简介:目的建立-种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合,以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测。方法膜过滤洗脱环节,采用3种不同的方法进行富集洗脱,通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果;DNA提取环节,采用4种方法进行DNA提取。所得DNA进行实时荧光PCR扩增,定量检测DNA拷贝数,比较各方法的DNA提取效率;并采用最优的方法组合,对模拟水样进行膜过滤和DNA提取,考察全过程的回收率和灵敏度。结果采用加表皮葡萄球菌过滤+漩涡混合器+玻璃棒刮擦洗脱方法(C法),洗脱效率能达到75%-93%;TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度(10^0-10^-5),r2分别为0.998和0.999,然而,TritonX—100法更省时,更简便,经济性更好。采用该最优的方法组合,其全过程的回收率为79.7%~104.0%且灵敏度达到1cfu/ml。结论c法+Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取。
简介:以山楂为原料,通过单因素试验和正交试验设计优化了山楂总黄酮的超声波辅助提取工艺条件,并通过清除羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(02^·),评价山楂总黄酮的体外抗氧化性能。结果表明,乙醇体积分数和超声浸提温度对山楂总黄酮提取率具有显著性影响,山楂总黄酮超声波辅助提取的最佳工艺条件是:乙醇体积分数60%,超声浸提温度50℃,浸提时间60min,料液比1:60(g:mL),提取率为7.61%。山楂总黄酮对·OH和O2^·均具有一定的清除作用,在相同浓度下,山楂总黄酮对·OH的清除效果与维生素C相当,对O2^·的清除效果低于维生素C。
简介:[目的]寻求一种天然澄清剂用于罗汉果甜苷提取液澄清的最佳工艺。[方法]以加入ZTC-Ⅱ型天然澄清剂后罗汉果甜苷提取液的透光率、罗汉果甜苷V的保留率为评价指标,在单因素分析的基础上,应用正交试验设计优化澄清条件,研究澄清剂的总添加量、提取液浓度、A与B组分的比例、加入澄清剂时的温度和搅拌速度的影响。[结果]ZTC-Ⅱ型天然澄清剂对罗汉果甜苷提取液的最佳澄清条件为:罗汉果甜苷提取液稀释为原浓度的0.67倍后,40℃保温,加入B组分(浓度为1%)2.33mL/100mL,A组分(浓度为1%)0.67mL/100mL,保温30min,综合评分达到98.21%。[结论]ZTC-Ⅱ型天然澄清剂可用于罗汉果甜苷提取液的澄清工艺,效果良好。
简介:食品中防腐剂是为了让食品保藏比较长的时间。由于苯甲酸具有毒性小的特点,所以常用来作食品的防腐材料。使用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)实现两种组分的同时测定,样品处理的方法不同,对检测结果会有影响。本文利用蛋白沉淀和水蒸气蒸馏两种方法对酵母提取物进行前处理,采用HPLC法,用ODS色谱柱(HypersilODS2.5μm4.6×150mm),以甲醇/0.02mol/L乙酸铵溶液(5∶95pH5.4)代替乙腈/磷酸盐作为流动相,柱温25℃,检测波长230nm,流速1.0mL/min,恒速洗脱,测定提取物中苯甲酸、山梨酸含量。结果表明,蛋白沉淀法操作简单、快速,适用于苯甲酸、山梨酸含量较高样品的快速测定,但会减少色谱柱的使用寿命;水蒸气蒸馏法处理后的样品干扰物质较少,适用于大量样品的日常检验,对色谱柱损坏较轻,但样品前处理时间较长。
简介:研究了AD--50大孔吸附树脂提取精制紫叶小檗叶红色素的最佳条件.结果表明:AD-50树脂在50℃、吸附液pH3-4时对紫叶小檗叶红色素的吸附能力较强,以95%乙醇作为解吸剂,20℃以下洗脱效果最好.