简介:目的本研究构建含绿色荧光蛋白基因的重组慢病毒,并观察其在人椎间盘髓核细胞中的表达情况。方法应用分子克隆技术将绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因导人慢病毒载体质粒pLenti6/V5TOPO,应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒系统(包括包装质粒、包膜蛋白质粒等)共转染入293细胞进行包装,48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h收集病毒上清并感染髓核细胞,在荧光显微镜下感染情况。结果重组慢病毒滴度测定约为10^7U/mL。感染人椎间盘髓核细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了含GFP的慢病毒载体,且能成功将目的基因转入椎间盘髓核细胞并表达。
简介:【摘要】目的:采用回顾分析的方法,比较间接免疫荧光法和蛋白印迹法对于抗核抗体的检测准确性。方法:从我院2020年10月至2021年10月收治的疑似自身免疫性疾病的患者共计1000例,经过实验条件筛选之后,选择800例患者作为本次研究的主要对象。对800例患者均采用间接免疫荧光法和蛋白印迹法进行抗核抗体的检测,对比两种方法的检测结果。结果:采用蛋白印迹法诊断的正确率高于间接免疫荧光法,采用蛋白印迹法的敏感度、特异度、漏诊率、误诊率都优于间接免疫荧光法。结论:针对自身免疫性疾病疑似患者,采用蛋白印迹法准确率更高,更能够帮助患者确定治疗方案,因此该方案值得临床推广。
简介:BCL-2 蛋白家族与细胞凋亡.细胞生物学杂志 2001,Caspase家族与细胞凋亡调控,Caspase家族与细胞凋亡
简介:[摘 要] 目的 将小鼠Sox2基因、穿膜肽TAT以及小分子泛素样修饰蛋白SUMO融合并转入大肠杆菌中进行表达,最终获得大量具有高效穿膜活性的Sox2蛋白。 方法 利用PCR技术扩增得SUMO-TAT融合基因,并插入到pET-3c载体。再通过扩增获得小鼠Sox2基因,将其与pET3c-SUMO-TAT基础载体连接,构建得重组表达载体pET3c-SUMO-TAT-Sox2,然后转化到Rosseta(DE3)表达菌中,经IPTG诱导表达,使用Ni-NTA亲和层析进行分离纯化。 结果 成功构建了pET3c-SUMO-TAT-Sox2原核表达载体,经终浓度为1 mmol /L的IPTG诱导4 h后表达约为57kDa的融合蛋白,以包涵体形式存在,Western Blotting检测显示良好特异性,经300 mmol/L咪唑洗脱可获得纯度较高的SUMO-TAT-Sox2融合蛋白。 结论 得到大量带有穿膜肽TAT的融合蛋白Sox2,为今后利用重编程因子融合蛋白诱导体细胞重编程为iPS细胞奠定基础。
简介:摘要目的探讨血清β2-微球蛋白(Sβ2-MG)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)联合超敏C反应蛋白(hs-CRP)检测在早期2型糖尿病(T2DM)肾病辅助诊断中的临床应用价值。方法回归分析T2DM无肾病患者66例(NDN组)、早期T2DM肾病患者69例(早期DN组)和体检健康者70例(正常组),采集清晨空腹静脉血进行Sβ2-MG、hs-CRP和肌酐(SCrea)以及晨尿Uβ2-MG检测的结果。结果NDN组Sβ2-MG和hs-CRP检测水平高于正常组(P<0.05),SCrea、UREA和Uβ2-MG高于正常组(P>0.05),早期DN组Sβ2-MG、hs-CRP、UREA和Uβ2-MG检测水平均显著高于正常组和NDN组(P<0.01),SCrea检测水平高于正常组和NDN组(P>0.05)。各组联合检测的阳性检出率高于单项的阳性检出率(P<0.05),早期DN组阳性检出率显著高于NDM组(P<0.01)。结论血尿β2-微球蛋白和hs-CRP水平在早期T2DM肾病中均升高,其水平变化有助于早期T2DM肾功能损伤辅助诊断和病情监测,联合检测可提高其阳性检出率,为临床医生提供有价值的治疗依据。
简介:摘要目的探究尿白蛋白、免疫球蛋白G及β2微球蛋白在老年糖尿病患者临床诊断与检查中的应用效果。方法此次研究的对象是选择30例老年糖尿病患者,将其临床资料进行回想分析,并作为观察组,另选取30例体检健康人员作为对照组。比较两组尿液检查中的尿白蛋白、免疫球蛋白G以及β2微球蛋白水平。结果观察组患者尿液检查中的尿白蛋白、免疫球蛋白G以及β2微球蛋白水平较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论尿白蛋白、免疫球蛋白G及β2微球蛋白指标含量水平与患者糖尿病病情程度密切相关,并且其操作简单,生化检测结果准确,可以作为糖尿病临床诊断与检查中的医学参考依据。
简介:【摘要】目的 对老年糖尿病患者临床检验尿白蛋白、免疫球蛋白G以及β2的微球蛋白的临床诊断意义进行分析。方法 将我院于2021年3月到2022年1月期间收治的50例老年糖尿病患者作为观察组研究对象,另选取我院无糖尿病的50例老年患者作为对照组研究对象,检测两组患者的尿白蛋白、免疫球蛋白G、β2微球蛋白水平并就结果展开组间对比。结果 对比发现观察组患者尿白蛋白水平、免疫球蛋白G水平以及β2微球蛋白水平均明显高于对照组,组间对比差异显著。(P<0.05)结论 老年糖尿病患者的尿白蛋白水平、免疫球蛋白G水平以及β2微球蛋白水平要远远高于无糖尿病的人群,通过对患者的尿白蛋白水平、免疫球蛋白G水平以及β2微球蛋白水平进行检测,可以有效对糖尿病患者进行诊断。
简介:摘要:目的:探究安全转运程序管理是否具有临床推广价值。方法:从我院2015年11月到2017年4月期间接诊的高危儿中选取符合本次纳入标准的患儿一共300例,然后对其展开研究,将这些高危儿平均分为两组,对于A组的高危儿而言,采用的是安全转运程序管理的护理方式,对于B组高危儿而言,采用的是常规性质的转运管理,期间医护人员需要记录A、B组高危儿在转运过程中发生的不良情况、转运效果等等,以作对比分析。结果:采用安全转运程序管理的这一组高危儿转运成功率更高,家属对于转移到满意度更高。A、B组高危儿转运过程中的差异较为明显,具有统计学意义。结论:安全转运程序管理在高危儿转运中值得推广。
简介:目的研究豚鼠行单侧蜗轴切除术后双侧蜗神经核复合体内囊泡膜谷氨酸转运体(vesicularglutamatetransporter.VGluTs)表达的变化情况,以明确VGluTs阳性终末在第一级听觉中枢中的分布情况及功能。方法将正常成年豚鼠行单侧内耳蜗轴切除术,手术前、后行听觉脑干诱发电位(ABR)检测,术后1周应用免疫组织化学染色ABC法观察双侧脑干蜗神经核内VGluTs阳性终末的分布及变化情况。结果正常豚鼠蜗神经前腹侧核、后腹侧核、背侧核内均可见丰富的VGluTl阳性终末分布,腹侧核内可见阳性终末环绕神经元胞体形成密切接触。VGluT2阳性终末主要分布于蜗神经背侧核中间层及腹侧核边缘小细胞壳区。豚鼠单侧蜗轴切除术后一周.手术同侧蜗神经腹侧核内VGluT1阳性终末几乎全部消失。与对侧及对照组蜗神经腹侧核对比鲜明。蜗神经核内VGluT2阳性终末在蜗轴切除术后一周未发现明显变化。结论蜗神经腹侧核内大量的Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)阳性终末起源于同侧耳蜗螺旋神经节:VGluT1是研究初级听觉传人通路中谷氨酸能神经元终末的良好标志;VGluT1和VGluT2在听觉传导系统及听觉中枢中的分布有差异,提示了功能上的不同。
简介:摘要目的本文分析腹腔镜+胆道微创手术联合应用在胆石患者中所取得的临床效果,并着重分探究腹腔镜+胆道微创手术联合应用对胆盐转运子BSEP、MRP2、NTCP的水平产生的影响。方法选取2015年2月25日—2018年2月25日间于我院普外科进行治疗的50例胆囊结石患者作为研究对象,患者均进行腹腔镜+胆道微创手术联合治疗,治疗结束之后,对治疗前后患者的BSEP、MRP2、NTCP展开分析。结果和治疗前进行比较,治疗后患者BSEP、MRP2水平出现明显升高,组间对比存有明显差异(P<0.05)。和治疗前进行比较,治疗后患者NTCP水平并未出现明显变化,组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论胆石患者接受腹腔镜+胆道微创手术联合治疗,可保障患者能够取得很好的治疗效果,提升患者的BSEP、MRP2水平,改善患者胆盐转运和胆汁酸代谢,降低患者术后胆囊结石的复发,值得推广。
简介:目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码绿色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞的细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以Nucleolector^TM技术转染pEGFP-C2(EGFP组),以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后24h成功发现EGFP的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。EGFP的表达逐渐增强,至第6天达到最高峰(47.8%),观察一个月未发现表达减弱。结论pEGFP-C2基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响;EGFP可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记;Nucleofector^TM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。