防风多糖对过敏性鼻炎大鼠血清及鼻腔灌洗液细胞因子的影响

防风多糖对过敏性鼻炎大鼠血清及鼻腔灌洗液细胞因子的影响

马志跃（通讯作者）李彬冯勇余晓旭樊建刚何刚

马志跃（通讯作者）李彬冯勇余晓旭樊建刚何刚

（四川省人民医学科学院·四川省人民医院耳鼻咽喉头颈外科四川成都610072）

【摘要】目的：考察防风多糖对过敏性鼻炎（AR）大鼠细胞因子的影响。方法：32只健康SD大鼠随机分空白组（A）、模型组（B）、防风多糖低剂量组（C）、防风多糖高剂量组（D），除A组外其余3组建立大鼠AR模型。每组于致敏第15d后开始给药，C、D组分别灌胃300、600mg/kg防风多糖治疗，A、B组灌胃等量0.9%生理盐水，连续14d，处死，采样待检。ELISA检测血清IgE、IL-4、INF-γ及鼻腔灌洗液IgE、IL-4、HA含量。结果：C、D组较B组显著降低血清及鼻腔灌洗液IgE、IL-4含量、显著升高血清IFN-γ含量，降低鼻腔灌洗液HA含量（P<0.05）；D组较C组可显著改善血清及鼻腔灌洗液各指标含量（P<0.01）。结论：防风多糖可调节AR细胞因子的生成和释放，对AR有治疗作用。

【关键词】过敏性鼻炎；防风多糖；免疫因子；大鼠

【中图分类号】R765.21【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2019）08-0041-03

EffectofSaposhnikoviaparicataPolysaccharideonCytokinesinSerumandNasalLavageFluidofRatswithAllergicRhinitis

MaZhiyue,LiBin,FengYong,YuXiaoxu,FanJiangang,HeGang.

SichuanAcademyofMedicalSciences,SichuanPeople'sHospitalChengdu610072,China

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofSaposhnikoviaparicatapolysaccharideoncytokinesinratswithallergicrhinitis(AR).MethodsThirty-twohealthySDratswererandomlypidedintoblankgroup(A),modelgroup(B),low-dosepolysaccharidegroup(C),andhigh-dosepolysaccharidegroup(D),ratARmodelswereestablishedintheremaining3groupsexceptgroupA.Eachgroupwasstartedafterthe15thdayofsensitization.GroupsCandDweretreatedwith300,600mg/kgofsaposhnikoviaparicatapolysaccharide,respectively.GroupsAandBwereintragastricallyadministeredwith0.9%normalsalinefor14daysandtheratsweresacrificedandsamplesweretakenforexamination.ThelevelsofserumIgE,IL-4,INF-γandnasallavagefluidIgE,IL-4andHAweredetectedbyELISA.ResultsThelevelsofIgE,IL-4inserumandnasallavagefluidweresignificantlyloweringroupCandDthaningroupB,thecontentofserumIFN-γwassignificantlyincreasedandHAinnasallavagefluidwasdecreased(P<0.05).ThecontentofserumandnasallavagefluidingroupDwassignificantlyimprovedcomparedwithgroupC(P<0.01).ConclusionsThesaposhnikoviaparicatapolysaccharidecanregulatetheproductionandreleaseofARcytokinesandhasatherapeuticeffectonAR.

【Keywords】Allergicrhinitis;Saposhnikoviaparicata(Turcz.)Schischkpolysaccharide;Immunefactor;rats

过敏性鼻炎（allergicrhinitis，AR）属于鼻炎慢性病，发病过程复杂，难治愈，发病率呈现逐年上升趋势，严重者可影响学习、工作、睡眠、发声等[1]。防风多糖具有较好的抗过敏、降低外界刺激干扰的作用，对抗过敏抑制率达到55.51%，且没有肌肤刺激作用[2]。为进一步探讨防风多糖对AR的作用效果和机制，本研究建立大鼠AR模型，探讨防风多糖对AR模型大鼠的症状改善及其免疫作用机制。

1.材料与方法

1.1实验动物与分组

健康SD大鼠32只，雌雄各半，体质量（200±10）g，购于成都达硕实验动物有限公司，使用许可证号：SYXK（川）2014-189。试验动物随机分为空白组（A）、模型组（B）、防风多糖低剂量组（C）、防风多糖高剂量组（D）。每组8只，清洁级实验室饲养。

1.2过敏性鼻炎大鼠模型复制

参照常用卵清蛋白（OVA）复制AR模型方法[3]：将OVA0.4mg、铝佐剂40mg及生理盐水1mL混匀，B、C、D组大鼠腹腔注射1mL，隔日1次注射致敏，连续7次，A组注射等体积生理盐水。第15～17天、第18～20天、第21～28天分别以0.25%、2%、5%的OVA溶液双侧滴鼻激发，每次100μL/鼻孔，A组大鼠以等体积生理盐水滴鼻激发，1次/d。

1.3药物干预

每组动物于致敏第15d后开始灌胃给药，防风多糖高剂量组（600mg/kg）、低剂量组（300mg/kg），空白组与模型组给予等量0.9%生理盐水，1次/d，连续14d。

1.4样本采集

末次给药1h后，戊巴比妥钠（60mg/kg）腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，离心取血清；剥离双侧鼻中隔黏膜，4%多聚甲醛固定；鼻腔灌洗液采集参考Kim[4]文献方法。

1.5检测项目

将固定的鼻黏膜组织按常规方法制备石蜡切片，HE染色，镜检观察病理组织学变化；ELISA试剂盒（上海茁彩）检测血清IgE、IL-4、INF-γ及鼻腔灌洗液中IgE、IL-4、组胺（HA）含量。

1.6统计学方法

数据采用SPSS20.0统计软件进行分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（x-±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1病理组织观察

空白组鼻黏膜无炎症反应，模型组黏膜上皮坏死，鼻黏膜水肿、充血，炎症细胞浸润，防风多糖低剂量组鼻黏膜有少量炎症细胞浸润，防风多糖高剂量组可见轻度水肿，炎症细胞显著减少，图。

图1大鼠鼻黏膜病理组织学变化

2.2血清IgE、IL-4、INF-γ含量

造模成功后，血清IgE、IL-4含量较空白组显著升高，INF-γ含量显著降低（P<0.01）。防风多糖低、高剂量组较模型组均可显著降低IgE、IL-4含量，升高INF-γ含量（P<0.05），高剂量组较低剂量组IgE、IL-4含量降低显著，INF-γ含量升高显著（P<0.01），表1。

表1各组大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量

组别例数IgE（mg/L）IL-4（μg/L）INF-γ（μg/L）

空白组84.37±0.88Aa35.83±3.11Aa0.79±0.04Dd

模型组835.65±2.08Dd55.33±4.51Bc0.30±0.03Aa

防风多糖低剂量组822.86±2.80Cc45.79±3.68ABb0.41±0.03Bb

防风多糖高剂量组815.11±1.33Bb36.93±2.42Aa0.67±0.05Cc

P-0.0000.0000.000

F-141.5720.03125.46

注：同列上标不同大写字母表示P＜0.01，不同小写字母表示P＜0.05。

2.2鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量

造模成功后，模型组鼻腔灌洗液IgE、IL-4、HA含量较空白组显著升高（P<0.01）。防风多糖低、高剂量组较模型组可显著降低IgE、IL-4、HA含量（P<0.01），高剂量组较低剂量组降低更显著，表2。

表2各组大鼠鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量

组别例数IgE（mg/L）HA（ng/mL）IL-4（μg/L）

空白组83.63±0.25Aa46.31±3.96Aa24.85±1.84Aa

模型组833.94±2.39Dd99.23±12.95Cc44.56±2.84Cd

防风多糖低剂量组822.58±2.97Cc75.61±5.06Bb35.04±2.64Bc

防风多糖高剂量组812.12±1.47Bb59.28±2.61ABa30.31±2.38ABb

P-0.0000.0000.000

F-122.8528.9634.78

注：同列上标不同大写字母表示P＜0.01，不同小写字母表示P＜0.05。

3.讨论

AR是变应原再次刺激使机体产生一系列生化反应，导致鼻黏膜水肿、喷嚏、鼻痒等症状[1]。本试验采用防风多糖治疗大鼠AR，病理组织考察结果表明，模型组黏膜上皮坏死、鼻黏膜水肿、充血，防风多糖高剂量组轻度水肿，炎症细胞显著减少，显著减轻AR病理组织损伤。

免疫球蛋白（IgE）是引起AR的主要抗体，变应原刺激后机体产生IgE抗体可联合细胞表面的IgE受体使机体致敏，再次接触相同变应原时会诱发炎性介质释放从而引起过敏反应[5]。本实验结果显示模型组较空白组血清IgE含量显著升高，防风多糖高、低剂量均可显著降低血清IgE含量（P＜0.01）。INF-γ、IL-4分别是Th1、Th2的重要细胞因子，在鼻炎发病中起核心作用，当Th1反应偏向Th2反应，IL-4分泌增加，INF-γ分泌减少[6]。本实验结果显示模型组较空白组血清IL-4含量显著増加，INF-γ显著降低（P<0.01），防风多糖高剂量组较模型组显著降低IL-4含量，增加INF-γ含量（P<0.01），说明防风多糖促进Th1/Th2细胞平衡。

鼻腔分泌物是由鼻腔中腺体分泌物、泪腺分泌物及血浆外渗液组成。而AR鼻腔局部细胞因子的变化具有特异性[7]。组胺（HA）是鼻过敏速发相的最重要的介质，可导致鼻黏膜水肿，鼻呼吸阻力増加，分泌物增多。本实验结果显示防风多糖高剂量组可显著降低HA含量（P<0.01），说明防风多糖有抗HA效应。本试验鼻腔灌洗液IgE、IL-4含量变化与血清中结果趋势一致，说明防风多糖可有效地抑制AR大鼠外周血及鼻腔局部炎性介质，进而控制AR发展。

综上所述，防风多糖可通过有效抑制炎性介质，平衡细胞因子，缓解炎症来治疗过敏性鼻炎。

【参考文献】

[1]陈盼碧,宣锦,史林威,等.热敏灸对过敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影响[J].中国现代医学杂志,2017,27(4):17-21.

[2]防风多糖对过敏性鼻炎大鼠免疫因子的影响[J].中国药师,2017,20(7):1188-1191.

[3]KashiwabaraM,AsanoK,MizuyoshiT,etal.Suppressionofneuropeptideproductionbyquercetininallergicrhinitismodelrats[J].BMCcomplementaryandalternativemedicine,2016,16(1):132.

[4]KimJH,YoonMG,SeoDH,etal.DetectionofAllergenSpecificAntibodiesFromNasalSecretionofAllergicRhinitisPatients[J].AllergyAsthma&ImmunologyResearch,2016,8(4):329.

[5]Navinés-FerrerA,Serrano-CandelasE,Molina-MolinaGJ,etal.IgE-relatedchronicdiseasesandanti-IgE-basedtreatments[J].Journalofimmunologyresearch,2016,2016:8163803.

[6]刘书宇,王树鹏.麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎大鼠INF-γ与IL-13含量的影响[J].河南中医,2017(8):1370-1372.

[7]刘永平,陈蕴光,郑俊斌,等.变应性鼻炎鼻激发后鼻腔分泌物嗜酸性粒细胞增加与血清特异性IgE水平正相关[J].细胞与分子免疫学杂志,2017,33(1):85-88.

基金项目：四川省成都市科技局课题（2015-HM01-00172-SF）