实验观察大鼠运动功能损伤及恢复情况。免疫荧光染色检测大鼠脑梗死灶周边的神经元凋亡比率，Western blot检测大鼠脑梗死灶周边脑组织内Erk1/2蛋白的表达。采用SPSS 22. 0进行统计分析，平衡木实验数据采用重复测量方差分析，其他实验数据以单因素方差分析进行检验。结果与OGD组相比，0.5，1.0和2.0 μmol/L的P2均可以提高OGD条件下神经元细胞活性，其中1 μmol/L的P2效果最好(2.436±0.284，1.551±0.410，P<0.05)。Western blot结果显示，加入1 μmol/L P2后凋亡相关蛋白bax [(76.120±3.232)%，(88.965±5.208)%，P<0.05]、cleaved caspase-3[(76.736±4.306)%，(97.781±8.111)%，P<0.05]和cleaved caspase-9[(88.833±6.581)%，(104.962±4.788)%，P<0.05]表达均低于OGD组，bcl-2[(56.146±3.882)%，(43.170±6.945)%，P<0.05]以及磷酸化Erk1/2蛋白[(73.583±8.557)%，(55.219±4.615)%，P<0.05]表达均高于OGD组。与MCAO组相比，P2干预后第14天时大鼠瘫痪侧后肢的滑脱率低[(23.438±11.540)%，(41.733±13.631)%，P<0.05]，病灶周边神经元凋亡比率低[(13.144±6.485)%，(26. 699±6. 402)%，P<0.05]，大鼠梗死灶周边脑组织内磷酸化Erk1/2蛋白表达高[(74.062±7.458)%，(53. 327±7.093)%，P<0.05]。结论低浓度NCAM衍生肽P2可对OGD条件下的神经元以及缺血性脑卒中大鼠发挥神经保护作用，其作用机制可能与Erk信号通路的活化有关。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-214-3p在不同类型葡萄膜黑色素瘤(UM)患者血浆外泌体中的差异性表达，评估其是否可作为UM诊疗的新型分子生物标志物。方法收集2015年12月至2019年10月于北京同仁医院行眼球摘除术并确诊为UM的患者25例，其中原位梭形细胞型UM组和原位类上皮细胞型UM组各10例，转移型UM组5例(包括1例梭形细胞型UM患者和4例类上皮细胞型UM患者)；同期收集10例健康对照者作为健康对照组，抽取所有受试者血液样本，提取血浆外泌体，透射电子显微镜下观察外泌体形态，分析外泌体粒径，Western blot法鉴定外泌体标记蛋白，采用实时荧光定量PCR法测定各组患者血浆外泌体miR-214-3p表达水平。采用差异性检验比较UM患者与健康对照者和不同类型UM患者间的血浆外泌体miR-214-3p的差异表达；通过受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆外泌体miR-214-3p对UM的诊断及分型效能。结果透射电子显微镜下可见，所提取外泌体呈一侧凹陷的半球形结构，直径约100 nm。囊泡粒径大小为(82.0±2.7)nm。Western blot结果显示外泌体特异性标记蛋白TSG101条带均为阳性，阴性标记蛋白Calnexin均呈阴性。健康对照组、原位UM组和转移型UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量分别为0.86(0.57，1.49)、0.24(0.10，0.67)和0.43(0.23，0.56)，原位UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量较健康对照组明显降低，差异有统计学意义(Z＝2.62，P<0.01)；ROC曲线对血浆外泌体中miR-214-3p的诊断效能分析显示，血浆外泌体miR-214-3p的AUC为0.795。转移型UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量较健康对照组明显降低，差异有统计学意义(Z＝2.08，P<0.05)；原位梭形细胞型UM组和原位类上皮细胞型UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量分别为0.11(0.07，0.64)和0.46(0.14，0.91)，2个组间以及转移型UM组与原位类上皮型UM组间患者血浆外泌体miR-214-3p相对表达量比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论血浆外泌体miR-214-3p在原位UM患者及转移型UM患者中均显著下降，循环miR-214-3p具有作为UM诊断生物标志物的潜力，但血浆外泌体miR-214-3p缺乏对UM分型的评估能力。

简介：摘要脑组织铁沉积性神经变性病（NBIA）是一组罕见的神经系统遗传性疾病，以脑组织不同程度的铁代谢异常和过量铁沉积为特征，其中最常见症状为锥体外系症状，亦可合并不同程度的锥体束、小脑、周围神经系统、自主神经系统、精神认知、视觉功能障碍。文中报道1例2020年12月于西京医院神经内科就诊的NBIA患者，分析其临床特征，并通过全外显子测序技术进行基因突变筛查，根据美国医学遗传学与基因组学学会（ACMG）指南做致病性分析。患者为13岁男性，4岁起病，呈慢性病程，进行性加重，首发症状为痉挛步态，随病情进展出现智能减退、构音障碍、饮水呛咳和视力下降。头颅磁共振成像检查可见视神经萎缩，苍白球及黑质T2WI、液体衰减反转恢复序列、弥散加权成像及磁敏感成像呈对称性低信号，无泛酸激酶相关神经变性中普遍存在的“虎眼征”。患者经全外显子基因检测可见C19orf12基因第2号外显子c.172G>A纯合突变，导致第58位氨基酸由甘氨酸变为色氨酸（p.Gly58Ser），其父亲和母亲为姨表兄妹（近亲婚育），均携带该位点杂合变异。该突变位点未见文献报道，为新突变，根据ACMG指南考虑为可能致病变异。该位点保守性预测提示高度保守。该患者最终被诊断线粒体膜蛋白相关性神经变性病（MPAN）即NBIA4型，丰富了MPAN的突变数据库，为该病的进一步研究提供了依据。

简介：摘要目的评价miR-205-3p在氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)星形胶质细胞胀亡中的作用及其与水通道蛋白4(AQP4)的关系。方法体外培养原代星形胶质细胞至对数生长期，采用随机数字表法分为5组(n＝16)：对照组(C组)、OGD/R组(O组)、OGD/R+miR-205-3p模拟物组(M组)、OGD/R+miR-205-3p抑制剂组(I组)和OGD/R+阴性对照组(NC组)。C组在正常条件下培养，O组于37 ℃厌氧孵育箱(含94%N2、1%O2和5%CO2)氧糖剥夺4 h，于复氧复糖24 h；M组、I组和NC组分别转染miR-205-3p模拟物、抑制剂和阴性对照后，氧糖剥夺4 h，复氧复糖24 h。采用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术分析细胞损伤及胀亡情况，qRT-PCR法检测AQP4 mRNA表达，Western blot法检测AQP4及porimin的表达。结果与C组相比，O组miR-205-3p表达下调，细胞活力降低，细胞损伤率及胀亡率升高，AQP4及其mRNA和porimin表达上调(P<0.05)；与O组相比，M组miR-205-3p表达上调，细胞活力升高，细胞损伤率及胀亡率降低，AQP4及其mRNA和porimin表达下调，I组miR-205-3p表达下调，细胞活力降低，I组细胞损伤率及胀亡率升高，AQP4及其mRNA和porimin表达上调(P<0.05)，NC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-205-3p参与了OGD/R星形胶质细胞胀亡的过程，与调控AQP4表达有关。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460，以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达，构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞，分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中miR-17-5p的表达倍数均高于人正常结肠上皮细胞NCM460(3.22±0.72、1.99±0.36、2.26±0.51、1.77±0.60比1.07±0.05，F＝5.153，P<0.05)，差异有统计学意义。miR-17-5p inhibitor组miR-17-5p表达水平低于NC组(0.55±0.07比1.03±0.06，t＝9.714，P<0.05)，差异有统计学意义。CCK-8实验证实miR-17-5p inhibitor组细胞增殖能力低于NC组(24、48、72、96 h吸光度值分别为(0.21±0.00比0.33±0.03，0.33±0.01比0.54±0.01，0.54±0.02比0.79±0.00，0.83±0.05比1.10±0.08，t＝5.041、16.840、17.530、3.977，P<0.05)，差异有统计学意义。平板克隆实验提示miR-17-5p inhibitor组细胞克隆形成能力低于NC组[克隆形成数目(327.33±9.53)个比(504.67±10.96)个，t＝27.290，P<0.05]，差异有统计学意义。划痕及Transwell实验结果显示，miR-17-5p inhibitor组细胞迁移及侵袭能力显著低于NC组[划痕实验细胞迁移率(16.83±1.21)%比(35.70±1.04)%，Transwell迁移实验细胞迁移数目(46.00±3.27)个比(146.33±4.92)个，Transwell侵袭实验细胞侵袭数目(131.00±5.35)个比(243.00±5.10)个，t＝16.700、24.020、21.420，P<0.05]，差异有统计学意义。生物信息学预测并筛选出miR-17-5p靶基因TGFBR2，qRT-PCR法检测提示miR-17-5p inhibitor组TGFBR2 mRNA表达水平高于NC组(3.22±0.81比0.99±0.07，t＝3.888，P<0.05)，差异有统计学意义；Western blot结果表明miR-17-5p inhibitor组TGFBR2蛋白表达水平高于NC组。结论miR-17-5p在结直肠癌中表达升高，并且可以通过调控TGFBR2表达水平促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

简介：摘要目的探讨circ-0026462靶向miR-361-3p调控前列腺癌细胞对恩杂鲁胺耐药性的机制研究。方法体外培养人前列腺癌细胞DU-145，建立前列腺癌恩杂鲁胺耐药性细胞DU-145/Enz，使用恩杂鲁胺处理DU-145、DU-145/Enz细胞，将其分为si-NC组、si-circ-0026462组、si-circ-0026462+anti-miR-NC组及si-circ-0026462+anti-miR-361-3p组。采用MTT法检测细胞的增殖能力；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用qRT-PCR检测circ-0026462、miR-361-3p的表达量；采用双荧光素酶报告检测circ-0026462与miR-361-3p的靶向关系；采用Western blot法检测雄激素受体变异体(AR-V7)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性抑制剂(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白的表达量。结果与DU-145/Enz细胞比较，DU-145细胞的OD值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.001)，细胞凋亡率及P21、Bax蛋白水平升高(均P<0.001)；与DU-145细胞比较，DU-145/Enz细胞中circ-0026462的表达水平升高(P<0.001)，miR-361-3p的表达水平降低(P<0.001)；转染si-circ-0026462可明显降低OD值、AR-V7、Cyclin D1及Bcl-2的表达水平(均P<0.001)，提高细胞凋亡率及P21、Bax的表达水平(P<0.001)；双荧光素酶报告实验证实circ-0026462可靶向结合miR-361-3p；抑制miR-361-3p表达可明显逆转沉默circ-0026462对DU-145/Enz细胞增殖、凋亡及耐药性的作用。结论沉默circ-0026462可通过上调miR-361-3p的表达而抑制细胞增殖及促进细胞凋亡，从而降低前列腺癌细胞对恩杂鲁胺的耐药性。

简介：摘要目的研究胃癌组织人表皮生长因子受体2(HER2)、肿瘤抑制蛋白质P53的表达及其与微卫星不稳定性(MSI)的关系。方法选取湖南师范大学附属岳阳医院2018年1月至2020年10月确诊为胃癌的103例患者作为研究对象，应用免疫组织化学(IHC)法检测患者胃癌及癌旁正常组织HER2、P53，错配修复蛋白表达情况，应用多重荧光PCR(Idylla)检测7个位点的MSI状态。结果本研究中，103例胃癌患者中，IHC法显示微卫星稳定(MSS)患者有77例(74.8%)，MSI患者有26例(25.2%)，PCR法显示MSS患者有77例，MSI患者有26例。MSI HER2低表达率高于HER2高表达率，MSI HER2低表达率MSS HER2低表达率(P<0.05)。MSI P53低表达率高于P53高表达率，MSI P53低表达率低于MSS低P53表达率(P<0.05)。结论胃癌发生过程中可能存在MSI状态；胃癌的MSI状态可能伴随HER2、P53表达降低，胃癌组织中HER2及P53的表达与MSI状态存在互斥的关系，提示MSI的致癌机制可能与HER2及P53具有较大的差异性。MSI型检测对于治疗药物选择及预后判断都有较强的指导意义。

简介：摘要目的探讨Anti-白细胞介素(IL)-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的抑制作用及其机制。方法选取SPF级健康无眼疾6~8周龄雌性C57BL/6N小鼠66只，其中24只采用光感受器维生素A类结合蛋白(IRBP)651-670诱导小鼠EAU模型，分别在免疫前及免疫后第3、12、18天各取6只小鼠，流式细胞术检测各时间点小鼠脾脏、淋巴结和眼球中IL-17A+ γ干扰素(IFN-γ)+ CD4+ T细胞比例。取6只小鼠制作EAU模型，免疫后18 d采用小动物成像仪进行眼底拍照并行光相干断层扫描(OCT)检查。检查完成后处死小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法检测小鼠视网膜炎症反应和组织结构形态学改变；取淋巴结行流式细胞术检测IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例，按照表达数量不同分为IL-17A+ IFN-γ+细胞高表达组和IL-17A+ IFN-γ+细胞低表达组，比较2个组小鼠视网膜损伤情况。取36只小鼠制作EAU模型，采用随机数字表法分成Anti-IL-12/IL-23 p40组和IgG组，每组18只，分别尾静脉注射Anti-IL-12/IL-23 p40和IgG，每3天1次。免疫后第12天和第18天每组各取6只小鼠，分别取淋巴结和眼球组织，采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例。免疫后第24天，每组各取6只小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法观察视网膜损害情况；采用流式细胞仪检测CD4+ T细胞体外诱导分化情况；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞诱导分化后IL-17和IFN-γ表达情况；采用实时荧光定量PCR法检测IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞诱导分化后Th1细胞转录因子T-bet和Th17细胞转录因子维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)相对表达量。结果免疫前和免疫后第3、12、18天，淋巴结、脾脏、眼球中IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例总体比较差异均有统计学意义(H＝9.642、16.531、10.385，均P<0.05)，其中与免疫前相比，EAU小鼠免疫后第12天淋巴结IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例明显升高；免疫后第18天脾脏、眼球中IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例明显升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。IL-17A+ IFN-γ+细胞高表达组小鼠视网膜严重水肿、视网膜脱离、重度炎性细胞浸润和广泛视网膜褶皱；IL-17A+ IFN-γ+细胞低表达组小鼠视网膜轻度水肿、局灶性炎性细胞浸润、轻度视网膜褶皱。Anti-IL-12/IL-23 p40组免疫后18 d，眼球中CD3和IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例低于IgG组，差异均有统计学意义(t＝15.304、8.080，均P<0.05)；免疫后12 d，Anti-IL-12/IL-23 p40组淋巴结中IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞比例为(0.33±0.18)%，明显低于IgG组的(4.83±0.45)%，差异有统计学意义(t＝15.974，P<0.001)。与IgG组相比，Anti-IL-12/IL-23 p40组Th1、Th17、IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞百分比及IL-17、IFN-γ、T-bet、ROR-γt表达量明显降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Anti-IL-12/IL-23 p40可通过抑制IL-17A+ IFN-γ+ CD4+ T细胞发挥对EAU的治疗作用。

简介：摘要目的探讨微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)对高糖诱导的人晶状体上皮细胞自噬和凋亡的调控作用。方法纳入2019年9月至2020年10月在西安医学院第一附属医院眼科收治的糖尿病性白内障(DC)患者30例为DC组，同期就诊的单纯白内障患者30例为单纯白内障组。2个组均行常规晶状体超声乳化及人工晶状体植入术，术中收集晶状体前囊膜组织。实时荧光定量PCR检测各组晶状体前囊膜组织中miR-23b-3p表达。体外培养人晶状体上皮细胞系HLEB3细胞，将其分为正常对照组、高糖组，分别于正常和高糖培养基中培养。根据生物信息学数据库预测原钙黏附蛋白17(PCDH17)与miR-23b-3p的靶向关系，双荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系；取高糖培养的HLEB3细胞，分为miR-23b-3p拟似物组、阴性对照(NC)拟似物组、NC-siRNA组、PCDH17-siRNA组、miR-23b-3p拟似物+Vector组、miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组，分别转染相应试剂后实时荧光定量PCR法检测miR-23b-3p和PCDH17 mRNA表达；Western blot法检测哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3B)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化(p-)JNK、c-Jun、p-c-Jun、B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2蛋白(Bcl-2)蛋白的表达；流式细胞术检测细胞凋亡率。结果DC组晶状体前囊膜组织中miR-23b-3p相对表达量为0.35±0.15，明显低于单纯白内障组的1.00±0.09，差异有统计学意义(t＝44.627，P<0.01)；正常对照组、高糖组、高糖+NC拟似物组、高糖+miR-23b-3p拟似物组细胞中miR-23b-3p，LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量以及细胞凋亡率总体比较，差异均有统计学意义(F＝21.325、28.318、17.634、15.482、22.325、26.537，均P<0.01)；其中与正常对照组比较，高糖组细胞凋亡率、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bax蛋白表达量显著升高，Bcl-2蛋白表达量下降，与NC拟似物组比较，miR-23b-3p拟似物组细胞凋亡率、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2蛋白表达量显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；生物信息学和双荧光素酶报告基因实验结果显示，PCDH17是miR-23b-3p的靶基因，miR-23b-3p拟似物组中PCDH17 mRNA相对表达量较NC拟似物组显著降低(P<0.05)。与NC-siRNA组相比，PCDH17-siRNA组细胞凋亡率、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1以及Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2蛋白表达量显著升高，差异均有统计学意义(t＝9.116、12.413、5.349、3.273、8.419，均P<0.01)。NC拟似物组、miR-23b-3p拟似物组、miR-23b-3p拟似物+Vector组、miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组细胞中p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量总体比较，差异均有统计学意义(F＝24.724、19.319、23.418、17.562、20.263、15.249，均P<0.05)；其中与miR-23b-3p拟似物+Vector组比较，miR-23b-3p拟似物+pcDNA-PCDH17组细胞中p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1以及Bax蛋白表达量显著升高，Bcl-2蛋白表达量降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-23b-3p对高糖环境下HLEB3细胞具有保护作用，其机制主要是通过靶向PCDH17调控JNK信号通路抑制高糖诱导HLEB3细胞的自噬和凋亡。

简介：摘要目的观察尿道上皮细胞中微小RNA(miR)-155-5p通过靶向BTB-CNC异体同源体1(BACH1)促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应，从而参与尿道狭窄的发生和发展。方法生信分析结果BACH1可能是miR-155-5p的直接靶标，然后将miR-155-5p mimics或mimics NC与pmiR-Glo-BACH1-WT或pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染到SV-HUC-1细胞中，转染48 h后，检测荧光素酶活性。将BACH1小干扰RNA(siRNA)转染到SV-HUC-1细胞中，pcDNA3.1-BACH1转染到SV-HUC-1细胞中。转染24 h后，用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血管内皮生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原(collagen IV)的信使核糖核酸(mRNA)水平，同时应用蛋白质印迹法(Western blot)检测VEGF、FN和Collagen Ⅳ的蛋白质水平。两组间分析采用单因素方差分析。结果miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-WT共转染的细胞，与miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染的细胞比较的荧光活性明显下降(FLUCR与RLUCR比率为0.54±0.05比0.95±0.07，F＝73.65，P<0.05)。然而，无论转染pmiR-Glo-BACH1-MUT或pmiR-Glo-BACH1-WT，模拟对照细胞中的荧光强度都无明显变化(比率为1.03±0.04比1.01±0.03 F＝0.548，P>0.05)。IL-1β、IL-6和TNF-α水平在BACH1敲低细胞中增加(分别为615.57±29.44比285.37±23.97，F＝226.939；818.53±41.16比502.63±24.38，F＝130.824；596.63±41.16比366.57±28.84，F＝88.349)，P<0.01，但在BACH1过表达细胞中下降(分别为122.70±15.94比298.87±12.44，F＝227.675；282.50±33.16比511.30±39.76，F＝58.585；129.83±9.31比374.80±25.40，F＝245.926，P<0.01)。此外，VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(分别为1.65±0.08比0.96±0.06，F＝149.555；2.00±0.12比0.97±0.07，F＝160.243；1.65±0.06比0.96±0.02，F＝369.388，P<0.01)和蛋白质水平(分别为1.50±0.10比1.01±0.09，F＝38.382；1.42±0.10比0.99±0.09，F＝31.339；1.30±0.06比0.95±0.05，F＝62.642，P<0.01)也因BACH1敲低而增加，但因SV-HUC-1细胞中BACH1过表达而下降(mRNA水平分别为0.39±0.04比0.97±0.04，F＝340.18；0.52±0.04比0.94±0.03，F＝204.165；0.43±0.01比1.03±0.11，F＝47.206；蛋白水平分别为0.42±0.08比0.97±0.12，F＝45.375；0.52±0.05比0.96±0.12，F＝33.781；0.58±0.05比0.99±0.11，F＝36.900，P<0.01)。结论miR-155-5p通过靶向BACH1促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应。

简介：摘要目的探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophages, TAMs）外泌体中lnc-SLC2A12-10:1对乳腺癌（breast cancer，BC）细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法GEO芯片分析BC中差异表达的lnc-SLC2A12-10:1，qRT-PCR测定lnc-SLC2A12-10:1、miR-296-5p在组织和细胞中的表达。分离TAMs及外泌体。干预外泌体中lnc-SLC2A12-10:1及细胞中的miR-296-5p的表达后借助MTT、Transwell试验检测细胞增殖及侵袭情况。结果相对于癌旁组织，lnc-SLC2A12-10:1在BC组织中显著上调（t=7.09，P<0.001）。与正常乳腺细胞比较，T47D、MDA-MB-468细胞中lnc-SLC2A12-10:1的表达均明显上调（t=9.90，P<0.001）（t=12.18，P<0.001）。lnc-SLC2A12-10:1能作为miR-296-5p的ceRNA。敲减lnc-SLC2A12-10:1能够抑制BC细胞增殖、侵袭，miR-296-5p-inhibitor能促进BC细胞增殖、侵袭，但该作用能被si-lnc-SLC2A12-10:1-Exo部分挽救（均P<0.05）。结论TAMs外泌体中携带的lnc-SLC2A12-10:1能促进BC细胞增殖、侵袭，从而推进BC的进展。

简介：摘要目的基于p38MAPK通路研究血府逐瘀汤含药血清减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的作用。方法制备低剂量、中剂量、高含量血府逐瘀汤含药血清，培养心肌H9c2细胞并分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。除对照组外，其余各组给予缺氧复氧处理，同时用含有10%空白血清或10%含药血清的培养基进行干预，检测培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)及磷酸肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme，CK-MB)的含量、心肌细胞的存活率及凋亡率、细胞中B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2-associated X Protein，Bax)、裂解型caspase-3(cleaved caspase-3)、磷酸化p38MAPK(phosphorylation-p38MAPK，p-p38MAPK)、磷酸化JNK(phosphorylation-JNK，p-JNK)、磷酸化ERK(phosphorylation-ERK，p-ERK)的表达水平。结果与对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组相比，模型组培养基中LDH、CK-MB的含量、凋亡率、细胞中Bax、cleaved caspase-3、p-p38MAPK、p-JNK的表达水平均显著升高，存活率及细胞中Bcl-2、p-ERK的表达水平均显著降低，组间差异均具有统计学意义(F值分别9.39、10.27、13.28、13.09、14.59、10.40、8.17，8.31、11.37、9.38，P值均<0.05)。与模型组比较，低剂量组、中剂量组、高剂量组心肌细胞培养基中LDH、CK-MB的含量明显减少[LDH(U/L)：(185.68±25.73)比(131.22±18.29)，(104.57±13.27)，(78.34±10.93)；CK-MB(U/L)：(24.58±4.48)比(16.79±2.15)，(11.32±1.46)，(9.01±1.25)，P值均<0.05]；心肌细胞的存活率明显增加、凋亡率明显降低[存活率(%)：(42.59±6.29)比(56.51±5.62)，(67.32±6.11)，(80.34±8.27)；凋亡率(%)：(27.68±5.56)比(17.03±2.84)，(12.55±2.02)，(8.68±1.09)，P值均<0.05]；心肌细胞中Bcl-2的表达水平明显增加、Bax及cleaved caspase-3的表达水平明显降低[Bcl-2：(0.24±0.05)比(0.37±0.06)，(0.59±0.09)，(0.77±0.12)；Bax：(0.88±0.15)比(0.64±0.09)，(0.49±0.08)，(0.34±0.06)；Cleaved caspase-3：(1.15±0.32)比(0.90±0.14)，(0.67±0.10)，(0.38±0.06)，P值均<0.05]；心肌细胞中p-p38MAPK的表达水平明显降低[(1.22±0.20)比(0.93±0.13)，(0.78±0.07)，(0.47±0.06)，P值均<0.05]；各组间p-JNK、p-ERK的表达水平无明显变化(P>0.05)。结论血府逐瘀汤含药血清能够减轻心肌细胞缺氧复氧损伤，其作用机制可能与抑制p38MAPK通路激活有关。