简介：摘要目的获得我国隐匿性乙型肝炎病毒感染（occult HBV infection，OBI）人群中乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）基本核心启动子区（basic core promoter，BCP）、前C区和C区序列特征，为进一步阐明该区域与OBI的关系奠定基础。方法收集2016—2018年全国18个省、自治区和直辖市的43家血站实验室，经日常检测后HBV DNA阳性的血浆样本。经实验室确认后HBsAg阳性样本和OBI样本各入组不少于200例，针对HBV BCP/前C区、C区和S区进行半巢式或巢式PCR和Sanger测序及序列分析。结果完成测序417例样本，其中HBsAg阳性样本216例和OBI阳性201例，均为基因型B和C。HBsAg阳性组该区域的突变频率明显高于OBI组。在B基因型中仅发现1个OBI高频突变A1896G，在C基因型中发现T1762A/A1764G、T1803A/G、A1986G、T1866A（D22E）等OBI高频突变。在C基因型中发现的前C区ε-反式作用元件区域（1 847-1 907 nt）突变G1888T可能会改变前基因组RNA的茎环结构，从而影响其的转录。此外，还在OBI组首次发现了BCP区1 756-1 775 nt缺失突变，可能会直接影响HBsAg和HBeAg的表达，从而导致OBI的发生。结论本研究深入分析了我国OBI献血者中BCP区、前C区、C区的序列基本特征，发现HBsAg阳性组该区域突变频率显著高于OBI组，TA缺失突变和G1888T可能会导致OBI的发生。

简介：摘要准确测定患者体内药物浓度是做好治疗药物监测（TDM）工作，实施精准化药物治疗的必要前提，也是临床实验室的重要工作内容之一。TDM在免疫抑制剂（如环孢素A、他克莫司）、精神药物（如丙戊酸、卡马西平）和其他需要进行药物浓度监测的药物中都对临床治疗发挥着重要作用。用于TDM的血药浓度检测方法类别多，目前只有部分免疫学检测方法具备了经过批准的配套检测系统和试剂盒，但是大部分TDM项目的药物浓度检测方法属于高效液相色谱、液相色谱-串联质谱等技术，都是自建方法（LDT）。资料显示，同一检测项目不同检测方法之间的检测结果存在明显差异，同一方法不同实验室之间的检测结果也存在明显差异，究其原因，有以下几个方面：（1）TDM检测结果尚未实现量值溯源；（2）检测方法尚未实现标准化；（3）EQA计划的覆盖面不足；（4）TDM实验室参加EQA计划的意识不够；（5）TDM标准化尚处于初级阶段。这些问题制约了TDM的临床应用及相关研究工作的开展。为了解决这些问题，需要：（1）建立参考系统，实现检测结果量值溯源；（2）在逐步增加TDM EQA计划项目的同时，也要尽快开展正确度评价计划；（3）规范TDM样本检测技术；（4）加强实验室管理，建立完善的质量管理体系。

简介：摘要目的评估新型冠状病毒（2019-nCoV）样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中，充分混匀后1∶2、1∶10稀释，加入灭活2019-nCoV病毒培养液，以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏度不同的扩增试剂分别进行提取和扩增。结果对于相同的模拟混采样本，a提取的模板比b、c提取的模板检测循环阈值（Ct）分别提前2.10±0.47和3.46±0.62；扩增相同的混采核酸模板，A试剂的N基因Ct值比B试剂提前1.16±0.48，ORF1ab基因Ct提前2.36±0.54。扩增体系中加入10拭子核酸使A试剂检测Ct值滞后1.36±0.32，对B试剂无影响。使用a试剂提取，10混1混采后，C、D、E试剂的扩增Ct值比检测单拭子样本高1.66±0.39。对于400拷贝/ml的10混1样本，C、E试剂均可检出，D试剂的N基因漏检。结论混采引入的大量人基因组DNA干扰提取和扩增效率。在加大样本提取体积、提高提取试剂性能的同时，应选择大模板量上样、检测灵敏度高的扩增试剂，方可提高系统灵敏度和结果稳定性，大大降低漏检风险。

简介：摘要目的采用假病毒对三种新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）核酸血液筛查试剂的检测性能进行比较和分析，为SARS-CoV-2核酸血液筛查的试剂选择提供依据。方法使用慢病毒包装系统构建包含SARS-CoV-2基因组片段的假病毒。使用A、B、C三个单位的SARS-CoV-2核酸血液筛查系统进行RNA提取和扩增，根据各试剂检测结果计算其检测限（limit of detection, LoD）、特异度和精密度。结果A、B、C三个单位N区段的单检LoD分别为3.46、8.73、23.87 copies/mL，混检LoD分别为13.65、78.92、159.14 copies/mL。ORF1ab区段的单检LoD分别为6.32、12.22、24.05 copies/mL，混检LoD分别为26.94、67.97、94.80 copies/mL。各试剂检测SARS-CoV-2阴性血浆的特异度均为100%，检测2LoD和较高浓度假病毒的批内和批间变异系数均小于5%。结论A公司的SARS-CoV-2核酸血筛系统灵敏度最高。三种试剂均有良好的特异度和精密度。

简介：摘要目的建立一种基于ICP-MS技术的全血铁、铜同时检测的候选参考方法。方法验证性研究。选取钴（Co）作为内标元素，采用称量法配制标准溶液及全血标本，对全血标本进行电热板消解并稀释，通过ICP-MS在同位素分析模式下测量57Fe/59Co、 63Cu/59Co同位素比值，采用包括法定量。通过测定EQA质控品和有证标准物质，验证本方法的精密度、加标回收率和正确度，并通过方法比对进一步验证方法的性能。结果本法全血铁的检出限为0.136 mg/kg，定量限为0.454 mg/kg。全血铜的检出限为0.008 mg/kg，定量限为0.027 mg/kg。本方法标准曲线浓度范围为铜：0.83~3.33 mg/kg，铁：167~667 mg/kg，该范围内线性良好（R2>0.999 90），方法的精密度良好，总CV范围：铁：0.42%~0.68%；铜：0.14%~0.94%。方法加标回收率均在100%左右，其范围：铁均值（99.69%~100.07%）；铜均值（99.26%~100.51%）。结论成功建立了一种基于ICP-MS技术的全血铁、铜同时测定的候选参考方法，该方法相比传统参考方法简便、快速，精密度与加标回收率良好。

简介：摘要目的探究增殖肝细胞膜上的钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(sodium taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP)表达下调与慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者抗病毒治疗应答的关系。方法纳入2011年1月至2015年3月入住北京市解放军总医院第五医学中心的68例乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen，HBeAg)阳性的CHB患者，收集患者基本信息和实验室检查结果；以基线(抗病毒治疗前)的炎症活动度(G)为依据将患者分为≤G2组及>G2组，每组选取12例患者的肝脏穿刺组织标本，进行NTCP和Ki67的免疫荧光染色，计算Ki67阳性细胞比例，并对NTCP的染色进行评分。收集2014年3月至2017年3月入住解放军总医院第五医学中心有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染并诊断为肝脏局灶性结节增生(focal nodular hyperplasia，FNH)的5例患者的结节切除组织及其配对的肝脏非FNH组织，免疫组织化学染色检测各组织标本中Ki67、NTCP和乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)的表达，并计算染色阳性细胞比例或对染色强度进行评分。统计学分析采用Mann-Whitney U检验、χ2检验和Spearman相关性分析。结果肝脏FNH组织中Ki67阳性细胞比例[6.75%(6.20%，8.16%)]高于配对的肝脏非FNH组织[0.75%(0.66%，1.20%)]，而对应的NTCP及HBsAg的免疫组织化学染色评分分别为3.00(1.00，3.00)和2.00(1.00，2.00)，分别低于配对的肝脏非FNH组织[分别为8.00(8.00，9.00)和8.00(6.00，8.00)]，差异均有统计学意义(Z＝－2.611、－2.424、－2.635，P＝0.009、0.015、0.008)。>G2组患者37例，≤G2组患者31例。抗病毒治疗6个月后，>G2组患者血清HBV DNA、HBeAg的下降幅度分别为(0.71±0.14) lg IU/mL和(0.92±0.13) lg IU/mL，分别大于≤G2组的(0.54±0.30) lg IU/mL和(0.49±0.65) lg IU/mL，差异均有统计学意义(Z＝－3.048、－2.666，P＝0.002、0.008)。>G2组肝组织中Ki67阳性细胞比例[4.34%(1.84%，8.77%)]高于≤G2组[0.34%(0，0.80%)]，而NTCP的免疫组织化学染色评分[1.00(0，3.25)]低于≤G2组[6.00(4.00，8.00)]，差异均有统计学意义(Z＝－3.640、－3.012，P<0.01，P＝0.003)。Spearman相关性分析显示，NTCP免疫组织化学染色评分与Ki67阳性细胞比例呈负相关(r＝－0.512，P＝0.01)。结论炎症活动度更高的CHB患者往往伴有更为活跃的肝细胞增殖和更低的细胞膜NTCP表达，不利于HBV再感染。这可能有利于这部分患者获得更好的抗病毒治疗效果。

简介：摘要目的探讨甲胎蛋白抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的分子机制。方法选用HepG2(甲胎蛋白阳性)和QSG-7701(甲胎蛋白阴性)两种常见肝癌细胞系。分别在HepG2细胞中转染甲胎蛋白干扰质粒和在QSG-7701细胞中转染甲胎蛋白过表达质粒，培养12、24、36和48 h后，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖情况；在HepG2和QSG-7701细胞中分别干扰和过表达甲胎蛋白24 h后，加入凋亡诱导剂顺铂，采用流式细胞术检测甲胎蛋白对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响；采用蛋白质免疫共沉淀技术(CoIP)检测甲胎蛋白与转录因子维甲酸受体(RAR)的相互作用；运用染色质免疫共沉淀技术(ChIP)实验联合蛋白质印迹法验证甲胎蛋白表达水平对DNA损伤诱导转录基因1(DDIT1)表达的影响，以及甲胎蛋白和DDIT1对肝癌细胞凋亡的影响。统计学方法采用t检验。结果CCK-8结果显示，质粒转染12、24、36和48 h后，过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞相对增殖率分别较对照组升高28.7%±2.7%、49.8%±6.1%、65.8%±3.0%和79.3%±2.0%，而敲减甲胎蛋白后的HepG2细胞相对增殖率分别较对照组降低16.5%±6.1%、28.5%±5.7%、42.5%±1.7%和57.6%±3.8%，差异均有统计学意义(t＝3.978、4.357、3.461、3.636、2.858、2.446、3.233、4.492，P均<0.05)。流式细胞术结果显示，QSG-7701细胞过表达甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别降低46.3%±2.9%和47.7%±7.4%，HepG2细胞敲减甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别升高86.7%±4.0%和31.6%±10.5%，差异均有统计学意义(t＝3.543、3.893、2.336、2.561，P均<0.05)。CoIP实验结果显示，AFP与RAR能够发生相互作用。在HepG2细胞中敲减甲胎蛋白表达后，提取核蛋白发现RAR的入核较对照组增加；而在QSG-7701细胞中过表达甲胎蛋白后，RAR的入核较对照组减少。ChIP实验结果显示，AFP能够调控DDIT1表达。敲减甲胎蛋白的HepG2细胞中DDIT1表达量高于对照组，而过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞中DDIT1表达量低于对照组。转染DDIT1后，HepG2和QSG-7701细胞凋亡率分别较对照组上升53.1%±4.0%和73.3%±6.4%，差异均有统计学意义(t＝3.462、3.012，P＝0.009、0.017)。在QSG-7701细胞中，过表达甲胎蛋白后细胞凋亡率较单独加入顺铂下降46.6%±4.8%，过表达甲胎蛋白＋顺铂＋过表达DDIT1后细胞凋亡率较过表达甲胎蛋白＋顺铂上升43.6%±2.7%，差异均有统计学意义(t＝2.833、2.545，P＝0.018、0.029)。在HepG2细胞中，敲减甲胎蛋白后的细胞凋亡率较单独加入顺铂上升73.3%±6.1%，敲减甲胎蛋白＋顺铂＋敲减DDIT1后的细胞凋亡率较敲减甲胎蛋白＋顺铂下降32.7%±3.7%，差异均有统计学意义(t＝2.497、2.773，P＝0.032、0.020)。结论甲胎蛋白能够通过与转录因子RAR相互作用，抑制其下游基因DDIT1表达，不仅促进肝癌细胞增殖，还可增强肝癌细胞的抗凋亡能力，削弱顺铂对肝癌细胞的促凋亡作用。

简介：摘要目的应用两种互通性评价方案评价16种17-羟孕酮制备物的互通性。方法互通性研究，收集2018年2月至2019年6月之间北京医院检验科的新鲜人血清共52份。根据美国临床和实验室间标准化研究所文件（CLSI）EP14-A3和国际临床化学和检验医学联合会（IFCC）互通性评价工作组报告，以血清17-羟孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱法（ID-LC/MS/MS）为比对方法，3种临床常规分析系统（1种放射免疫法，2种LC/MS分析法）为待评方法，一同测定52个人血清样本和16种制备物的17-羟孕酮浓度，评价制备物质的互通性。结果综合两种互通性评价结果，所有正确度验证材料和国家甾体激素标准物质在LC/MS分析系统中都显示出良好的互通性，6/9的EQA材料在三种常规分析系统中都显示出互通性。其中所有材料在偏倚差值法中所有材料的LC/MS分析系统中都显示出良好的互通性。结论两种互通性评价结果有所差异，使用新鲜冰冻人血清作为血清17-羟孕酮的质评材料均能满足互通性要求。