简介：摘要目的评价低温缺氧复氧时大鼠心肌成纤维细胞(RCF)对H9c2细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法体外培养的H9c2细胞，采用随机数字表法分为4组(n＝12)：对照组(C组)、低温缺氧复氧组(HHR组)、RCF共培养组(Co组)和RCF共培养+低温缺氧复氧组(Co+HHR组)。C组于37 ℃、5%CO2+95%空气条件下培养5 h。HHR组于4 ℃、5%CO2+95%N2条件下培养1 h，然后于37 ℃、5%CO2+95%空气条件下培养4 h。Co组和Co+HHR组将0.3×105个/孔H9c2细胞接种于Transwell©小室下层培养皿、0.6×105个/孔RCF接种于上层小室。Co组于37 ℃、5%CO2+ 95%空气条件下培养5 h；Co+HHR组于4 ℃、5%CO2+95%N2条件下培养1 h后，于37 ℃、5%CO2+95%空气条件下培养4 h。采用台盼蓝染色法测定H9c2细胞死亡率，免疫荧光法测定Cx43和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的表达水平，Western blot法测定Cx43、磷酸化Cx43、ERK1/2及磷酸化ERK1/2的表达水平。结果与C组相比，HHR组H9c2细胞死亡率升高，Cx43表达及磷酸化水平降低，ERK1/2表达及磷酸化水平升高(P<0.05)，Co组H9c2细胞死亡率、Cx43及ERK1/2的表达与磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)；与Co组相比，Co+HHR组H9c2细胞死亡率升高，Cx43及ERK1/2的表达和磷酸化水平降低(P<0.05)；与HHR组相比，Co+HHR组H9c2细胞死亡率升高，Cx43及ERK1/2的表达和磷酸化水平降低(P<0.05)。结论低温缺氧复氧时RCF可降低H9c2细胞Cx43的表达水平和活性，其机制可能与下调ERK1/2的表达、抑制ERK1/2的活性有关。

简介：摘要目的评价不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞(RCF)对心肌细胞损伤和细胞间偶联的影响。方法体外培养RCF，采用随机数字表方法分为3组(n＝12)：密度0.5×105个/ml组(T0.5组)、密度为1.0×105个/ml组(T1.0组)和密度为2.0×105个/ml组(T2.0组)。3组置于缺氧装置中，以5 L/min的速度持续吹入95%N2+5%CO2 15 min进行缺氧处理，然后置入4 ℃冰箱培养1 h进行低温处理；培养完成后，置于37 ℃、含95%空气+5%CO2培养箱中复氧4 h。上述处理结束后，3组分别与相同密度(1.0×105个/ml)的心肌细胞采用Transwell小室间接共培养16 h，心肌细胞接种于Transwell小室下层，RCF接种于Transwell小室上层。共培养结束后，收集心肌细胞，采用CCK8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR法检测缝隙连接蛋白43(Cx43) mRNA的表达，Western blot法检测Cx43及磷酸化Cx43(p-Cx43)的表达。结果与T0.5组相比，T1.0组和T2.0组心肌细胞活力、细胞凋亡率、Cx43、p-Cx43及Cx43 mRNA表达水平降低(P<0.01)；与T1.0组相比，T2.0组心肌细胞活力、细胞凋亡率、Cx43和p-Cx43表达水平降低(P<0.01)，心肌细胞Cx43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论低温缺氧复氧RCF在一定范围内呈密度依赖性地诱导心肌细胞损伤，其机制可能与下调Cx43的表达，降低Cx43的活性有关。

简介：摘要目的采用微电极阵列标测技术测定，评价七氟烷预处理心脏成纤维细胞来源外泌体对低温缺血再灌注大鼠离体心脏心室肌电传导的影响。方法SPF级SD大鼠乳鼠，雌雄不拘，差速贴壁法提取原代心脏成纤维细胞。2~4代心脏成纤维细胞用2.5%七氟烷持续处理1 h，继续培养24~48 h后提取外泌体。SPF级健康雄性SD大鼠，2~3月龄，体重280~320 g，按照随机数字表法分为3组(n＝8)：对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和七氟烷预处理心脏成纤维细胞源性外泌体＋缺血再灌注组(S＋IR组)。C组平衡灌注110 min；IR组和S＋IR组平衡灌注20 min，停灌60 min后再灌注30 min。S＋IR组于术前48 h尾静脉注射七氟烷预处理心脏成纤维细胞分泌的外泌体1 ml(200 μg)，C组和IR组分别注射生理盐水1 ml。于平衡灌注20 min(T0)、再灌注15 min(T1)和再灌注30 min(T2)时采用微电极阵列在离体心脏左心室表面，获取心脏传导速度(CV)、传导绝对不均一性(P5-95)和不均一性指数(P5-95/P50)。结果与C组比较，S＋IR组T1时CV降低，P5-95和P5-95/P50增加(P<0.05)，T2时差异无统计学意义(P>0.05)，IR组T1，2时CV减慢，P5-95和P5-95/P50升高(P<0.05)；与IR组比较，S＋IR组T1，2时CV增加，P5-95和P5-95/P50降低(P<0.05)。结论七氟烷预处理心脏成纤维细胞源性外泌体可改善低温缺血再灌注大鼠离体心脏心室肌的电传导。