尼莫同对严重烫伤幼年大鼠血脑屏障和脑水肿的影响

尼莫同对严重烫伤幼年大鼠血脑屏障和脑水肿的影响

胡维晟1卢艳玉2刘曾旭3

胡维晟1卢艳玉2刘曾旭3（1漳州卫生职业学院护理系福建漳州363000）（2福建省漳州市医院磁共振室福建漳州363000）（3南昌大学基础医学院人体解剖教研室江西南昌330006）

【摘要】目的探讨尼莫同对严重烫伤幼年大鼠血脑屏障（BBB）和脑含水量（BWC）变化的影响。方法75只健康Wistar幼年大鼠随机分为正常组、烫伤组、尼莫同组，每组25只。建立严重烫伤模型，所有实验大鼠分别在烫伤后2h、6h、12h、24h、48h断头处死后取脑，测定大鼠脑组织伊文氏蓝（EB）含量和BWC。结果严重烫伤后大鼠脑组织BWC2h开始升高，6h达高峰，48h仍高于对照组；血脑屏障（blood-brainbarrier，BBB）通透性（用EB含量来表示BBB通透性）于烫伤后2h开始升高，6～12h段达到高峰；BBB通透性与脑含水量变化呈显著正相关（r=0.820，P<0.05）。应用尼莫同后BBB通透性降低，BWC显著下降。结论严重烫伤可导致脑BBB通透性增高，早期应用尼莫同能明显减轻烫伤对脑BBB的损伤，从而减轻脑水肿。

【关键词】烫伤血脑屏障脑水肿尼莫同

1材料和方法

1.1材料和试剂

健康一月龄Wistar大鼠75只（由南昌大学医学院动物科学部提供，动物合格证号：02196002），体重70～100g，雌雄不拘。随机分为三组：A组：正常对照组，25只大鼠；B组：烫伤组，25只大鼠；C组：烫伤＋尼莫同治疗组，25只大鼠，术后立即腹腔注射（IP）尼莫同（0.5mg/kg）。所有实验大鼠分别于烫伤后立即腹腔注射乳酸林格氏液（40ml/kg）抗休克。各组又设烫伤后2、6、12、24、48h共5个时相点处死动物，每组每个时相点各6只，分别于相应时间点取材。

1.2动物模型制备

烫伤组模型制备前禁食12h。10％戊巴比妥钠（30ml/kg）腹腔麻醉下背部剃毛，10％Na2S脱毛，画出占体表30％的致伤范围，100℃开水烫伤13s，造成背部30％TBSAⅢ度烧伤（病理组织切片证实），伤后迅速脱离热源，保温。假烫伤组造模前禁食12h。10％戊巴比妥钠（30ml/kg）腹腔麻醉下背部剃毛，10％Na2S脱毛，画出占体表30％的致伤范围，37℃热水接触13s后迅速脱离热源，保温。尼莫同组烫伤后即刻腹腔注射尼莫同（0.5mg/kg）保温[1]。

1.3脑含水量的测定

各组实验大鼠分别在烫伤后2h、6h、12h、24h、48h经断颈处死，采用干湿重法测定脑组织百分含水量，大鼠麻醉后取下全脑，称其湿重，然后置入105℃恒温电烤箱中烘烤72h至恒重（两次称量差别＜0.02mg）。脑组织含水量=（湿重－干重）/湿重×100％。计算脑组织百分含水量。

1.4脑组织伊文氏蓝含量的测定

按Belayev法使用EB做示踪剂，在处死动物前1h经右侧股静脉注射2％EB（2mg/kg），经3％戊巴比妥钠腹腔麻醉后，快速开胸暴露心脏，经左心室用生理盐水灌注，直至右心耳流出清凉液体，以清除血中染料。取大鼠脑组织称重，加入2倍体积二甲基甲酰胺，50℃水浴中孵育72h，1500r/min离心10min，取上清液应用紫外分光光度计，在伊文氏蓝最大吸收光谱632nm处检测吸光度，测量光密度值(OD值)，EB含量以OD/g脑组织表示。脑组织EB含量(OD/g湿脑组织)代表BBB通透性。

1.5统计学处理

所有数据用均数±标准差（x-±s）表示，用SPSS13.0统计学软件进行统计学处理，采用随机单因素方差分析(one-wayANOVA)，P＜0.05表示差异具有显著性意义。

2结果

2.1脑含水量变化

脑含水量变化详细如表1、图A所示：

表1各组大鼠BWC的比较(x-±s，n=6)

图A严重烫伤幼年大鼠组和尼莫同组不同时间点BWC比较(%)

FigAComparisonofbrainwatercontentateachtimepointofseverescaldedratsNimotopgroupcomparedwithscaldgroup：#P<0.05，##P<0.01

2.2脑组织伊文氏蓝含量的变化

脑组织伊文氏蓝含量的变化详细如表2、图B所示。

表2各组大鼠脑组织伊文氏蓝含量的比较(OD/g)(x-±s，n=6)

图B严重烫伤幼年大鼠组和尼莫同组不同时间点脑组织EB含量比较(OD／g)

FigBComparisonofbrainEBcontentateachtimepointofseverescaldedyoungrats

Nimotopgroupcomparedwithscaldgroup:#P<0.05，##P<0.01

2.3脑含水量与EB含量的相关分析

脑含水量与EB含量的相关分析详细如图C所示。

图C严重烫伤幼年大鼠BWC与脑组织EB含量关系

3讨论

钙离子拮抗剂是一种公认的较为常用的脑保护药，尼莫同是一种新型的钙离子拮抗剂，具有良好的脂溶性，易于透过血脑屏障，能选择性扩张脑血管，通过抑制自由基的游离脂肪酸释放，稳定神经细胞膜，降低谷氨酸诱导的神经元毒性作用，保护血管基膜的完整性，解除血管痉挛，降低病理性Ca2+超载等机制而发挥作用从而保护线粒体细胞器的完整，减少缺血区神经细胞坏死的细胞凋亡。能缓解出血部位及血肿破入脑室引起的病理性痉挛，改善脑循环，促进血肿的溶解和吸收，从而减轻脑水肿.严重烫伤后由于休克、感染和电解质紊乱等因素引起肿瘤坏死因子、氧自由基和蛋白水解酶的释放，作用于血管内皮细胞，引起了血脑屏障通透性的增高；加上可能引起兴奋性氨基酸的产生增加从而引起脑水肿的形成。脑损伤时神经细胞发生严重的钙超载，并可诱发一系列的病理反应，促发和加重脑的继发性损害。尼莫同是特异性Ca2+通道阻断剂，在中枢神经系统中至少有3个作用部位，即神经细胞，脑血管内皮细胞和胶质细胞，尼莫同能阻滞Ca2+跨膜向细胞内流，并能抑制细胞内钙的释放，使细胞内钙的浓度保持一定的水平，使平滑肌松弛、血管扩张和血流增加，促进脑功能恢复，动物实验的研究表明，用钙拮抗剂能减轻因脑缺血而导致的脑损伤，保护血脑屏障的完整性。

参考文献

[1]骆世芳，孙善全.严重烧伤后脑水肿的发病机制.中华临床医药，2004，5(5):34-36.