简介：摘要目的原核表达GII.4基因型人诺如病毒(human norovirus, HuNoV)次要衣壳蛋白VP2并制备多克隆抗体。方法设计特异性引物扩增GII.4 HuNoV的VP2全基因，酶切连接至原核表达载体pGEX-6P-1，将鉴定正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞。挑取单克隆摇菌，加入IPTG诱导重组GST-VP2融合蛋白的表达，经GST亲和层析纯化和酶切，获得GII.4 HuNoV VP2蛋白。通过SDS-PAGE分析纯化后HuNoV VP2蛋白相对分子质量。将纯化的GII.4 HuNoV VP2蛋白(0.5 mg/ml)免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体。结果GII.4 HuNoV VP2蛋白被成功表达和纯化，相对分子质量(Mr.×103)约29。将GII.4 HuNoV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体滴度高达1∶1 280 000。Western blot与间接ELISA分析显示该多克隆抗体能和GII.4 HuNoV VP2抗原特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GII.4 HuNoV VP2蛋白，并成功制备出高效价GII.4 HuNoV VP2多克隆抗体。

简介：摘要目的探讨2015—2018年兰州市5岁以下住院腹泻儿童分子流行病学特征。方法收集2015年1月至2018年12月兰州市5岁以下腹泻住院儿童粪便标本和相应临床信息，采用RT-PCR方法进行扩增、测序和序列分析。应用SPSS 25.0软件进行相关统计分析，其中率的比较采用x2检验，分析2015—2018年兰州地区诺如病毒分子流行特征。结果诺如病毒的检出率为14.27%（112/785），2015—2018年的检出率为7.8%~17.6%，不同年份阳性率比较，差异有统计学意义，季节高峰分别出现在1月、5月和10月。1岁检出率最高，2岁检出率最低，差异无统计学意义。根据基因分型结果，GII.4 Sydney[P31]和GII.3[P12]为主要流行基因组合，分别占54.5%（61/112）和36.6%（41/112）。结论兰州市急性胃肠炎患儿诺如病毒基因型具有多样性，其中以GII.4 Sydney[P31]和GII.3[P12]为主要流行株。