简介：摘要目的探讨上皮-间充质转化(EMT)关键基因与结直肠癌(CRC)预后的关系，构建个体化预后风险评分模型。方法从癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)分别获取416例和532例信息完整的CRC样本数据，从基因集富集分析(GSEA)数据库下载200个EMT相关基因。分析TCGA的测序数据得到肿瘤和正常组织中的差异表达基因，与EMT基因集取交集得到62个差异表达的EMT基因，包括23个上调基因，39个下调基因。通过单因素Cox分析筛选出7个预后相关基因。进一步通过最小收缩与选择算子(LASSO)回归筛选出4个预后价值最高的基因构建风险评分模型。根据评分模型将患者分为高、低风险组，Kaplan-Meier生存曲线分析高、低风险组的生存差异。用GEO数据集对EMT风险评分模型进行验证，分析高、低风险组生存差异。通过单因素和多因素Cox分析计算风险评分模型的风险死亡比。依据风险评分模型和临床病理特征构建临床列线图。高、低风险组间比较生存差异采用Log-rank检验。结果TCGA下载的CRC样本信息经过分析得到4个与预后相关的EMT基因[胶原C-蛋白酶增强剂2(PCOLCE2)、催产素受体(OXTR)、脑源性神经营养因子(BDNF)以及丝氨酸蛋白酶抑制剂E家族1(SERPINE1)]，用于构建风险评分模型，低风险组的总生存优于高风险组，差异有统计学意义(χ2＝13.9，P<0.01)，ROC曲线提示风险评分模型具有良好的准确性，1、3、5年曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.863、0.870。GEO数据集验证风险评分模型的预测能力，高、低风险组的生存差异有统计学意义(χ2＝ 8.4，P<0.01)。单因素和多因素分析结果显示风险评分模型是独立的预后因子。列线图可有效评估CRC患者1年、3年和5年的预后。结论基于EMT关键基因的风险评分模型可以准确预测CRC患者的总生存期，基于该模型的列线图有助于评估患者的预后。

简介：摘要目的构建靶向血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)可调控活性的小分子门控嵌合抗原受体T(smgCAR-T)细胞系统并在体外验证其抗肿瘤和可调节活性。方法采用基因全长合成和磷酸钙转染法构建smgCAR-T及其阳性(CAR＋-T)和阴性(CAR--T)对照细胞。同时构建表达VEGFR2的小鼠结直肠癌细胞(MCA38VEGFR2＋)。验证并筛选构建成功的细胞后再体外验证CAR-T细胞靶向结合能力。在不同的效靶比下检测白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-γ的浓度来评估CAR-T细胞的体外分泌功能，用乳酸脱氢酶浓度评估CAR-T细胞的体外抗肿瘤活性。组间的比较采用t检验或单因素方差分析。结果基因测序和流式细胞术证实CAR-T细胞和靶细胞构建成功。与对照组比较，CAR＋-T细胞＋MCA38VEGFR2＋组具有最强的靶细胞杀伤能力。在smgCAR-T细胞＋MCA38VEGFR2＋组中，随着C16-(S)-3-甲基吲哚雷帕霉素(Rapalog)滴度升高靶细胞杀伤率逐渐升高；当Rapalog为40 nmol/L时杀伤率达到最大值，为(66.25±13.20)%。分别向smgCAR-T细胞＋MCA38VEGFR2＋细胞组(A和B组)加入40 nmol/L的Rapalog后，在24 h时可观察到两组杀伤率出现同步升高[(44.25±6.24)%比(49.25±5.56)%，t＝1.197，P>0.05]，差异无统计学意义。在置换培养基后，再次添加了Rapalog的A组中观察到靶细胞杀伤率升高明显；而未再次添加Rapalog的B组中靶细胞杀伤率升高缓慢；此时，A和B组杀伤率差异有统计学意义[(89.00±3.16)%比(56.50±6.61)%，t＝8.873，P<0.01]。结论构建的smgCAR-T细胞在体外展现出一定的抗肿瘤活性，且其活性受小分子化合物Rapalog的可逆调控。

简介：摘要目的研究基于神经层面指引的腹腔镜直肠癌根治术(NPO＋LTME)对患者术后排尿和性功能的保护效果。方法采用回顾性队列分析2016年1月至2018年12月在武汉大学人民医院接受手术治疗的直肠癌患者，其中NPO＋LTME组114例，腹腔镜下TME联合盆自主神经保留术(LTME＋PANP)组92例，比较两组患者手术及肿瘤相关指标，并随访患者术后排尿和性功能。结果两组手术时间分别为(150±7)min和(154±7)min，差异有统计学意义(t＝3.585，P<0.05)；术中出血量分别为(9±3)ml和(15±6)ml，差异有统计学意义(t＝7.654，P<0.05)。术后3个月，NPO＋LTME组排尿功能障碍率低于LTME＋PANP组，差异有统计学意义(Z＝2.549，P<0.05)，但术后6、12个月时，两组排尿功能障碍率差异无统计学意义(Z＝0.814，P>0.05；Z＝1.275，P>0.05)。术后3、6、12个月时NPO＋LTME组的男性勃起功能均优于LTME＋PANP组，差异均有统计学意义(Z＝4.917，P<0.05；Z＝4.947，P<0.05；Z＝4.081，P<0.05)；射精功能障碍率均低于LTME＋PANP组，差异均有统计学意义(Z＝4.464，P<0.05；Z＝4.948，P<0.05；Z＝4.434，P<0.05)；术后3、6、12个月时，女性性功能均优于LTME＋PANP组，差异均有统计学意义(Z＝2.532，P<0.05；Z＝2.364，P<0.05；Z＝2.076，P<0.05)。结论NPO＋LTME具有较好的手术安全性，同时对患者性功能和早期排尿功能保护具有一定优势。

简介：摘要目的构建ApcloxP/loxP＋SMAD同源物4(Smad4)loxP/loxP双转基因小鼠模拟人散发性结直肠癌，观察Smad4在结直肠癌发生发展中的作用。方法分别将Apctm1Tyj/J小鼠、Smad4tm2.1Cxd/J小鼠与C57BL/6J小鼠(均购自美国杰克逊实验室)杂交和回交转换遗传背景形成杂合子小鼠C57BL/6-ApcloxP/-/J(记为ApcloxP/-)、C57BL/6-Smad4loxP/-(记为Smad4loxP/-)，将ApcloxP/-和Smad4loxP/-小鼠杂交建系并通过聚合酶链反应(PCR)筛选出ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP小鼠。通过小鼠结肠镜分别向ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP小鼠和C57BL/6J小鼠(各12只)结直肠黏膜下注射前期构建好慢病毒LentivirusCre-IRES-Luciferase，腹腔注射荧光素酶D(D-luciferase)后在小动物活体成像系统(IVIS)下成像并通过结肠镜动态观察成瘤情况。最后对小鼠瘤灶取材行苏木精-伊红(HE)染色观察其病理改变。组间比较采用t检验。结果成功培育出ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP双转基因小鼠22只。在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生突变并形成散发性结直肠肿瘤病灶，经病理组织学证实为腺癌，可通过IVIS系统及小鼠结肠镜动态观察其情况，至12周末成瘤率33%(4/12)，C57BL/6J小鼠未观察到瘤变。两组体重分别为(22.58±1.21)、(21.36±1.01) g，比较差异无统计学意义(t＝0.892，P>0.05)；日龄分别为(63±1)、(62±1)d，差异无统计学意义(t＝0.121，P>0.05)。结论本研究构建的ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP双转基因小鼠结肠组织在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生癌变，成功模拟人散发性结直肠癌的发生过程，证实Smad4抑癌基因的条件性敲除可促进结直肠癌的发生。