简介:目的:建立顺铂诱导的人成骨肉瘤多药耐药细胞系MG63/R并观察其生物学特性。方法:以顺铂为诱导剂,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法诱导人成骨肉瘤MG63细胞,建立多药耐药系MG63/R。MTF法检测药物敏感性:光镜、透射电镜观察MG63、MG63/R细胞形态及超微结构变化;生长曲线、克隆形成试验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数、P—pg、bcl-2、p53蛋白表达。结果:经顺铂186d的诱导建立了MG63/R,MG63/R对顺铂的耐药指数为83.557,对阿霉素、长春新碱、氨甲蝶呤、环磷酰氨亦产生不同程度的交叉耐药;光镜观察可见MG63/R细胞排列不规则,形态呈三角形、多角形及多核现象;透射电镜显示MG63/R细胞表面突起增加,粗面内质网丰富;细胞周期分析显示细胞增殖能力明显增加而细胞凋亡明显降低;MG63/R细胞P—pg、bcl-2阳性表达较MG63细胞明显增加,p53表达则明显降低。结论:本研究建立了稳定的人成骨肉瘤多药耐药细胞系(MG63/R),为进一步研究顺铂的多药耐药机制和耐药治疗提供了一种新的实验模犁。
简介:摘要目的探讨骨肉瘤微环境中的癌相关成纤维细胞(CAF)对骨肉瘤SOSP-9607细胞增殖的影响及可能机制。方法通过原代培养获得骨肉瘤来源的CAF及癌旁组织正常成纤维细胞(NF),使用流式细胞术检测CAF和NF的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的表达。收集CAF、NF的培养液,制备为相应条件培养液。将SOSP-9607细胞分为对照组、NF处理组、CAF处理组,分别应用新制备的未经处理的培养液及CAF、NF条件培养液处理。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SOSP-9607细胞各处理组细胞增殖能力,实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测各SOSP-9607细胞组cyclin D1表达水平。结果CAF中α-SMA和FAP阳性率分别为(86±5)%和(74±8)%,NF中分别为(15±3)%和(10±1)%,CAF与NF间差异均有统计学意义(t=20.83,P<0.05;t=14.30,P<0.01)。MTT法检测显示,CAF处理组SOSP-9607细胞培养24 h后能够促进细胞增殖;96 h后490 nm处吸光度值达到1.83±0.26,NF处理组为1.40±0.17,对照组为1.35±0.15,差异有统计学意义(F=8.59,P<0.05)。CAF处理组SOSP-9607细胞培养48 h后,cyclin D1 mRNA相对表达量上升至1.57±0.13,NF处理组为1.05±0.15,对照组为1,三组间差异有统计学意义(F=23.09,P<0.05),同时cyclin D1蛋白的表达水平也明显增强。结论CAF能够促进骨肉瘤SOSP-9607细胞增殖,并促进cyclin D1基因的表达。
简介:目的骨肉瘤是一类发生于骨间叶组织的恶性肿瘤,恶性程度高。当前其发病的具体分子机制尚不明确且受多种因素影响。环状RNA(circRNA)已被证实在多种疾病中发挥重要的调控作用,可以通过分子海绵机制吸附miRNA进而调控关键基因表达。本研究拟通过查找骨肉瘤circRNA表达谱芯片,并分析差异表达circRNA及其潜在调控机制,预测其在骨肉瘤发生发展过程中的作用。方法通过GEO数据库查找circRNA芯片表达谱,通过GEO2R对芯片进行差异表达分析,对筛选出的上调和下调表达最明显的circRNA各5个做内源竞争性RNA调控网络图,预测出潜在靶mRNA,并应用生物信息学分析方法分析了这些靶mRNA的功能富集情况。结果在骨肉瘤circRNA表达谱芯片(GSE96964)结果中,有110个明显差异表达的circRNA,包括8个明显上调和102个明显下调的circRNA,通过位点预测网站,在5个上调最明显的circRNA下游预测出127个mRNA,5个下调最明显circRNA下游预测出158个mRNA。OMICSbean分析结果显示,这些基因所富集的通路与骨肉瘤的发生发展有密切关系。结论本研究筛选出的110个明显差异表达circRNA不仅可以作为骨肉瘤诊断与治疗的分子标志物,而且在骨肉瘤的发生发展过程中有潜在的调控作用。
简介:目的:检测在人骨肉瘤组织、骨肉瘤MG63细胞及其干细胞中Hippo信号分子TAZ的表达情况,比较骨肉瘤细胞和骨肉瘤干细胞中TAZ的表达差异,并探讨其可能的临床意义。方法2010年1月至2012年1月在我院治疗的骨肉瘤患者中,选取原发骨肉瘤组织标本12例,复发的骨肉瘤标本6例,另选6例骨纤维结构不良组织作阴性对照,并贴壁培养骨肉瘤MG63细胞,采用免疫组化方法检测骨肉瘤组织和骨肉瘤MG63细胞中TAZ的表达情况;用无血清悬浮培养骨肉瘤MG63细胞,分离并收集骨肉瘤细胞球,通过定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测骨肉瘤MG63细胞及骨肉瘤细胞球中胚胎干细胞标志基因(Nanog,Oct4)和Hippo信号分子TAZ的表达,Western印记法检测MG63细胞和细胞球中TAZ蛋白的表达情况。结果在12例人骨肉瘤原发组织标本中,3例骨肉瘤组织TAZ表达阳性,而6例骨肉瘤复发组织中TAZ表达全部阳性,在骨肉瘤细胞MG63中TAZ分子表达也呈阳性,而骨纤维结果不良中全部表达阴性。与骨肉瘤MG63细胞相比,RT-PCR显示培养的骨肉瘤细胞球中干细胞标志基因Nanog,Oct4和Hippo信号分子TAZ明显高表达。Westernblot提示细胞球中TAZ蛋白表达明显高于骨肉瘤MG63细胞。结论骨肉瘤组织中存在TAZ分子的表达,在复发骨肉瘤组织中呈高表达;在骨肉瘤细胞株中也存在TAZ分子的表达,而在干细胞中TAZ分子表达更高;提示其与骨肉瘤干细胞的特征具有一定的相关性。
简介:摘要骨肉瘤是骨骼系统常见的恶性肿瘤,好发于青少年长骨时期,起病时无典型的临床症状,恶性程度与短期内死亡率高,严重危害人类健康。
简介:目的就16例高危骨肉瘤的临床特点及护理.重点讨论如何实施科学的护理措施。方法(1)严密观察病情。(2)保持环境舒适安静,保持湿度为60%~70%.避免因多种刺激引起情绪紧张而诱发大咯血。(3)防止病理性骨折的发生。(4)对疼痛患者合理选择给药途径。(5)做耐心细致地心理护理,用成功的病例激励患者。(6)针对不同用药方法,做好化疗期护理。(7)保肢手术后护理及康复护理。结果16例均未出现严重感染等并发症。随访1年6个月,死亡2例,带病存活9例。其中行保肢手术11例,保肢率68.7%.并均获得较满意的关节功能。结论高危骨肉瘤治疗的复杂性和综合性,使相应护理措施的难度增加,根据病情.制定合理的护理计划.将有助于提高护理质量,使患者得到积极地救治,提高生存质量。
简介:摘要目的探讨海藻糖A对骨肉瘤细胞增殖转移能力抑制作用及其机制。方法将骨肉瘤细胞(上海传秋生物科技有限公司提供)分别分为4组。空白组细胞不使用药物干预,低、中、高剂量组细胞分别采用含0.25、0.50、1.00 μmol/L海藻糖A的培养基培养干预不同时间,检测细胞增殖、转移以及相关蛋白表达。然后分别在4组细胞中5.00 μmol/L转化生子因子-β(TGF-β)培养24 h再次检测细胞存活率、转移以及相关蛋白表达。采用方差检验及t检验。结果空白组细胞增殖抑制率(0%)、转移抑制率(0%)显著低于药物干预组[(62.45±23.54)%、(84.15±20.10)%,t=14.111、7.959,P<0.05],差异有统计学意义,N-钙黏蛋白(N-cadherin)、编码锌指蛋白转录因子(Snail)、锌指转录因子(Slug)、波形蛋白(Vimentin)(100%、100%、100%、100%)表达量显著高于治疗组[低剂量组:(72.56±12.25)%、(65.34±10.56)%、(70.41±16.96)%、(71.45±18.96)%;中剂量组:(62.36±10.58)%、(53.47±9.85)%、(51.89±18.47)%、(42.47±9.56)%;高剂量组:(21.17±8.56)%、(19.19±5.56)%、(17.49±6.25)%、(10.77±3.25)%,t=8.246、9.163、8.035、7.441,P<0.05],差异均有统计学意义;各干预组细胞随着药物浓度升高存活率(15.25%、28.22%、39.45%)、转移抑制率显著升高(10.36%、18.45%、45.25%,t=8.644、8.603,P<0.05),差异有统计学意义,N-cadherin、Snail、Slug、Vimentin表达量显著下降。各组细胞在接受TGF-β干预后增殖抑制率和转移抑制率均显著下降,上述蛋白表达量显著升高。结论海藻糖A可以有效抑制骨肉瘤细胞增殖转移,其作用与抑制TGF-β/Smad2/3信号通路相关。