酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的质量保证

酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的质量保证

朱睿慧

朱睿慧（浙江省武义县中医院检验科321200）

【关键词】酶联免疫吸附试验乙型肝炎病毒表面抗原质量保证

【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）32-0348-02

酶联免疫吸附试验(ELISA)法是医学检验的免疫学检验方法之一，已经广泛应用到对病原微生物的免疫学检查试验中[1]。本文对ELISA法检测乙型肝炎(下称乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)的质量保证进行分析，报道如下。

1标本的质量保证

1.1严格执行标本的查对制度，接收标本应将标本上的标签与申请单逐一核对，验收签字。对科室自采的标本，接到申请单后，按申请单上的姓名将受检者喊应，确定性别、年龄，然后编号抽血，避免标本采集错误。

1.2对检测HBsAg同时又有其他检测项目的，要采集双管血。对只有单管血的标本，应先检测HBsAg，后送其他室进行检测，以避免相互交叉污染，出现错误的结果。

1.3标本应及时检验，一次性塑料管标本放置时间不宜过久。本室有1例弱阳性HBsAg标本，放置72h后，检测呈阴性。这是否与塑料有吸附HBsAg作用有关，有待进一步研究证实。

1.4HBsAg检测使用血清，所以标本一定要充分离心，彻底去除纤维蛋白。否则加进反应孔的血浆凝固可阻止HBsAg的游动，不利于与吸附在反应杯上的乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)结合，从而产生错误的假阴性结果。对于重度溶血标本应重新采血进行测定。对严重脂血、黄疸及药物治疗等影响检测结果的标本，亦应叮嘱受检者适时重新检测。

2检测中的质量保证

2.1加样标本应加入反应孔的底部，加酶试剂时严防溅出孔外污染其他反应孔，且加酶时角度要相同，使各孔的酶剂量保持一致。

2.2反应温度反应温度应准确至37℃，试剂使用前先放置室温平衡，而且还应考虑反应板放置水浴达到37℃这一平衡段所需的时间。

2.3反应时间反应时间要准确，时间过短，特异性结合不够，易产生假阴性；时间过长，非特异性结合物紧附于反应孔，难以洗脱，测定值偏高。

2.4洗板洗板是ELISA法中最重要的环节之一，特别是手工洗板，加入的洗液量以刚满反应孔为限。过量就会溢出污染后孔，过少，反应孔上部的吸附物不易洗去，均可产生错误结果。对吸水纸，要一次性使用，应使用不易脱落碎屑的吸水纸为宜。

2.5质控每次检测HBsAg时，除做阴、阳性对照外，还应做高、中、低浓度的质控血清，结果应与质控品结果及阴、阳性对照完全相符。

3检测后的质量保证

3.1ELISA一步法检测HBsAg存在钩状效应，可致高浓度的HBsAg标本检测结果呈假阴性[2]。从其检测原理包被抗-HBs和HBsAg血清与酶标记抗-HBs分析，一步法由于血清和酶标记物同时加入，若血清中含高浓度的HBsAg，则剩大量HBsAg可直接与酶标记抗-HBs结合，这种结合物在洗涤中易被洗去，然而包被抗-HBs与HBsAg形成的复合物只能与很少量的酶标抗-HBs结合，甚至没有剩余的酶标抗-HBs与其结合，导致未形成双抗体夹心，加入显色剂时不显色，从而出现假阴性。二步法加入高浓度的HBsAg，除与包被抗-HBs结合后，多余的HBsAg被洗去，第二步加入酶标抗-HBs就不会出现一步法的现象。

3.2结合HBsAg其他项目综合分析，如在乙肝5项检测中，如单一出现HBeAg、乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)阳性或出现HBeAg和抗-HBc2项阳性者，使用检测方法为一步时，应考虑有无钩状效应致HBsAg假阴性。应将标本稀释或使用二步法重新测定HBsAg。若出现理论上不易出现的罕见结果时，应查阅近期报告单，综合分析或使用其他先进方法(如化学发光、聚合酶链反应等)进行复核。在HBsAg检测中，不仅应要有高素质、高职业道德的实验人员，还要有合乎要求的标本，在检测中还应有高质量的仪器、试剂，才能使HBsAg检测质量得到保证。

参考文献

[1]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006.

[2]徐京听.ELISA实验的质量控制[J].现代医学检验杂志，2005，20(4)：73-74.