简介:背景:临床上治疗慢性静脉功能不全的主要方法是静脉瓣膜修复及带瓣静脉段移植,但这些方法创伤较大,且带瓣静脉来源有限。组织工程学和再生医学在修复病变血管方面取得的进步,而以自体来源的内皮细胞为种子细胞的组织工程带瓣静脉也见于了报道,但存在排出反应。目的:构建一个有可自我更新、修复、类似天然瓣膜结构并具有功能的带瓣静脉。方法:麻醉取Beagle犬的骨髓获取骨髓间充质干细胞,采用密度梯度离心和贴壁法获取骨髓间充质干细胞,并进行细胞的传代、冻存复苏、流式细胞仪检测和定向诱导分化。采用热致相分离技术,以聚(乳酸-乙醇酸)共聚物为基材,利用自制带瓣静脉模具制备三维组织工程带瓣静脉支架,制备组织工程带瓣静脉支架,并研究其形态结构。将骨髓间充质干细胞种植在支架上构建可降解的带瓣静脉,在体外培养2周。结果与结论:扫描电镜观察显示支架孔隙率高。培养的细胞符合骨髓间充质干细胞的形态特征,培养的细胞大部分表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45。细胞毒性实验显示支架无毒性,有利于细胞增殖和迁移。将细胞种植在支架表面上培养后可形成单层细胞层。体外实验验证细胞支架复合物的瓣膜有一定的开闭功能。利用三维聚(乳酸-乙醇酸)共聚物支架和骨髓间充质干细胞可成功构建组织工程带瓣静脉,组织工程带瓣静脉将有可能作为静脉瓣膜的的替代物治疗静脉瓣膜疾病。
简介:摘要目的构建在人肝癌HepG2细胞内可稳定表达血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)的逆转录病毒载体。方法采用PCR技术扩增VEGFR3片段,克隆至pBABE-puro质粒,构建重组质粒pBABE-puro-VEGFR3,经PCR、酶切、测序等验证后,体外与PIK包装质粒共同转染293FT细胞,获得携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒,感染人肝癌HepG2细胞,获得转入VEGFR3的HepG2细胞,通过QPCR和Westernblot进一步验证VEGFR3在HepG2细胞内的表达。结果①获得携带VEGFR3基因的重组质粒pBABE-puro-VEGFR3和人肝癌细胞株HepG2-pBABE-puro-VEGFR3;②QPCR和Westernblot分别检测到VEGFR3在靶细胞HepG2-pBABE-puro-VEGFR3中的稳定表达。结论成功构建了携带VEGFR3基因的人肝癌细胞重组逆转录病毒载体。
简介:摘要目的分析探讨情景剧用于构建外科学综合性实验的教学效果。方法选取同班的56名同学,分成两组,对照组采用传统的演示实验教学方式,对照组采用情景剧综合性实验教学方式,比较两组的教学效果。结果试验组同学在无菌准备,换药术,心脑肺复苏等合作性操作项目中的得分明显高于对照组同学,P<0.05,差异有统计学意义,试验组同学的总分明显高于对照组同学,P<0.05,差异有统计学意义。两组同学在认识手术器械和打结两个个人完成的项目考试中的得分没有差别,P>0.05。两组同学对所接受的教学方式的评价存在明显差异,在提高合作能力,提高沟通能力,有利于理论于实践结合等各个方面的满意程度均是试验组同学明显高于对照组同学,均有P<0.05,差异有统计学意义。结论将情景剧用于构建外科学综合性实验的教学效果良好,明显提高了学生的合作能力,沟通能力,有利于理论于实践结合,同时提高了学生的提高分析和解决问题的能力,是一种值得推广的教学方式。
简介:摘要目的构建并包装大鼠Six2基因过表达慢病毒及建立稳定过表达Six2基因的MES23.5细胞株。方法采用RT-PCR方法扩增Six2基因片段并将其连接于含有嘌呤霉素抗性的pLV-CS2.0-N-HA载体质粒,采用慢病毒包装四质粒系统(pRRE/pVSVG/pREV/pLV),用转染试剂Lipofectamine2000将四质粒按一定比例转染293T细胞;收集慢病毒上清并感染MES23.5细胞株,嘌呤霉素筛选稳定表达Six2的MES23.5细胞株,Westernblotting检测Six2蛋白的表达。结果限制性内切酶酶切结果表明在900bp处有一明显条带;Six2测序结果显示序列与genebank上的序列完全一致;嘌呤霉素筛选病毒感染的MES23.5细胞,传代筛选第5代后细胞几乎无死亡现象;Westernblotting结果显示,在分子量为23.4kDa处有相应条带。结论成功构建过表达Six2基因的慢病毒表达载体;得到了较高滴度的病毒悬液;建成稳定表达Six2基因的MES23.5细胞株,此研究为进一步探讨Six2基因的功能提供了良好的研究工具。
简介:目的在重症医学科(ICU)对外周静脉置入中心静脉导管(PICC)医护一体合作的工作模式进行了全面的开展,以提高PICC置管的成功率为主要目的,提高患者在置管方面的相关问题,从而降低在导管实施中血流感染(CRBSI)发生率。方法:选择在2012年8月到2014年8月入住ICU的置入PICC的患者229例,住院时间分为单数和双数,按照单数和双数的方法进行实验,采用对照组和买验组的方法进行实验,实验中主要检测的数据是血流感染的概率和静脉导管置管的成功率。结果实验组,采用该方法进行护理的患者,在血流感染率上明显偏低;而且实验组的置管成功率明显高于空白组,差在统计学上具有非常显著的意义(P〈0.01)。结论ICU构建PICC医护一体的工作模式,能够显著提高患者在置管方面的成功率,对于降低血流感染的概率具有显著的意义,保护了患者的外周静脉,减少了患者出现反复穿刺带来的痛苦,对于提高工作效率和改善医疗措施有非常关键的意义。
简介:目的构建携带融合基因SLC-Her-2/neu-P53-Fc(SLC-HP-Fc)的重组腺病毒AdEasy^TM-SLC-HP-Fc表达载体。方法提取SLC-HP基因及含Fc段基因的质粒构建携带目的基因的腺病毒穿梭载体pShuttle-CMVSLC-HP-Fc,经酶切线性化后转入含有pAdEasy-1质粒的E.coliBJ5183中进行同源重组,得到重组腺病毒真核表达载体AdEasy^TM-SLC-HP-Fc。线性化后的病毒表达载体通过脂质体Lipofectamine2000转染293细胞,通过包装扩增并经PCR鉴定后得到大量复制病毒并纯化保存。结果得到重组腺病毒AdEasy^TM-SLC-HP-Fc,成功转染293细胞出现细胞病变反应,经酶切及PCR法确定目的基因的表达。结论成功构建了SLC-Her-2/neu-P53-Fc融合基因重组腺病毒表达载体,并建立了重组腺病毒AdEasy^TM-SLC-HP-Fc种子病毒库和工作病毒库,为进一步研究该融合基因与肿瘤相关作用奠定了实验基础。
简介:目的:探索静电纺丝技术制备小口径聚乳酸-己内酯[P(LLA-CL)]/纤维蛋白原管形支架的方法,评价支架的生物相容性,探讨其作为血管组织工程材料的可行性。方法以P(LLA-CL)、纤维蛋白原为原料,制备小口径复合管形支架,观察支架的大体形态,并用扫描电镜观察三维结构;利用溶血试验、细胞毒性试验、皮下植入试验,评价支架材料的生物相容性。结果管形支架表面呈网格状三维结构,并有大小不等、互相交通的孔隙,孔径平均直径为(4.56±1.23)μm,表面纤维平均直径(318±56)nm;P(LLA-CL)/纤维蛋白原浸提液溶血率为2.87%±0.49%;细胞毒性实验示P(LLA-CL)/纤维蛋白原浸提液较阴性对照组无明显差异(P>0.05);皮下植入试验显示P(LLA-CL)/纤维蛋白原支架炎症反应轻微,材料逐渐降解。结论通过静电纺丝技术可以构建小口径P(LLA-CL)/纤维蛋白原管形支架,并具有良好的生物相容性,可作为组织工程血管的支架材料。