牛蒡子苷元与青霉素 G联合应用治疗大鼠肺炎链球菌引起的中耳炎

牛蒡子苷元与青霉素 G联合应用治疗大鼠肺炎链球菌引起的中耳炎

袁强 刘旭 张美琴 易鸿利 袁野 章炜

长沙医学院，湖南 长沙 410219

作者简介：袁强，男，汉族，1992年12月生，本科，临床医学专业，中级保健按摩师，现就读长沙医学院临床学院，在校期间曾担任心理与健康协会会长，护校队成员，班干部，获得优秀个人称号，优秀学生干部称号。

通讯作者：章炜，医师，助教，长沙医学院临床学院内科教研室，主要从事临床教学工作。

项目编号：长沙医学院2015年大学生创新性课题（长医教[2015]15号-175  ）

摘要 目的 青霉素和牛蒡子苷元联合治疗中耳炎疗效。方法 40只健康雄性SD大鼠 ，麻醉后将 50μl肺炎链球菌悬液（1×10⁸CFU/ml）经鼓膜穿刺注入到大鼠左侧中耳腔的方法建立大鼠中耳炎模型，将建立成功的模型随机分为A、B、C、D四组，A组不进行任何干预；B组用青霉素G注射液。C组注射牛蒡子苷元制剂;D组用牛蒡子苷元+青霉素G联合治疗。各组分别在用药后的 1、4、7、10d 于显微镜下显微镜下观察鼓膜情况，中耳腔分泌物或灌洗液细菌培养鉴定，苏木精一伊红（HE）染色切片观察，以明确疗效。结果 经秩和检验四组间有统计学差异（P<0.05），进一步做两两比较均有统计学差异（P<0.05），D组炎症程度低于A、B、C组，B、C、D组炎症程度均低于A组。10d在显微镜下观察D组局部炎症明显轻于 B 组，并在观察期间没有出现炎症反复 结论：牛蒡子苷元对化脓性中耳炎的治疗有效，青霉素G和牛蒡子苷元联合治疗中耳炎比单独使用青霉素G疗效良好，牛蒡子苷元可作为治疗化脓性中耳炎的新剂型做进一步的研究。

关键词 中耳炎，肺炎链球菌，大鼠，牛蒡子苷元

中耳炎是耳鼻咽喉科常见疾病，其病理改变主要是中耳鼓室黏膜化脓性症，主要的治疗方式是抗菌药物的使用，本实验通过建立中耳炎动物模型^[1]使用牛蒡子苷元与青霉素G联合应用治疗肺炎链球菌引起的中耳炎，探索其疗效，寻找新的联合治疗中耳炎的药物。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 40只健康的雌性SD大鼠，体重250～300g，购自长沙市天勤生物技术有限公司[SCXK（湘）2014-0011]，实验前适应性饲养一周并耳镜证实外耳道、鼓膜、中耳正常。

1.1.2 试剂及仪器设备 肺炎链球菌ATCC49619（南京厚信生物技术有限公司）;血琼脂平板（常德比克曼生物科技有限公司）;牛蒡子苷元（西安汇林生物科技有限公司）;青霉素G（佳信兽药）;仪器设备电子天平、721型分光光度计、接种环、移液枪、电子显微镜（长沙医学院科技创新实验室提供）

1.2 方法

1.2.1 肺炎链球菌的制备 实验前将肺炎链球菌接种于接种于哥伦比亚血琼脂平板，37℃，培养 24h，用无菌生理盐水洗下肺炎链球菌制成细菌悬液， 并用 721 型分光光度计调整细菌密度为1×10⁸ CFU/ml。

1.2.2 中耳炎模型建立及评估 40只大鼠经腹腔注射10%水合氯醛（0.4 ml/100g） 行全身麻醉后 ， 仰卧固定于手术台实验人员用双手固定大鼠，使之不能随意摆动。在耳内窥镜帮助下采用1ml注射器抽取50μl菌液缓慢注射SD大鼠左侧中耳腔内，大鼠麻醉清醒后送回动物房饲养，每天在显微镜下观察鼓膜形态的变化.

1.2.3 分组与干预 造模成功后开始干预治疗。将40只造模成功的大鼠按随机原则分为四组。A组不进行任何干预；B组用青霉素G注射液。C组注射牛蒡子苷元制剂;D组用牛蒡子苷元+青霉素G联合治疗，各组均连续治疗7天，各组大鼠分别在用药当天及4、7、10d分别在显微镜下观察鼓膜形态的变化。

1.2.4 细菌培养鉴定：进行干预治疗后第10天每组随机各抽取1只大鼠，经腹腔注射10％水合氯醛（0．4 ml/100g）行全身麻醉后无菌操作下用棉签拭取A、B、C、D四组大鼠耳内积液作细菌培养鉴定，如无积液，向耳内注入 0.05 ml 生理盐水灌洗， 拭取灌洗液送细菌培养鉴定。

1.2.5 光镜下观察局部病理变化 用药后的第 7 天在D组随机选取1只SD大鼠，用10％水合氯醛（0．4 ml／100g）腹腔注射麻醉后，经鼓膜注10%甲醛溶液0.05 m L，快速断头处死，将颞骨完整取下，于 10%甲醛溶液固定 12 h，10% 中性乙二胺四乙酸（ EDTA）溶液中脱钙常规石蜡包埋。所有的颞骨切片均为与蜗轴平行的水平做以4μm层厚切片，取与蜗轴对应的中耳腔黏膜区域作为观察区域，行常规苏木素-伊红染色。

2 结果

所有大鼠实验期间行为、 饮食、 活动均正常，无一意外死亡， 观察检测结果如下。

2.1 动物模型构建结果

40只SD大鼠右侧耳各时间段鼓膜均未见明显异常，左侧耳均出现急性中耳炎。见图1

图 1 A: 右侧耳鼓室内侧壁黏膜呈单层扁平上皮，上皮下间隙菲薄，纤毛上皮细胞之间有少量的杯状细胞，纤毛排列整齐规则 B: 左侧耳鼓室内侧壁上皮稍肿胀，上皮下间隙内有大量残留渗出的炎症细胞，以多形核中性粒细胞为主; 可见大量的凝胶状空泡

2.2 细菌培养鉴定结果

第10天取A、B、C、D四组脓性分泌物或灌洗液进行细菌培养鉴定，A组左侧耳10耳见积脓，细菌培养阳性，B组左侧耳4耳无明显积液1耳清亮积液，细菌培养阴性，C组左侧耳4耳见清亮积液，细菌培养阴性，D组左侧耳未见积液，细菌培养阴性。所有培养阳性的细菌经鉴定证实为肺炎链球菌。

2.3 药物治疗效果

第10天D组炎症程度低于A、B、C组，B、C、D组炎症程度均低于A组。治疗期间未出现炎症反复见表1（P<0.05）

表1 药物疗效的比较

注：-: 没有炎症，鼓膜无充血，无脓性分泌物; + ： 轻度炎症，鼓膜充血，或穿孔后鼓膜充血减轻，可见脓性分物; + + : 重度炎症，鼓膜穿孔且明显充血，可见大量脓性分泌。P1：以D组为参照组，A，B，C组分别与D组的比较；p2：A，B，C，D组间比较。

2.4 第10天大鼠左侧耳在耳镜下检测如下

图 2. 耳镜下所见 A: A组，鼓膜化脓清晰可见，还有部分穿孔; B: B组，鼓膜已穿孔，周围充血仍存在;C: C组，鼓膜充血，可见黄色化脓灶; D: D组，残留鼓膜穿孔，但鼓膜干净，未见化脓灶

3 讨论

本次实验结果显示，各组有显著的统计学差异（P=0.001）说明各个组用药不同对治疗中耳炎的疗效不同。从中我们可以得到在今后临床用药治疗中耳炎时，用药要适当选择，选取最佳药品进行治疗，用药不同，疗效不同。在各组两两进行比较发现 D组炎症程度低于A、B、C组，B、C、D组炎症程度均低于A组，D组局部炎症明显轻于B组（P<0.05）.说明牛蒡子苷元对治疗肺炎链球菌引起的中耳炎还是具有一定疗效的。肺炎链球菌作为中耳炎的常见致病菌之一，青霉素对肺炎链球菌有较强的抗菌作用，但在当今社会由于抗生素的滥用，导致耐药菌株的出现，使得单独使用药物治疗疗效效果不理想，中西药联合治疗炎症正在迅速发展。相关研究表明牛蒡子苷元具有较强的抗炎^[2-4]及抑菌^[5]作用。通过本次实验中更加验证了这一点，更充分说明了中西联合用药的优越性，以及在今后的临床用药中，更加需注重中西相结合。但由于实验条件有限，实验仅针对近期疗效进行观察评定，对于更长时间内，青霉素G+牛蒡子联合用药用于控制 SD 大鼠局部炎症是否会发生反复尚未知，还需在进一步研究中。现今中西药联合用药发展迅速，其疗效与单独用药相比疗效更好，联合用药治疗各种疾病已成必然趋势，然在临床上中西联合用药治疗中耳炎普遍较少，因此，在临床上治疗中耳炎因积极推动中西结合治疗，通过此次实验结果表明青霉素G和牛蒡子苷元联合使用优于单独青霉素 G治疗肺炎链球菌引起的中耳炎，希望在对今后的临床中西结合用药中起到一定的临床意义。

4、结论与建议

牛蒡子苷元对化脓性中耳炎的治疗有效，并且青霉素G和牛蒡子苷元联合治疗中耳炎效果比单独使用青霉素G疗效要好中西相结合。

参考文献

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[2] 张淑雅，王小萍， 陈昕，等.牛蒡苷抗炎和解热作用研究 [J].药物评价研究，2013.（12）：422-425

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[4] 王潞，赵烽，刘珂. 牛蒡子苷及牛蒡子苷元的药理作用研究进展[J]. 中草药，2008，03:467-470.

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