简介：摘要目的制备一种新的靶向CD19的三特异性T细胞衔接器融合蛋白（19TriTE），研究其对CD19阳性血液肿瘤的免疫治疗作用。方法通过分子克隆技术构建19TriTE表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达该融合蛋白。体外实验验证19TriTE对T细胞的活化与增殖作用及介导T细胞发挥对CD19阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建19TriTE融合蛋白表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达。②19TriTE可以特异性结合T细胞和Nalm6细胞，与T细胞的平衡解离常数为19.21 nmol/L，与Nalm6细胞的平衡解离常数为11.67 nmol/L。③2 nmol/L浓度的19TriTE与T细胞及Nalm6细胞共培养时，T细胞中CD69阳性表达率为35.4%，CD25阳性表达率为49.8%，较对照组显著升高。④19TriTE在浓度为1 nmol/L时即可显著促进T细胞增殖，第12天时，T细胞绝对计数由初始1×106扩增至7.4×107，增殖74倍。⑤19TriTE融合蛋白能明显介导T细胞杀伤CD19阳性靶细胞且与剂量呈正相关，浓度为10 nmol/L时，靶细胞裂解率达50%。⑥脱颗粒实验验证，CD19阳性靶细胞存在时，19TriTE可以显著激活T细胞且与剂量呈正相关。⑦将19TriTE融合蛋白分别与过表达RFP及Luciferase基因的靶细胞及T细胞共培养，19TriTE能够介导T细胞杀伤CD19阳性的靶细胞。结论本研究成功构建及表达19TriTE融合蛋白，体外实验验证其可以有效活化T细胞，并促进T细胞增殖。同时，能够结合CD19阳性靶细胞和T细胞，促进T细胞发挥体外抗白血病作用，为进一步临床研究奠定基础。

简介：摘要目的制备一种新的靶向CD19的三特异性T细胞衔接器融合蛋白（19TriTE），研究其对CD19阳性血液肿瘤的免疫治疗作用。方法通过分子克隆技术构建19TriTE表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达该融合蛋白。体外实验验证19TriTE对T细胞的活化与增殖作用及介导T细胞发挥对CD19阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建19TriTE融合蛋白表达质粒，并通过真核蛋白表达系统成功表达。②19TriTE可以特异性结合T细胞和Nalm6细胞，与T细胞的平衡解离常数为19.21 nmol/L，与Nalm6细胞的平衡解离常数为11.67 nmol/L。③2 nmol/L浓度的19TriTE与T细胞及Nalm6细胞共培养时，T细胞中CD69阳性表达率为35.4%，CD25阳性表达率为49.8%，较对照组显著升高。④19TriTE在浓度为1 nmol/L时即可显著促进T细胞增殖，第12天时，T细胞绝对计数由初始1×106扩增至7.4×107，增殖74倍。⑤19TriTE融合蛋白能明显介导T细胞杀伤CD19阳性靶细胞且与剂量呈正相关，浓度为10 nmol/L时，靶细胞裂解率达50%。⑥脱颗粒实验验证，CD19阳性靶细胞存在时，19TriTE可以显著激活T细胞且与剂量呈正相关。⑦将19TriTE融合蛋白分别与过表达RFP及Luciferase基因的靶细胞及T细胞共培养，19TriTE能够介导T细胞杀伤CD19阳性的靶细胞。结论本研究成功构建及表达19TriTE融合蛋白，体外实验验证其可以有效活化T细胞，并促进T细胞增殖。同时，能够结合CD19阳性靶细胞和T细胞，促进T细胞发挥体外抗白血病作用，为进一步临床研究奠定基础。

简介：摘要目的构建一种新的靶向CD123的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞），为CD123阳性白血病的免疫治疗提供实验参考。方法通过单克隆筛选技术获得能稳定分泌CD123抗体的杂交瘤细胞株6E11，将杂交瘤细胞扩增后腹腔注射至Balb/c小鼠腹腔内，收集腹水并处理、纯化得到单克隆抗体，测定抗体效价并对其特异性进行验证；RT-PCR法获得轻链和重链可变区序列，并以此为基础利用分子克隆技术构建一种新的靶向CD123嵌合抗原受体，包装病毒后感染T细胞制备CD123 CAR-T细胞，通过功能实验初步探讨6E11 CAR-T细胞体外抗白血病的能力。结果①获得1株稳定分泌抗人CD123抗体的杂交瘤细胞株6E11并获得其可变区序列。②6E11单克隆抗体对CD123蛋白亲和性高，解离常数（Kd值）为2.10 nmol/L，特异性识别CD123阳性细胞且与CD123阴性细胞无交叉反应。③成功构建了CD123 CAR慢病毒载体，感染T细胞后获得了靶向CD123的CAR-T细胞（6E11 CAR-T），感染效率大于60%。④6E11 CAR-T能明显杀伤CD123阳性靶细胞MV4-11，效靶比1∶1时6E11 CAR-T细胞对MV4-11细胞的杀伤比例明显高于Vecor-T细胞[（98.60±1.20）%对（20.28±6.74）%，P<0.001]，但对CD123阴性靶细胞K562没有明显杀伤作用。⑤MV4-11细胞可以显著激活6E11 CAR-T，但对Vecor-T细胞无明显激活作用[（26.33±3.30）%对（1.17±0.06）%，P<0.001]。⑥6E11 CAR-T与MV4-11细胞共培养上清中细胞因子水平均显著高于Vecor-T组[IL-2：（92.90±1.51）pg/ml对（6.05±3.41）pg/ml，P<0.001；TNF-α：（1 407.20±91.95）pg/ml对（7.86±0.85）pg/ml，P<0.001；IFN-γ：（5 614.60±170.17）pg/ml对（8.42±2.70）pg/ml，P<0.001]，但与K562细胞共培养后，两组各细胞因子水平差异无统计学意义。⑦6E11 CAR-T在与CD123阳性急性髓系白血病（AML）原代细胞共培养过程中被显著激活，且能有效杀伤原代AML细胞。结论杂交瘤细胞株6E11能稳定分泌高效特异的抗人CD123单克隆抗体，可用于检测表达人CD123的细胞，也能应用在靶向人CD123蛋白的肿瘤免疫治疗中，以6E11 Ig可变区序列为抗原识别区的CD123 CAR-T细胞，具有明确的体外抗白血病活性，为进一步的临床研究奠定了基础。

简介：【摘要】目的 探究手术室无缝衔接式细致化护理在腰椎间盘突出症（LDH）手术患者中的应用。方法 选取2023年1月～2023年12月我院收治的行LDH手术的100例患者为研究对象，按随机数字表法分为对照组与观察组，各50例。对照组给予手术室常规护理，观察组给予手术室无缝衔接式细致化护理。比较两组的手术时间、下床活动时间、疼痛程度及并发症发生率。结果 干预后，观察组手术时间和下床活动时间均显著短于对照组（P<0.05）；术后1d、3dVAS评分及并发症发生率均显著低于对照组（P<0.05）。结论 对行LDH手术的患者给予手术室无缝衔接式细致化护理，可有效缩短手术时间和下床活动时间，减轻术后疼痛，降低并发症的发生率，适合临床推广使用。