简介:目的建立泰泽氏病原体(Ty)纯化方法,获得纯的菌体供抗原研究,为ELISA诊断抗原的制备提供依据;并尝试建立Ty隐性感染血清学抗原检查方法。方法选择特异性抗体包被磁珠,从感染大鼠肝脏中富集和纯化Ty;用SDS-PAGE和Westernblot技术考察纯化Ty的蛋白和抗原图谱;同时用免疫磁珠分离技术(IMS)直接检查隐性感染大鼠肠道上皮细胞内的Ty。结果用辛酸-硫酸铵纯化的Ty单克隆抗体M5以0.5μg/10^7beads以上浓度包被抗IgG抗体预结合的磁珠4h,可最大效率地富集Ty;分离反应进行1h,敏感性达到1矿菌体/mL;吖啶黄染色镜检法可以直接、快速地观察到结合于磁珠上的细菌;抗原分析表明,IMS较好地去除了肝组织和真核细胞成分,纯化的TvRJ株具有3个免疫优势的抗原成分,相对分子质量(Mr)分别为160×10^3、116×10^3、55×10^3;此外,IMS法可直接从隐性感染大鼠盲肠上皮细胞中检测到少量寄生的Ty。结论用IMS技术可有效地富集和纯化Ty,并可以作为Ty隐性感染血清学抗原检查的候选方法。
简介:目的探讨更为可靠、纯净度高的犬骨髓间充质干细胞分离、培养方法.方法将犬骨髓抽取液分别以1.068g/ml及1.073g/ml分离液进行密度梯度离心,采用贴壁培养法获得骨髓间充质干细胞(MSCs);以LG-DMEM加15%FBS培养;应用干细胞表面标志蛋白,多向诱导分化等方法进行细胞鉴定.结果采用1.068g/ml分离液可获得纯度较高的单核细胞,接种细胞生长良好,孵育24h即可见细胞贴壁生长,平均倍增周期为1d,细胞呈纺锤状,螺旋梳状排列.连续培育8代以上,未见细胞形态、增殖特性改变.MSCs表面标志SH2阳性,CD45阴性,可定向分化为心肌细胞、成骨细胞及脂肪细胞.结论采用1.068g/ml分离液能够较好地进行犬MSCs的体外分离、培养与扩增,分离得到的细胞具备MSCs的特性.
简介:以盐城地区分布广泛的新鲜环毛蚓为原料,经过4℃抽提、分段盐析、SephadexG-100凝胶柱层析、PEG-6000浓缩以及制备电泳等步骤分离纯化蚯蚓纤溶酶。在聚丙烯酰铵凝胶电泳和纤维平板活性检测的基础上.选用割胶的方式.最终得到蚯蚓纤溶酶的一种单一组分。该酶具有较强的溶解纤维蛋白的作用,SDS—PAGE测得其分子量为20KD。不同pH对其纤溶活性影响不同。采用单因素方差分析和多重比较.结果表明pH为8.0-12.0环境下该纤溶酶活性均较大,其中pH为9.0~12.0相互之间差异不显著.DH为9.0与8.0差异极显著.DH为10.0与8.0差异显著。
简介:摘要:科技在迅猛发展,社会在不断进步,制药行业在我国发展十分迅速,药品生产过程中需要使用大量的纯化水和注射用水,利用机械过滤器以及活性炭过滤器对自来水进行过滤,再利用中间水箱、树脂反渗透膜以及紫外线消毒等设备对水源进行纯化,合格的纯化水经多效蒸馏后制得注射用水。在此过程中,需要密切关注纯化水的pH值、导电率、总有机碳等指标以便及时发现水系统异常状态,同时需定期进行数据回顾分析以便尽早发现水系统变化趋势并及时进行纠正。采用传统的线下检测模式,不仅检测数据少,检测成本较高,且检测具有一定的滞后性。为了提升制药用水检测效率,利用PLC技术设计一套在线自动检测设备,实现对制药用水质量的远程监测。同时在制药用水质量控制过程中对此监测系统与传统检测手段有机结合的最佳实践进行总结萃取。