简介:目的研究注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(2:1)的细菌内毒素检查方法.方法对照二部附录ⅪⅩF试验方法,采用不同厂家、不同批号的鲎试剂,通过干扰实验来确定注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(2:1)的有效稀释浓度.结果注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(2:1)稀释成1.25mg/ml供试品液后,用0.125EU/ml的鲎试剂,对细菌内毒素检查无干扰.结论注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(2:1)可以通过细菌内毒素检查法来控制其细菌内毒素含量.
简介:摘要目的评价电针对内毒素血症小鼠肠损伤时线粒体融合和分裂的影响及血红素氧合酶(HO-1)在其中的作用。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠50只,8周龄,体重18~22 g,采用随机数字表法分为5组(n=10):对照组(C组)、内毒素血症组(E组)、内毒素血症+电针组(E+EA组)、内毒素血症+电针+氯化血红素组(E+EA+H组)和内毒素血症+电针+锌原卟啉Ⅸ组(E+EA+Znpp-Ⅸ组)。腹腔注射LPS 10 mg/kg建立小鼠内毒素血症模型。于注射LPS前,E+EA+H组腹腔注射HO-1诱导剂氯化血红素100 mg/kg,E+EA+Znpp-Ⅸ组腹腔注射HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ 10 mg/kg。于造模前4、3、2、1 d和30 min时,取合谷和足三里穴进行电刺激,刺激参数:疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流1 mA,刺激时间30 min,造模当天留针至实验结束。于造模后6 h处死小鼠,于回肠末端切取小肠组织,光镜下观察病理学结果,电镜下观察线粒体超微结构,测定ROS、ATP和二胺氧化酶(DAO)水平,采用Western blot法测定动力蛋白相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)和HO-1的表达水平。结果与C组比较,E组小肠组织ROS水平升高,ATP含量和DAO活性降低,HO-1和Drp1表达上调,Mfn1表达下调(P<0.05),小肠组织发生病理学损伤;与E组比较,E+EA组小肠组织ROS水平降低,ATP含量和DAO活性升高,HO-1和Mfn1表达上调,Drp1表达下调(P<0.05),小肠组织病理学损伤减轻;与E+EA组比较,E+EA+H组小肠组织ROS水平降低,ATP含量和DAO活性升高,HO-1和Mfn1表达上调,Drp1表达下调(P<0.05),小肠组织病理学损伤减轻;E+EA+Znpp-Ⅸ组小肠组织ROS水平升高,ATP含量和DAO活性降低,HO-1和Mfn1表达下调,Drp1表达上调(P<0.05),小肠组织病理学损伤加重。结论电针可通过促进线粒体融合、抑制线粒体分裂,减轻内毒素血症小鼠肠损伤,其机制与上调HO-1的表达有关。
简介:摘要目的探讨血清C反应蛋白(Creactiveprotein,CRP)与血浆内毒素(Endotoxin,ET)联合检测在经皮肾镜碎石术后并发尿脓毒血症早期诊断的意义。方法回顾性收集2016年1月-2018年10月收治经皮肾镜术后并发尿脓毒血症患者30例,作为脓毒症组。选择同期手术后无并发脓毒血症45例为对照组选取45例,术前1天、术后检测CRP和ET水平,分析其与经皮肾镜碎石术后尿脓毒血症发病的关系,同时探讨其早期诊断价值。结果术后脓毒血症组CRP和内毒素(ET)水平分别为(11.99±4.58)mg/L、(83.89±67.44)pg/ml,对照组CRP和内毒素(ET)水平分别为(5.26±2.52)mg/L、(11.44±2.30)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.001)。并且CRP的ROC曲线下面积明显大于ET。结论CRP对于早期诊断经皮肾镜碎石术后并发尿脓毒血症优于内毒素检测,二者联合检测效果更佳。
简介:摘要目的评价右美托咪定对小鼠内毒素性急性肾损伤时细胞焦亡的影响及其与miRNA-223-3p的关系。方法清洁级健康雄性ICR小鼠32只,8~12周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+右美托咪定组(LD组)和LPS+右美托咪定+阿替美唑组(LDT组)。腹腔注射LPS 400 μg/kg,8 h后腹腔注射LPS 10 mg/kg制备小鼠内毒素性急性肾损伤模型。LD组造模后30 min时腹腔注射右美托咪定40 μg/kg,每2 h 1次,共3次;LDT组于造模结束即刻腹腔注射阿替美唑750 μg/kg,30 min后腹腔注射右美托咪定40 μg/kg,每2 h 1次,共3次;C组腹腔注射等容量生理盐水。造模后24 h时经心脏取血,检测血清Cr和BUN浓度。处死小鼠取左侧肾脏组织,HE染色后光镜下观察病理学结果,采用Western blot法及qRT-PCR法检测caspase-1 p20、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、ASC及其mRNA表达水平,采用ELISA法测定IL-1β和IL-18含量,采用TUNEL法确定肾皮质细胞焦亡率。结果与C组比较,L组血清Cr及BUN浓度升高,肾组织NLRP3、caspase-1 p20、ASC及其mRNA表达上调,IL-1β和IL-18含量升高,肾皮质细胞焦亡率升高(P<0.05),miRNA-223-3p表达差异无统计学意义(P>0.05),肾脏病理学损伤加重。与L组比较,LD组血清Cr及BUN浓度降低,肾组织NLRP3、caspase-1 p20、ASC及其mRNA表达下调,IL-1β和IL-18含量降低,肾皮质细胞焦亡率降低,miRNA-223-3p表达上调(P<0.05),肾脏病理学损伤减轻。与LD组比较,LDT组血清Cr及BUN浓度升高,肾组织IL-1β和IL-18含量升高,肾组织NLRP3、caspase-1 p20、ASC及其mRNA表达上调,肾皮质细胞焦亡率升高,miRNA-223-3p表达下调(P<0.05),肾脏病理学损伤加重。结论右美托咪定减轻小鼠内毒素性急性肾损伤的机制可能与上调miRNA-223-3p表达,抑制细胞焦亡有关。
简介:摘要目的探究外周血可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)、内毒素、Toll样受体(TLR)在重症急性胰腺炎(SAP)合并腹腔感染患者中的变化,并明确其与病情的关系。方法回顾性分析上海市浦东新区人民医院2017年1月至2020年12月105例SAP患者的临床资料。其中,合并腹腔感染28例(感染组),有类似腹腔感染症状但未确诊腹腔感染77例(未感染组)。记录入院时急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHE Ⅱ)。患者出现疑似腹腔感染症状和体征时,采用酶联免疫吸附法检测血清sRAGE、内毒素、TLR4、TLR9水平。血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9水平与APACHE Ⅱ相关性采用Pearson分析;影响SAP患者发生腹腔感染的危险因素采用多因素Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9对SAP患者发生腹腔感染的诊断效能;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较采用log-rank检验。结果感染组血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9明显高于未感染组[(822.16 ± 104.51)ng/L比(728.09 ± 96.47) ng/L、(62.59 ± 20.11) ng/L比(41.62 ± 13.64) ng/L、(45.17 ± 8.54) μg/L比(37.34 ± 6.22) μg/L、(26.35 ± 6.73) μg/L比(20.02 ± 5.49) μg/L],差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,SAP患者血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9与APACHE Ⅱ呈正相关(r = 0.632、0.556、0.521、0.631,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,合并脏器功能损伤、休克、低氧血症及血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9是SAP患者发生腹腔感染的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9联合诊断SAP患者发生腹腔感染的曲线下面积最大,为0.910(95% CI 0.838~0.957,P<0.01),灵敏度为82.14%,特异度为87.01%。以ROC曲线分析的血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9截断值(分别为764.58 ng/L、58.01 ng/L、40.24 μg/L和22.61 μg/L)为界将28例SAP合并腹腔感染患者分为高水平患者(分别为21、14、23和22例)和低水平患者(分别为7、14、5和6例);Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9高水平患者28 d生存率明显低于低水平患者(61.90%比71.43%、50.00%比78.57%、60.87%比80.00%和59.09%比83.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9在SAP合并腹腔感染中联合诊断价值较高,且均与病情程度相关,对生存状况有明显影响。
简介:摘要目的探究外周血可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)、内毒素、Toll样受体(TLR)在重症急性胰腺炎(SAP)合并腹腔感染患者中的变化,并明确其与病情的关系。方法回顾性分析上海市浦东新区人民医院2017年1月至2020年12月105例SAP患者的临床资料。其中,合并腹腔感染28例(感染组),有类似腹腔感染症状但未确诊腹腔感染77例(未感染组)。记录入院时急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHE Ⅱ)。患者出现疑似腹腔感染症状和体征时,采用酶联免疫吸附法检测血清sRAGE、内毒素、TLR4、TLR9水平。血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9水平与APACHE Ⅱ相关性采用Pearson分析;影响SAP患者发生腹腔感染的危险因素采用多因素Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9对SAP患者发生腹腔感染的诊断效能;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较采用log-rank检验。结果感染组血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9明显高于未感染组[(822.16 ± 104.51)ng/L比(728.09 ± 96.47) ng/L、(62.59 ± 20.11) ng/L比(41.62 ± 13.64) ng/L、(45.17 ± 8.54) μg/L比(37.34 ± 6.22) μg/L、(26.35 ± 6.73) μg/L比(20.02 ± 5.49) μg/L],差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,SAP患者血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9与APACHE Ⅱ呈正相关(r = 0.632、0.556、0.521、0.631,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,合并脏器功能损伤、休克、低氧血症及血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9是SAP患者发生腹腔感染的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9联合诊断SAP患者发生腹腔感染的曲线下面积最大,为0.910(95% CI 0.838~0.957,P<0.01),灵敏度为82.14%,特异度为87.01%。以ROC曲线分析的血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9截断值(分别为764.58 ng/L、58.01 ng/L、40.24 μg/L和22.61 μg/L)为界将28例SAP合并腹腔感染患者分为高水平患者(分别为21、14、23和22例)和低水平患者(分别为7、14、5和6例);Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9高水平患者28 d生存率明显低于低水平患者(61.90%比71.43%、50.00%比78.57%、60.87%比80.00%和59.09%比83.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9在SAP合并腹腔感染中联合诊断价值较高,且均与病情程度相关,对生存状况有明显影响。
简介:目的探讨儿童对14种食物不耐受情况的分布及与各系统疾病间的关系。方法收集从2009年1月至2012年10月进行食物不耐受检测的2434例儿童血清标本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中14种食物过敏原特异性IgG抗体。分析儿童对不同食物类别耐受程度的分布及其与年龄、性别以及系统疾病之间的关系。结果在14种食物中,牛奶、鸡蛋不耐受阳性率较高,分别为74.16%和66.47%;鸡肉、猪肉不耐受阳性率较低,分别为0.29%和0.21%。男女患儿间食物不耐受总项次阳性率分别为12.579%和12.470%。婴幼儿期不耐受率最高为牛奶,学龄前期和学龄期为牛奶和鸡蛋,青春期为鸡蛋。儿童单系统不耐受分布中,患有发育异常或免疫系统疾病的患儿食物不耐受总项次阳性率最高;同时涉及两个系统疾病患儿的食物不耐受总项次阳性率高达13.393%;且各类系统儿童对牛奶和鸡蛋的不耐受率较其他食物高。结论儿童食物不耐受差异受多种因素影响,如食物种类、年龄等;性别因素影响比较小。食物不耐受与多个系统疾病的发生有一定的联系,其对儿童生长发育至关重要,应该通过健康管理对儿童食物不耐受情况进行普查和研究。
简介:摘要目的探讨沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)基因的骨髓间充质干细胞(BMMSC)对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺细胞外基质(ECM)和肺纤维化的影响。方法采用实验研究方法。取4只1周龄雄性SD大鼠股骨和胫骨骨髓腔细胞并经流式细胞术鉴定为BMMSC。取第3代BMMSC用于后续实验。取细胞,分为用含NMⅡ基因的小干扰RNA序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro质粒转染的沉默NMⅡ组,转染空载质粒的空载组及未进行任何处理的空白对照组,采用蛋白质印迹法检测干预后72 h的NMⅡ的蛋白表达(样本数为3)。取细胞,于倒置相差显微镜下观察形态;另取细胞,用氯甲基苯甲酰胺(CM-DiⅠ)标记,于倒置荧光显微镜下观察体外细胞标记情况。取20只4周龄雄性SD大鼠,按随机数字表法分为空白对照组、单纯ALI组、ALI+BMMSC组及ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组,每组5只大鼠。对空白对照组不进行任何处理,其余3组大鼠均给予LPS诱导ALI。造模后即刻,单纯ALI组大鼠经尾静脉注射1 mL生理盐水,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠分别经尾静脉注入1 mL 1×107个/mL CM-DiⅠ标记的BMMSC、NMⅡ基因沉默的BMMSC,空白对照组大鼠于相同时间点通过尾静脉注射1 mL生理盐水。干预后24 h,取肺组织于倒置荧光显微镜下观察BMMSC肺内归巢情况。干预后24 h、1周、2周,取肺组织行苏木精-伊红染色观察肺部炎症情况,行Masson染色观察肺纤维化程度并采用改良Ashcroft评分法对干预后2周肺纤维化程度进行评分(样本数为5)。采用免疫组织化学法检测干预后2周α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的含量(样本数均为3),采用酶联免疫吸附测定法检测干预后24 h超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、髓过氧化物酶(MPO)活性(样本数均为3),采用免疫荧光染色法检测干预后1周CD11b和含表皮生长因子样模块黏蛋白样激素受体1(EMR1)蛋白表达(样本数均为3)。对数据行单因素方差分析、Bonferroni法及Kruskal-Wallis H检验。结果干预后72 h,沉默NMⅡ组细胞NMⅡ蛋白表达水平显著低于空白对照组和空载组(P值均<0.01)。BMMSC呈长梭形,簇状生长形如旋涡;CM-DiⅠ体外成功标记BMMSC。干预后24 h,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺内细胞归巢现象较ALI+BMMSC组更明显,而空白对照组和单纯ALI组大鼠肺内未见CM-DiⅠ标记的细胞。空白对照组大鼠干预后各时间点肺组织中均未见明显炎症细胞浸润,ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠干预后24 h肺组织炎症细胞浸润较单纯ALI组明显减少,且2组大鼠干预后1、2周肺泡壁变薄,局部肺组织有少量淤血。干预后1、2周,单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较空白对照组明显加重,但ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较单纯ALI组显著改善。干预后2周,单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分分别为(2.36±0.22)、(1.62±0.16)、(1.06±0.26)分,均明显高于空白对照组的(0.30±0.21)分(P<0.01),ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分均明显低于单纯ALI组(P<0.01),ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分明显低于ALI+BMMSC组(P<0.01)。干预后2周,与单纯ALI组比较,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织α-SMA含量均显著下降(P<0.05或P<0.01)。4组大鼠肺组织MMP-2含量均相近(P>0.05)。与空白对照组比较,单纯ALI组大鼠肺组织MMP-9含量显著升高(P<0.01);与单纯ALI组比较,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MMP-9含量均显著降低(P<0.01)。干预后24 h,与空白对照组比较,单纯ALI组、ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛、SOD、MPO活性均显著升高(P<0.01);与单纯ALI组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛活性显著升高(P<0.05),ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织SOD活性均显著升高(P<0.01);与ALI+BMMSC组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织SOD活性显著降低(P<0.01)。与单纯ALI组比较,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MPO活性均显著降低(P<0.01);与ALI+BMMSC组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MPO活性显著降低(P<0.01)。干预后1周,与其他3组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织CD11b蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01);4组大鼠肺组织EMR1蛋白表达均相近(P>0.05)。结论移植沉默NMⅡ基因的BMMSC能更明显改善LPS所致ALI大鼠肺组织ECM成分的活性,重塑其完整性,增强其抗氧化能力,减轻肺损伤和肺纤维化。