粗江蓠多糖对辐射损伤小鼠免疫细胞周期的影响

粗江蓠多糖对辐射损伤小鼠免疫细胞周期的影响

王亚飞1孟庆勇2

王亚飞1孟庆勇2

（1山西长治医学院附属和平医院检验科046000；2广东医学院检验学院523808）

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)15-0203-02

【摘要】目的研究粗江蓠多糖（GHPS）对辐射损伤小鼠胸腺细胞周期的影响。方法采用60Coγ射线2Gy全身照射小鼠制造辐射损伤模型，通过流式细胞术（FCM）检测不同剂量（10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg）的GHPS对辐射损伤小鼠胸腺细胞周期的影响。结果辐射对照组小鼠接受60Coγ射线2Gy照射后，胸腺细胞G0/G1期细胞百分数升高(P<0.01)，S期和G2/M期细胞百分数下降(P<0.01)。经腹腔注射（10，20，40）mg/kgGHPS，再接受γ射线2Gy照射后，小鼠胸腺细胞G0/G1期百分数明显低于辐射对照组（P<0.01），S期和G2/M期细胞百分数明显高于辐射对照组（P<0.01）。并呈剂量依赖性。结论GHPS可以缓解辐射所致的小鼠胸腺细胞G0/G1期阻滞，使S期和G2/M期细胞百分数增加。

【关键词】粗江蓠多糖辐射损伤胸腺细胞

为寻找天然的抗辐射免疫调节剂，本文探讨了粗江蓠多糖对60Coγ射线辐射损伤小鼠胸腺细胞周期的影响。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物昆明小鼠，雌雄各半，SPF级，（6～10）周龄，体重（20±2）g，广东医学院动物中心提供。

1.1.2材料与试剂粗江蓠多糖由本实验室提取，生理盐水配制成10%的多糖原液，10磅高压消毒10min备用。使用前用RPMI-1640培养液配制成（0.4，0.8，1.6）mg/ml终浓度的多糖溶液。RPMI1640培养基，小牛血清。

1.1.3仪器Epics-XL型流式细胞仪，SW-CJ-1D型净化工作台，台式离心机，微量加样器。

1.2方法

1.2.1分组处理按随机区组法将50只小鼠分为正常对照组(A组)，照射对照组(B组)和3个不同GHPS剂量加照射组(C，D，E组)，每组10只。正常对照组和照射对照组每只小鼠腹腔注射生理盐水0.5ml/d。3个不同GHPS剂量加照射组小鼠分别腹腔注射（0.4，0.8，1.6）mg/ml的GHPS溶液0.5ml/d，各组小鼠均连续注射14d。B，C，D，E组小鼠第15d均一次性给予2Gy60Coγ射线全身照射。

1.2.2胸腺细胞悬液的制备照射后24h，将小鼠颈椎脱位处死，置75%乙醇中浸泡5min，无菌取出胸腺和脾脏置于平皿中，除掉结缔组织，用生理盐水清洗干净。加入2mlRPMI-1640培养液，用剪刀将胸腺剪成1mm3碎块后，用毛玻片轻柔研磨组织碎片，经8层纱布过滤制成单细胞悬液，用Hanks液离心洗涤后，将细胞悬浮于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中。经台盼蓝染色，计数活细胞在95%以上，调整细胞数至5×107/ml。

1.2.3细胞周期测定取5×107/ml胸腺细胞悬液0.5ml，分别用PBS清洗(1000r·min-1，离心10min)2次后，用70%冰乙醇固定胸腺细胞过夜。1000r·min-1，离心10min，弃乙醇，用PBS清洗(1000r·min-1，离心5min)2次。加入1mlPI染液，混匀，避光15min，用流式细胞仪测定细胞周期。

1.2.4统计学处理用SAS8.0软件进行方差齐性检验，然后进行完全随机设计方差分析，组间差异的显著性用q检验，多个样本均数与对照组样本均数之间比较用t检验。

2结果

粗江蓠多糖对辐射损伤小鼠胸腺细胞周期的影响：B组小鼠接受60Coγ射线2Gy照射后，G0/G1期胸腺细胞百分数明显高于A组，而S期和G2/M期胸腺细胞百分数明显低于A组(P<0.01)。C、D、E组小鼠先经腹腔注射GHPS，再接受γ射线2Gy照射后，各组小鼠G0/G1期胸腺细胞百分数随GHPS的剂量增加而下降，而S期和G2/M期胸腺细胞百分数明显高于B组(P<0.01)。

3讨论

大量研究表明，多糖具有明显的抗辐射作用，能显著延长辐射损伤机体的存活时间,提高存活率，拮抗辐射引起的免疫功能低下。研究表明不同细胞对辐射效应的敏感程度是有差别的，即细胞具有各自的辐射敏感性。但辐射作用后细胞也可发生共同的变化，细胞周期进程的改变、细胞增殖抑制或者细胞死亡。

辐射使真核细胞分裂延迟，出现G1和G2期阻滞、S期蓄积。本研究发现照射对照组小鼠胸腺细胞和脾细胞均发生了G1期阻滞，而S期和G2/M期细胞百分数相对于正常对照组有显著减少。GHPS加照射组小鼠胸腺和脾细胞G1期阻滞明显改善，S期和G2/M期细胞百分数有所增加，表明GHPS可以加快辐射损伤的淋巴细胞修复和增殖。

参考文献

[1]YangQY,TianXY,FangWS.BioactivecoumarinsfromBoenninghauseniasessilicarpa[J].JAsianNatProdRes，2007，9(1):59-65.

[2]王书奎，周振英编著.实用流式细胞术彩色图谱[M].上海：第二军医大学出版社，2004：40-41.