简介:目的:筛选软枣固态发酵的最佳发酵工艺及比较软枣发酵前后的抗癌效果。方法:采用纳豆芽孢杆菌对软枣进行固态发酵,以总黄酮含量和活茵数为考察指标,首先对发酵温度进行单因素考察,再采用正交设计进行优选,最终筛选出软枣发酵的最佳发酵工艺。采用MTT法,考察软枣发酵前后对人肝癌细胞SMMC-7721的作用效果。结果:软枣固态发酵最佳工艺为发酵温度为37℃,软枣与大豆配比为5:3,发酵时间为4天,初始含水量为100%,接种量为15%。软枣发酵后产物的抗癌作用强于发酵前软枣。结论:验证试验表明,筛选的软枣固态发酵最佳发酵工艺稳定、可行,发酵后抗癌效果增强,本试验为充分利用此药材提供了基础资料。
简介:目的:优化通关藤总皂苷的提取纯化工艺,测定通关藤总皂苷的抗肿瘤活性。方法:采用正交试验,以总皂苷收率作为指标优化通关藤总皂苷的最佳提取工艺;采用动态吸附实验,分别考察了5种不同型号的大孔树脂(D101,AB-8,ZTC-1,NKA-9,D3520)对通关藤总皂苷的吸附和解吸性能,并以吸附量、洗脱量为考察指标,对通关藤总皂苷的纯化工艺进行了筛选,以通关藤苷A为对照,采用紫外分光光度法测定通关藤总皂苷的含量;采用MTT法检测通关藤总皂苷的抗肿瘤活性。结果:通关藤总皂苷的最佳提取工艺为:加入10倍量70%乙醇,加热回流提取3次,每次2h。ZTC-1具有最佳吸附与解析参数,最佳纯化工艺为:取通关藤粗提取物,加相当于生药量15倍的蒸馏水溶解,离心,取上清液,通过ZTC-1树脂柱,依次用水、50%乙醇洗脱至无色,弃去,再用70%乙醇洗脱1.5BV,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,冷冻干燥,即得通关藤总皂苷。通关藤总皂苷对人肝癌细胞Hepg2具有抑制作用,高浓度组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P〈0.05)。当提取物浓度大于0.312mg/mL时,人肝癌细胞Hepg2的增殖即受到抑制,且随着药物剂量的增大其差异更为显著。结论:所得提取纯化工艺简单可行,具有很好的应用前景,为通关藤总皂苷的深度开发提供依据。
简介:目的利用错配杂交和化学发光技术,建立一种检测MGMT基因启动子区过甲基化的定量分析方法.方法基因组DNA经过亚硫酸氢钠修饰,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化.设计特异的PCR引物(不合CpG位点),同时扩增含有CpG位点甲基化或非甲基化目的MGMT基因启动子区,用两条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物杂交,化学发光检测,通过两条探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中MGMT甲基化的程度.结果检测混合样品中MGMT基因的甲基化水平与结果完全相符,并可用于肿瘤组织样品的MGMT甲基化定量检测.结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的MGMT基因甲基化的定量检测方法.