简介：无

简介：摘要:目的：选择具有肿瘤归巢能力的人脐带间充质干细胞（MSCs）作为细胞载体，携带溶瘤病毒3型呼肠孤病毒（Reovirus3）。 研究了细胞培养体系中相关细胞因子对携带呼肠孤病毒3的MSCs杀伤K562细胞的影响，用携带呼肠孤病毒3的K562细胞进行培养，为用细胞因子或支持性携带呼肠孤病毒3的MSCs治疗慢性粒细胞白血病提供了依据。方法：通过体外试验从脐带中分离培养MSCs，对数生长期的MSCs负载呼肠孤病毒3，用对数生长期的K562细胞进行体外细胞培养，分为对照组:K562细胞；MSCs组:K562细胞+MSCs； Revirus3组（阳性对照组）:K562细胞+Revirus3；实验:K562细胞+呼肠孤病毒3+MSCs。细胞共培养24，48，72h，收集各组细胞培养上清液，采用ELISA双抗体夹心法检测肿瘤坏死因子(TNF)，干扰素(IFN)，转化生长因子(TGF)，白细胞介素(IL)-2，IL-4，IL-5，IL-6和IL-17。结果：培养24，48，72h后，MSCs组和实验组TGF，IL-6水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）； 培养48h后MSCs组，Reovi-Rus3组和实验组TNF，IFN，IL-2，IL-4水平虽高于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）。 4组培养48h后细胞培养上清中均未检出IL-5IL-17； 4组培养24h和72h后细胞培养上清中均未检出TNF，IFN，IL-2，IL-4，IL-5和IL-17。结论：MSCs携带呼肠孤病毒3在体外测试的细胞培养体系中有效抑制K562细胞，除溶瘤病毒呼肠孤病毒3的溶瘤作用外，还可能与培养体系中的细胞因子有关，细胞因子促进细胞凋亡，从而抑制K562细胞的增殖。

简介：摘要目的探讨木香烃内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR多柔比星敏感性的影响及其机制。方法取对数生长期K562/ADR细胞，分别以不同浓度木香烃内酯、多柔比星以及两药联合作用72 h，CCK-8法检测细胞增殖情况，计算细胞增殖率，获得两药半数抑制浓度（IC50）。以10 μmol/L木香烃内酯、10 μmol/L多柔比星及两药联合作用于K562/ADR细胞48 h，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测p38-MAPK通路相关蛋白的表达水平。结果木香烃内酯与多柔比星联用组细胞增殖率均低于相应浓度两药单用组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。多柔比星对K562/ADR细胞的IC50为（13.50±0.86）μmol/L，木香烃内酯为（7.30±0.55）μmol/L，差异有统计学意义（t=7.044，P=0.002）。流式细胞术检测结果显示，10 μmol/L木香烃内酯和10 μmol/L多柔比星联用组K562/ADR细胞凋亡率均高于空白对照组、木香烃内酯单用组以及多柔比星单用组[（19.68±3.21）%比（2.96±0.87）%、（9.34±2.89）%、（9.18±2.13）%]，差异均有统计学意义（均P<0.01）。与10 μmol/L木香烃内酯单用组和10 μmol/L多柔比星单用组相比，两药联用组凋亡抑制蛋白bcl-2表达下调，bad、p-p38、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白的表达水平上调。结论木香烃内酯可增强多柔比星对慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞增殖的抑制作用，促进多柔比星诱导细胞凋亡，其可能通过调控p38-MAPK通路逆转K562/ADR细胞的耐药性。

简介：摘要目的探讨anti-PD-1(scFv)/hIL-15(简称PD-15)融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力及联合GF-hIL-15Ra-K562(简称G15Ra-K562)滋养细胞对自然杀伤细胞(NK)/T细胞增殖能力的影响。方法Overlap PCR构建G15Ra表达载体，电穿孔仪转染K562，极限稀释法获取G15Ra-K562滋养细胞单克隆株。酶切连接构建PD-15表达载体，Lipofectamine™ 2000瞬时转染HEK293T细胞并获取包含PD-15融合蛋白的条件培养液。密度梯度离心获取人外周血单个核细胞，CFSE染色标记活跃增殖细胞。流式细胞术检测PD-15特异性结合PD-1的能力和对人外周血单个核细胞的增殖及不同淋巴亚群比例的影响。结果成功构建高表达融合蛋白G15Ra的滋养细胞单克隆株G15Ra-K562。添加hIL-15能够将G15Ra-K562滋养细胞扩增人外周血淋巴细胞能力提升5倍以上(P<0.05)。PD-15融合蛋白具有PD-1特异性结合能力(P<0.001)，联合G15Ra-K562滋养细胞能够在体外高效扩增人外周血来源的NK/T细胞(P<0.05)，扩增得到的细胞产品中以NK、CD8+T和CD4+T细胞为主。结论PD-15融合蛋白能够特异性靶向PD-1分子且在联合G15Ra-K562滋养细胞后具有强的人外周血来源的NK/T细胞扩增能力，建立了分步、靶向递送IL-15/IL-15Ra复合物至PD-1+细胞的细胞培养方案，为后续选择性扩增PD-1+细胞提供实验资料。

简介：摘要目的探讨K-ras基因对PM2.5染毒人支气管上皮（HBE）细胞部分癌基因和抑癌基因表达的影响。方法于2019年9月，根据K-ras基因mRNA序列，设计合成干扰序列，转染HBE细胞构建K-ras基因沉默细胞。用10、50 μg/ml PM2.5混悬液及10 μmol/L Cr6+分别染毒HBE细胞和K-ras基因沉默细胞，实时荧光定量PCR检测c-myc、c-fos、N-ras、cyclin-D1、p16、p53基因的mRNA表达水平，Western blot检测c-myc和p53蛋白表达水平。结果K-ras基因沉默细胞中K-ras基因mRNA表达水平下降（80.5%±3.6%），K-ras蛋白表达水平下降（58.9%±4.7%）（P<0.01）。各浓度PM2.5染毒HBE细胞组、K-ras沉默细胞组及10 μmol/L Cr6+染毒HBE细胞组、K-ras沉默细胞组c-myc、c-fos、N-ras、cyclin-D1基因mRNA表达水平均高于未染毒相应细胞对照组，p16和p53基因mRNA表达水平低于未染毒相应细胞对照组（P<0.01）；10 μg/ml PM2.5染毒K-ras沉默细胞组c-myc、c-fos、p16基因mRNA表达水平低于10 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组，p53基因mRNA表达水平高于10 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组（P<0.01）；50 μg/ml PM2.5染毒K-ras沉默细胞组c-fos、N-ras、cyclin-D1、p16和p53基因mRNA表达水平均低于50 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组（P<0.01）。50 μg/ml PM2.5染毒HBE细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒HBE细胞组，p53蛋白表达水平低于未染毒HBE细胞组（P<0.05）；50 μg/ml PM2.5染毒K-ras沉默细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒K-ras沉默细胞组（P<0.05）。结论PM2.5可引起HBE细胞癌基因表达升高，K-ras基因沉默能抑制PM2.5诱导HBE细胞癌基因的表达。

简介：摘要：研究证实PI3K/Akt信号通路在调控成骨细胞、破骨细胞的骨代谢中发挥着重要作用，对维持人体骨稳态具有一定的意义。本文拟探讨该信号通路在成骨细胞分化、破骨细胞凋亡中的作用，并探析以miRNA为代表的非编码RNA在PI3K/AKt信号通路中调控骨代谢的作用机制，以期为骨代谢相关疾病的防治提供理论依据。

简介：摘要目的探讨地塞米松（Dex）对成骨细胞增殖和凋亡的影响及潜在的作用机制。方法将人成骨细胞hFOB 1.19分为4组：对照组（不加药物），Dex组（300 μM Dex处理48 h），Dex+AA组（300 μM Dex+2 000 μM AA处理48 h）和Dex+NAC组（300 μM Dex+500 μM NAC处理48 h）。抗坏血酸（AA）和N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）均为活性氧（ROS）的清除剂。检测各组细胞的增殖率、凋亡率、ROS和碱性磷酸酶（ALP）水平以及PI3K/AKT/GSK3β信号通路的活性。结果Dex的半抑制浓度（IC50）约在300 μM。与对照组对比，Dex组细胞的细胞增殖率［（100.00±1.76）%比（51.47±5.62）%］和ALP活性［（100.00±0.83）%比（69.71±7.53）%］显著降低（均P＜0.05），细胞凋亡率［（3.71±1.16）%比（18.42±3.19）%］和ROS水平［（1.49±0.37）比（4.40±1.08）］显著增加（均P＜0.05）。与Dex组对比，Dex+AA组和Dex+NAC组细胞的细胞增殖率［（51.47±5.62）%比（89.32±6.74）%、（51.47±5.62）%比（94.58±5.01）%］和ALP活性［（69.71±7.53）%比（85.49±8.17%）、（69.71±7.53）%比（92.55±8.01）%］显著增加（均P＜0.05），细胞凋亡率［（18.42±3.19）%比（9.68±2.23）%、（18.42±3.19）%比（8.97±2.07）%］和ROS水平［（4.40±1.08）比（2.05±0.61）、（4.40±1.08）比（1.96±0.43）］均显著降低（均P＜0.05）。与对照组对比，Dex组细胞的p-PI3K［（0.98±0.17）比（0.26±0.08）］和p-AKT相对表达量［（0.56±0.10）比（0.19±0.06）］、p-PI3K/PI3K［（1.72±0.35）比（0.43±0.10）］和p-AKT/AKT比值［（0.66±0.19）比（0.21±0.08）］均显著降低（均P＜0.05），p-GSK3β相对表达量［（0.12±0.04）比（0.49±0.09）］和p-GSK3β/GSK3β比值［（0.67±0.15）比（1.32±0.24）］均显著增加（均P＜0.05）。与Dex组对比，Dex+AA组和Dex+NAC组细胞的p-PI3K［（0.26±0.08）比（0.76±0.12）、（0.26±0.08）比（0.80±0.12）］和p-AKT相对表达量［（0.19±0.06）比（0.38±0.11）、（0.19±0.06）比（0.42±0.08）］、p-PI3K/PI3K［（0.43±0.10）比（1.21±0.27）、（0.43±0.10）比（1.35±0.21）］和p-AKT/AKT比值［（0.21±0.08）比（0.45±0.04）、（0.21±0.08）比（0.45±0.07）］均显著增加（均P＜0.05），p-GSK3β相对表达量［（0.49±0.09）比（0.26±0.05）、（0.49±0.09）比（0.22±0.07）］和p-GSK3β/GSK3β比值［（1.32±0.24）比（0.83±0.19）、（1.32±0.24）比（0.73±0.16）］均显著降低（均P＜0.05）。结论Dex可通过ROS-PI3K/AKT/GSK3β信号通路诱导成骨细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法健康雄性SD大鼠40只，按照随机数表法随机分为5组，每组8只，假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后，用TTC染色法测心肌梗死面积；用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量；末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡；Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果与Sham组比较，I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多，p-Akt表达和Bax表达上调，Bcl-2表达下调（P<0.05）；与I/R组比较，I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少，心肌p-Akt及Bcl-2表达上调，Bax表达下调（P<0.05）；与I/R+H组比较，I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多，p-Akt表达和Bcl-2表达下调，Bax表达上调（P<0.05）。结论氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡，其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

简介：摘要目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对骨肉瘤细胞顺铂耐药性的影响及其机制，为骨肉瘤的靶向治疗提供新的思路。方法体外培养MG-63细胞，予2 μg/mL顺铂重复给药建立MG-63耐药细胞株，向MG-63耐药细胞株中转染miRNA-22高表达质粒建立miRNA-22高表达的MG-63耐药细胞株。以MG-63细胞为对照组，MG-63耐药细胞为耐药组，用2 μg/mL顺铂处理后的MG-63耐药细胞和转染miRNA-22的MG-63耐药细胞分别为耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组。采用噻唑兰(MTT)法检测细胞增殖能力。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内PI3K、AKT以及mTOR mRNA的表达。采用Western blot检测细胞内PI3K、AKT以及mTOR蛋白的表达。结果(1)MTT法检测结果显示，对照组、耐药组、耐药DDP组和耐药miRNA-22＋DDP组的吸光度分别为1.097±0.039、1.157±0.065、0.870±0.014和0.737±0.029，差异有统计学意义(F＝67.731，P<0.01)：与对照组比较，耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组吸光度均明显下降，差异均有统计学意义(P值均<0.01)；耐药组、耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组3组间比较，吸光度呈下降趋势，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(2)荧光定量RT-PCR结果显示，与对照组比较，耐药组、耐药DDP组PI3K、AKT的相对表达量均增多，尤其以耐药组增多明显(P值均<0.01)，耐药miRNA-22＋DDP组与对照组差异均无统计学意义(P值均>0.01)；而mTOR相对表达量耐药组增高，耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组均降低，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组PI3K、AKT、mTOR的相对表达量均低于耐药组，差异均有统计学意义(P值均<0.01)；而耐药miRNA-22＋DDP组仅PI3K、mTOR的相对表达量低于耐药DDP组，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(3)Western blot检测结果显示，与对照组比较，耐药组PI3K、AKT、mTOR蛋白的相对表达量均明显增加，耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组PI3K、AKT蛋白的相对表达量均明显降低，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。耐药组、耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组3组间两两比较，耐药DDP组、耐药miRNA-22＋DDP组PI3K、AKT、mTOR蛋白的相对表达量均明显低于耐药组，耐药miRNA-22＋DDP组PI3K、AKT蛋白的相对表达量均明显低于耐药DDP组，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论PI3K-AKT-mTOR通路参与了骨肉瘤细胞对顺铂耐药性的产生，miRNA-22通过下调PI3K-AKT-mTOR通路中PI3K、AKT以及mTOR的表达降低骨肉瘤细胞对顺铂的耐药性。

简介：摘要目的探讨白藜芦醇联合γ射线对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响，并对其可能机制进行初步探究。方法CCK-8法检测不同浓度白藜芦醇溶液±γ射线照射后细胞群体增殖；划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡；蛋白印迹法检测PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果与对照组相比，白藜芦醇组±γ射线照射均能抑制细胞增殖、迁移、侵袭能力，并促进细胞凋亡，且联合的效果更加明显。与对照组相比，白藜芦醇和γ射线均能降低细胞中Bcl-2、PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达，使Bax蛋白表达上调，但Akt、mTOR蛋白未发生明显改变。结论白藜芦醇联合γ射线能够明显抑制Hela细胞增殖、迁移、侵袭能力并促进细胞凋亡，其机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制作用及下游相关蛋白的表达相关。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA RP11-159K7.2在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌（sinonasal squamous cell carcinoma，SNSCC）进展中的作用与机制。方法选取2009—2014年哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科SNSCC手术患者的癌组织和癌旁非癌组织标本65例，通过RNAscope原位杂交技术检测RP11-159K7.2在SNSCC组织及癌旁组织中的表达，观察其与预后的关系。运用规律成簇间隔短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CRISPR/Cas9）方法敲减RPMI-2650细胞（SNSCC细胞系）RP11-159K7.2的表达。体外实验分别用细胞增殖试剂盒8（CCK-8）增殖实验、划痕实验和Transwell实验等观察下调RP11-159K7.2后，SNSCC细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的变化。体内实验观察RP11-159K7.2下调后，SNSCC裸鼠移植瘤生长的改变。机制研究运用蛋白质芯片方法，筛选RP11-159K7.2可能结合的蛋白质，运用蛋白免疫印迹法（WB）和RNA免疫共沉淀技术鉴定RP11-159K7.2结合的蛋白质。采用SPSS 17.0软件进行统计学处理。结果RP11-159K7.2在SNSCC组织中的表达显著高于癌旁组织，与T分级、淋巴结转移及分化程度密切相关（χ²值分别为4.697、4.235和10.753，P值均<0.05）。RP11-159K7.2高表达患者的5年生存率明显低于RP11-159K7.2低表达患者（P=0.013 7）。RP11-159K7.2下调后，SNSCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降，SNSCC移植瘤生长受到明显抑制。RP11-159K7.2可能结合的蛋白质有31种，其可直接与核因子-κB（NF-κB）蛋白结合，对SNSCC细胞增殖和侵袭的调控依赖NF-κB。结论RP11-159K7.2在SNSCC中表达增高，有望成为SNSCC预后评估的潜在分子标志物。其在SNSCC中的作用机制与结合和调控NF-κB蛋白有关。

简介：摘要目的探究着丝粒蛋白-A（CENP-A）对卵巢癌（OC）细胞侵袭、迁移的影响，并探讨相关机制。方法体外培养OC细胞系A2780细胞株，分为NG组（空白对照组）、pcDNA组（阴性转染组，转染pcDNA载体质粒）、pcDNA-CENP-A组（过表达CENP-A组，转染pcDNA-CENP-A载体质粒）、通路抑制剂组（转染pcDNA-CENP-A+PI3K通路抑制剂LY294002）。采用CCK-8法检测细胞增殖情况，划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力；免疫印迹法检测CENP-A蛋白、迁移、侵袭相关蛋白E-钙粘附蛋白（E-cadherin）、N-钙粘附蛋白（N-cadherin）及磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/核转录因子kappa B（PI3K/AKT/NF-κB）通路相关蛋白表达情况。结果A2780细胞成功转染。24 h后，随着培养时间延长，与NG组[（0.50±0.07）、（0.72±0.11）、（0.99±0.14）]、pcDNA组[（0.55±0.08）、（0.78±0.12）、（1.02±0.15）]比较，pcDNA-CENP-A组[（0.78±0.12）、（1.03±0.15）、（1.67±0.25）]、通路抑制剂组[（0.63±0.09）、（0.87±0.13）、（1.39±0.20）]A2780细胞存活力显著增加（P<0.05），与pcDNA-CENP-A组比较，通路抑制剂组A2780细胞存活力显著降低（P<0.05），呈时间依赖性。与NG组[（15.83±1.46）%、（105.32±15.78）个]、pcDNA组[（16.79±1.46）%、（108.98±16.35）个]比较，pcDNA-CENP-A组、通路抑制剂组A2780细胞迁移率[（37.96±5.80）%、（25.15±2.19）%]、侵袭数[（327.87±49.18）个、206.53±30.97）个]、CENP-A、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB、白细胞介素（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达显著增加或升高（P<0.05），E-cadherin蛋白表达显著降低（P<0.05）；与pcDNA-CENP-A组比较，通路抑制剂组A2780细胞迁移率、侵袭数、CENP-A、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB、IL-1β、TNF-α蛋白表达显著减少或或降低（P<0.05），E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论过表达CENP-A表达可促进卵巢癌细胞增殖、侵袭及迁移，可能是通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路实现的。

简介：摘要目的探讨组蛋白H3.3的36位赖氨酸至甲硫氨酸（K36M）突变蛋白表达在软骨母细胞瘤中的诊断及鉴别诊断价值。方法收集2016年1月至2019年12月就诊于北京积水潭医院的软骨母细胞瘤及其他骨肿瘤病例，光镜观察并结合临床影像学明确诊断。EnVision法免疫组织化学检测H3.3 K36M突变蛋白的表达。结果骨肿瘤共计196例：软骨母细胞瘤68例（包括6例复发病例），骨巨细胞瘤59例，内生软骨瘤9例，透明细胞软骨肉瘤3例，软骨肉瘤Ⅰ级9例，软骨肉瘤Ⅱ级9例，软骨肉瘤Ⅲ级2例，去分化软骨肉瘤11例，软骨黏液样纤维瘤6例，动脉瘤样骨囊肿9例，非骨化性纤维瘤9例，成软骨为主型骨肉瘤2例。免疫组织化学显示95.6%（65/68）的软骨母细胞瘤呈H3.3 K36M突变蛋白阳性表达，其余128例皆为阴性。诊断的灵敏度为95.6%，特异度为100.0%。结论免疫组织化学H3.3 K36M突变蛋白检测在软骨母细胞瘤中显示较高的特异度和灵敏度，在临床实践中具有较高的诊断及鉴别诊断价值。

简介：摘要：近年来，我国上市公司为了为追求迅速增长、获得不当利益而出现财务问题的例子并不少见。财务问题的出现不仅仅代表改企业的财务状况不佳，往往还伴随着内部控制等方面的诸多问题。本文以K药业案例为切入点，重点分析了K药业财务问题的原因并针对其根本原因提供防范对策，以期为相关企业带来一定的启示。

简介：摘要目的探讨藤梨根提取物通过血管内皮生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对乳腺癌细胞增殖、凋亡的调控作用。方法体外培养人乳腺癌细胞系MCF7，分为对照组及低、中、高剂量组，低、中、高剂量组分别加入DMEM培养液稀释的终浓度为1、10、100 μg/ml的藤梨根提取物，对照组加入等剂量DMEM培养液，培养48 h，比较各组增殖率[采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测]、凋亡率(采用流式细胞术检测)及PI3K、VEGF、磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白表达量(采用Western blot法检测)。结果与对照组比较，低剂量组MCF7细胞增殖率及PI3K、VEGF、p-AKT蛋白表达量显著减少(P<0.05)，低剂量组MCF7细胞凋亡率显著增加(P<0.05)；与低剂量组比较，中剂量组MCF7细胞增殖率及PI3K、VEGF、p-AKT蛋白表达量显著减少(P<0.05)，中剂量组MCF7细胞凋亡率显著增加(P<0.05)；与中剂量组比较，高剂量组MCF7细胞增殖率及PI3K、VEGF、p-AKT蛋白表达量显著减少(P<0.05)，高剂量组MCF7细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论藤梨根提取物能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡，其机制可能与藤梨根提取物抑制VEGF/PI3K/AKT信号通路有关。

简介：摘要目的观察氟化钠（NaF）对人成骨肉瘤Saos-2细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号表达及凋亡的影响。方法采用成组设计，按NaF剂量将Saos-2细胞分为0（对照）、5、10、20、40 mg/L染氟组（n = 3）。体外培养24、48 h后收集细胞，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测PI3K、Akt和线粒体凋亡途径相关分子Forkhead转录因子（FoxO）1的蛋白表达，采用流式细胞仪检测Saos-2细胞的凋亡水平。结果体外培养24、48 h时，各组Saos-2细胞PI3K、Akt蛋白表达比较，差异均无统计学意义（P均> 0.05）。24 h时，5、10、20、40 mg/L染氟组磷酸化PI3K（p-PI3K）蛋白表达（0.40 ± 0.06、0.45 ± 0.02、0.37 ± 0.06、0.32 ± 0.06）均高于对照组（0.28 ± 0.04，P均< 0.05）；48 h时，5、10 mg/L染氟组p-PI3K蛋白表达（0.46 ± 0.06、0.58 ± 0.03）均高于对照组（0.29 ± 0.04，P均< 0.05），而40 mg/L染氟组（0.21 ± 0.03）低于对照组（P < 0.05）。24 h时，5、10、20 mg/L染氟组磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达（0.27 ± 0.01、0.30 ± 0.03、0.27 ± 0.03）均高于对照组（0.20 ± 0.02，P均< 0.05）；48 h时，5、10 mg/L染氟组p-Akt蛋白表达（0.42 ± 0.04、0.60 ± 0.02）均高于对照组（0.27 ± 0.01，P均< 0.05），而40 mg/L组（0.18 ± 0.02）低于对照组（P < 0.05）。24 h时，10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达（0.38 ± 0.07、0.41 ± 0.06、0.47 ± 0.08）均高于对照组（0.34 ± 0.04，P均< 0.05）；48 h时，5、10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达（0.36 ± 0.08、0.37 ± 0.10、0.54 ± 0.04、0.73 ± 0.04）均高于对照组（0.28 ± 0.04，P均< 0.05）。24、48 h时，对照组和5、10、20、40 mg/L染氟组细胞凋亡率分别为（2.867 ± 0.583）%、（3.647 ± 0.035）%、（3.773 ± 0.095）%、（5.440 ± 0.325）%、（7.203 ± 0.476）%，（3.707 ± 0.286）%、（4.023 ± 0.241）%、（4.970 ± 0.368）%、（12.473 ± 0.949）%、（19.387 ± 1.892）%。24 h时，40 mg/L染氟组凋亡水平高于对照组（P < 0.05）；48 h时，20、40 mg/L染氟组凋亡水平均高于对照组（P均< 0.05）。结论氟可以直接激活成骨细胞内的PI3K/Akt信号通路，进而产生抗凋亡作用。

简介：摘要目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）/核因子κB（NF-κB）信号通路在人肾小管上皮细胞（human kideny-2，HK-2）-尿酸性肾病细胞模型中表达水平变化及其作用机制。方法体外培养HK-2细胞，随机分为对照组及实验组。实验组经高尿酸（720 μmol/L）浸泡48 h建立体外尿酸性肾病细胞模型，分为高尿酸处理组、过表达蛋白激酶活化受体2（protease activated receptor 2，PAR2）组和敲减PAR2组。实时定量PCR法检测HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA表达水平，Western印迹法检测HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB蛋白表达水平，酶联免疫吸附法检测上清液肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-1β前体（pro-interleukin-1β，pro-IL-1β）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）表达水平。结果（1）与对照组相比，高尿酸处理组HK-2细胞中PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达增加（均P<0.05），上清液中TNF-α、MCP-1、IL-6、pro-IL-1β、IL-1β、TGF-β1增加（均P<0.01）。（2）与高尿酸处理组相比，过表达PAR2组HK-2细胞中PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达明显增加（均P<0.05），上清液中TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-1β、TGF-β1明显增加（均P<0.05）。（3）与高尿酸处理组相比，敲减PAR2组HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达明显下降（均P<0.05），上清液中IL-6、pro-IL-1β、IL-1β、TGF-β1明显减少（均P<0.05）。结论尿酸致肾脏HK-2细胞损伤过程中，尿酸通过激活PAR2显著上调PI3K/AKT/NF-κB信号通路表达，导致HK-2细胞炎症损伤明显加重。敲减PAR2抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路，可有效减轻HK-2细胞炎症损伤。

简介：摘要目的探讨藤梨根提取物通过血管内皮生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对乳腺癌细胞增殖、凋亡的调控作用。方法体外培养人乳腺癌细胞系MCF7，分为对照组及低、中、高剂量组，低、中、高剂量组分别加入DMEM培养液稀释的终浓度为1、10、100 μg/ml的藤梨根提取物，对照组加入等剂量DMEM培养液，培养48 h，比较各组增殖率[采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测]、凋亡率(采用流式细胞术检测)及PI3K、VEGF、磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白表达量(采用Western blot法检测)。结果与对照组比较，低剂量组MCF7细胞增殖率及PI3K、VEGF、p-AKT蛋白表达量显著减少(P<0.05)，低剂量组MCF7细胞凋亡率显著增加(P<0.05)；与低剂量组比较，中剂量组MCF7细胞增殖率及PI3K、VEGF、p-AKT蛋白表达量显著减少(P<0.05)，中剂量组MCF7细胞凋亡率显著增加(P<0.05)；与中剂量组比较，高剂量组MCF7细胞增殖率及PI3K、VEGF、p-AKT蛋白表达量显著减少(P<0.05)，高剂量组MCF7细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论藤梨根提取物能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡，其机制可能与藤梨根提取物抑制VEGF/PI3K/AKT信号通路有关。

简介：

简介：摘要：本文复盘了K药业财务危机的始末,并分析了其财务危机的形成原因及形成过程，并据此提出相应的对策建议。