简介:目的:探讨TGF-β1对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)活性氧(ROS)和NADPH氧化酶亚基p67phox表达的影响及黄芪注射液(AGI)对其的干预作用。方法:体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞至第二代,静止24h后,随机分为:正常对照组(A组),AGI(2g/ml)组(B组),TGF-β1(10ng/ml)组(C组),TGF-β1+AGI(2g/ml)组(D组,AGI预处理1h)。用荧光染料(DCF)及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)。RT-PCR检测NADPH氧化酶亚基p67phoxmRNA的表达;Western印迹检测p67phox的蛋白表达。结果:TGF-β1可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS产生,刺激20min后,ROS的表达较对照组显著上升(P〈0.05)。AGI可显著抑制TGF-β1刺激后ROS的产生(P〈0.05);大鼠腹膜间皮细胞经TGF-β1刺激后,NADPH氧化酶亚基p67phoxmRNA和蛋白的表达均上升,AGI可抑制TGF-β1诱导的p67phoxmRNA和蛋白的表达上调,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:TGF-β1可诱导大鼠腹膜间皮细胞产生的ROS增加、NADPH氧化酶亚基p67phox表达上调;AGI可抑制NADPH氧化酶的表达和活性ROS的产生,从而为AGI防治腹膜纤维化提供了理论依据。
简介:摘要线粒体细胞色素C氧化酶(mitochondrial cytochrome coxidase,mt-COX,E .C .1.9.3.1)是线粒体呼吸链的复合物Ⅳ(complex IV),是呼吸链末端的限速酶,参与能量供应、细胞凋亡、新陈代谢、活性氧产生等重要的生理过程。由于哺乳动物中95%的氧是通过mt-COX催化处理后被利用的,mt-COX在能量产生与调节中起着重要作用,成为研究热点。研究表明,细胞色素C氧化酶异常涉及多种疾病,尤其mt-COXI是其核心基团,深入研究具有重要意义。文章就线粒体细胞色素C氧化酶I的研究进展及其与相关疾病的关系进行综述。
简介:目的:探讨红杉醇(sequoyit01,Seq)对2型糖尿病大鼠心肌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位p22phox、p47phox及诱导型-氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠100只,分为正常组、模型组、Seq(12.5、25、50mg/kg)及阿卡波糖(Aca,20mg/kg)组,采用小剂量链脲佐菌素(STZ,30mg/kg)联合高糖高脂饲料建立2型糖尿病大鼠模型,HE染色观察心肌病理变化,WesternBlot法检测心肌组织iNOS、p22phox及p47phox蛋白表达,比色法检测心肌组织-氧化氮(NO)、过氧化氢(H202)、超氧化物歧化酶(SOD)及总抗氧化能力(T-AOC)的含量。结果:与对照组相比,模型组大鼠空腹血糖明显升高,心肌肥厚明显加重,心肌组织iNOS、p22phox及p47phox的表达水平及NO、H2O2含量显著升高,而SOD和T-AOC水平明显降低。与模型组相比,Seq各剂量组和Aca组能不同程度地降低大鼠血糖,改善糖尿病大鼠心肌损伤,下调心肌iNOS、p22phox和p47phox的表达,降低心肌NO、H202含量,升高SOD、T-AOC水平。结论:Seq可能通过抑制心肌p22phox、p47phox及iNOS所介导的氧化应激损伤,进而对糖尿病心肌损伤起到保护作用。
简介:摘要前列腺癌是临床常见的男性生殖系统恶性肿瘤,在老年男性中总发病率较高。随着我国人口老龄化的加剧,前列腺癌的发病率不断升高,严重影响我国老年男性人群健康安全和生活质量。目前临床上主要采用手术、放射疗法、内分泌治疗及化学药物治疗手段。虽然早期手术治疗前列腺癌效果较好,但由于前列腺癌发病隐匿,症状不明显,临床上诊断出时往往已至中晚期,已错过最佳手术治疗时机,增加了临床治疗难度。因此通过精准、有效的诊断方法或分子标记对前列腺癌进行早期筛查诊断是手术治疗前列腺癌的关键,也是改善患者预后的重要措施。环氧化酶(COX)又称为前列腺素内过氧化合成酶(PGHS),在花生四烯酸生物合成前列腺素(PG)过程中发挥出重要作用,能将花生四烯酸代谢为各种PG产物,从而参与炎症、免疫应答等多种病理生理过程。COX包括COX-1和COX-2两种同工酶。COX-1参与了机体的炎症反应、胃肠道黏膜保护、肾脏血流调节等生理过程。而COX-2则与人类的癌前病变和恶性肿瘤的发生发展息息相关。越来越多研究结果显示COX-2与恶性肿瘤的发生发展有着密切关系,其中以前列腺癌的研究较多。因此多数学者认为COX-2与前列腺癌的机制研究有关,其有望为临床预防和治疗恶性肿瘤提供新的靶分子,具有重要临床意义。
简介:摘要目的1.检测COX-2在宫颈鳞癌放疗前、后组织中的表达,探讨COX-2与宫颈鳞癌放疗疗效的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测29例放疗前、后宫颈鳞癌组织中COX-2的表达。应用SPSS17.0统计软件,采用Mann-Whiteney检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果COX-2在宫颈鳞癌放疗前、后组织中表达存在统计学差异,这种差异与患者放疗效果相关。结论COX-2在宫颈鳞癌放疗后组织中的表达总体呈下降趋势;且在放疗后完全缓解组(CR)中下降更明显,在部分缓解组(PR)中表达下降无统计学意义,提示COX-2的表达与宫颈鳞癌的放疗疗效相关。
简介:摘要:为探究不同生化褐变缓聚剂对智慧果生物催化剂(多酚催化酶)活性的抑制机理,采用磷酸缓冲液构建智慧果汁模拟系统,选取智慧果中含量较多的酚类物质绿原酸作为试验对象,以磷酸缓冲液为智慧果汁模拟系统,选取乙二酸、乙二胺四乙酸Na2等及植酸为缓聚剂,通过模拟试验探究缓聚剂对绿原酸模拟智慧果汁酵素生化褐变特性的影响,揭示缓聚剂对智慧果汁多酚催化酶的作用机理。结果表明,缓聚剂对多酚催化酶的抑制机理差异较大,其中4-HR和乙二酸对多酚催化酶的抑制作用为竞争性抑制,植酸为混合性抑制。该探究可为利用缓聚剂控制智慧果汁生化褐变提供理论依据。以邻苯二酚为底物,对澳洲青苹中的生物催化剂进行了探讨。
简介:过去常用经典的Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位,现在广泛使用DAB法.我们对这两种方法进行了比较.方法如下:取Wistar大鼠的心、肝、肾组织,用液氮骤冷,恒冷箱切片(厚7μm),进行以下实验:Nadi反应:切片入孵育液(N-苯基-对-苯二胺3mg、1-羟基-2-萘酸3mg溶于二甲基亚砜0.1ml,0.05M的磷酸缓冲液pH7.210ml,混匀后过滤)室温30min.入Lugol碘液2min,入5%硫代硫酸钠4min,入1%醋酸钴60min,蒸馏水洗,甘油明胶封固.DAB法:切片入孵育液(0.05M磷酸缓冲液pH7.210ml,3,3′-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)9mg,细胞色素C15mg,混匀后过滤)室温5min.切片用缓冲液清洗,入蒸馏水,甘油明胶封固.HE染色:切片先用10%Formalin固定10min,再做常规HE染色.对照:Nadi反应和DAB法都用迭氮钠预孵育5min(10ml缓冲液中含6mM迭氮钠),再入含6mM迭氮钠的孵育液中孵育,以下的步骤与上述步骤相同.DAB法还用不含细胞色素C的孵育液做对照.实验结果:HE染色的切片显示组织结构正常.Nadi反应的阳性产物为黑绿色的颗粒,可见弥散的现象.DAB染色的阳性产物为棕色颗粒,很少见有弥散现象.对照切片的结果:用迭氮钠制酶活性的Nadi反应有弱阳性产物,而用迭氮钠的DAB法细胞色素C的切片均呈阴性反应.我们认为显示细胞色素氧化酶的经典方法Nadi反应存在反应产物弥散的现象,用迭氮钠抑制酶的活性后仍有阳性产物出现,因而该法只能表明线粒体的存在,而其定位不够准确.DAB法的方法简便,反应产物不易扩散,可较准确地定位线粒体的存在部位.另外,DAB的沉淀物能与四氧化锇反应形成锇黑,可用于电镜观察.经以上的实验观察和比较,我们认为无论从反应的特异性、定位的准确性,还是电镜应用性等方面看,显示细胞色素氧化酶的DAB法都优于Nadi反应.