简介：目的在双色间期荧光原位杂交技术（FISH）中探讨采集宫颈脱落细胞样本及制片的最佳方法。方法采集在北京大学人民医院门诊就诊174例患者的宫颈脱落细胞,应用新鲜细胞直接涂片（60例）、生理盐水制片（31例）,TCT剩余液体直接制片（37例）、TCT盐水制片（30例）和TCT低渗制片（16例）五种取材制片方法;并应用双色间期FISH法,检测宫颈脱落细胞的TERC基因表达率,对比取材制片的最佳方法。结果在直接涂片法、盐水制片法、TCT制片法、TCT盐水制片法和TCT低渗法五种制片过程中,TERC基因的杂交成功率分别是55.0%、61.3%、37.8%、53.3%和81.3%,其中TCT低渗法杂交成功率与TCT制片组比较,有显著差异（P〈0.05）,与其他方法比较,无明显差异（P〉0.05）;5种制片方法的玻片背景清晰比例分别为38.3%、54.8%、35.1%、60%和75%,各组之间有明显差异（P〈0.05）;5组的无/少信号比例分别为18.3%、16.1%、37.8%、23.3%和18.8%,其中新鲜制片的直接涂片法和盐水制片法与TCT直接制片法比较,有明显差异（P〈0.05）,与其他方法比较无差异（P〉0.05）。结论在应用双色间期FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因时,以TCT低渗制片和新鲜细胞盐水制片操作方法简单快速,杂交成功率最高。

简介：目的通过改良差速贴壁法分离纯化绵羊MDSC,探索转化生长因子（TGF-β1）诱导绵羊肌源性干细胞分化为平滑肌的可能性。方法取成年绵羊股四头肌细胞采用改良差速贴壁法（modifiedpreplatetechnique）进行优化、分离、纯化获得绵羊级源性干细胞（MDSC）。利用流式细胞仪鉴定CD44、CD34、CD31、CD45、CD14的表达;westernbloting法检测干细胞标志物desmin表达情况鉴定MDSC。然后利用10ng/mlTGF-β1诱导MDSC向平滑肌方向分化;随后利用Westernbloting法检测诱导培养基处理的MDSC中平滑肌蛋白标志物a-SMA和calponin的表达;结果通过对改良差速贴壁法成功分离出成年绵羊的肌源性干细胞（MDSC）。流式细胞仪鉴定其干细胞标志物CD44、CD34阳性表达,同时CD31、CD45、CD14表达阴性。Westernblotting检测MDSC中Desmin呈阳性表达。利用10ng/mlTGF-β1成功诱导MDSC向平滑肌方向分化。诱导过程中,平滑肌特异蛋白a-SMA和calponin在诱导细胞中的表达逐步上升。结论本研究通过对差速贴壁法成功分离出成年雌性绵羊的肌源性干细胞（MDSC）。并首次利用TGF-β1诱导羊肌源性干细胞（MDSC）成功向平滑肌方向分化。

简介：目的构建并筛选出最有效的HPV16E6基因特异的小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)表达载体,观察其对宫颈癌细胞中HPV16E6基因表达的长期影响,探讨E6基因在宫颈癌发生过程中的分子作用机制,为临床HPV感染及宫颈癌治疗探索新方法.方法构建HairpinsiRNA质粒,稳定转染宫颈癌SiHa细胞,鉴定转染细胞中的质粒DNA,通过Real-TimeRT-PCR检测细胞中HPV16E6mRNA表达,采用Western-blot检测p53、p21等蛋白的变化.MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)检测SiHa细胞转染siRNA后细胞增殖曲线.结果HPV16E6AhairpinsiRNA表达载体转染人宫颈癌SiHa细胞,可以在细胞内长期表达siRNA,有效抑制细胞内HPV16E6基因的表达.E6AsiRNA能抑制细胞生长,作用持续达4个月以上.结论利用siRNA表达载体抑制整合在细胞中的外源HPVE6病毒癌基因可能是治疗HPV感染和宫颈癌的一种新的理想方法.

简介：目的研究探讨孕妇不同糖耐量状态下胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的关系。方法2014年10月至2016年10月在南京医科大学附属淮安市第一人民医院检查待产的妇女144例,根据糖耐量的试验结果分为妊娠期糖尿病（GDM）（A组共48例）、妊娠糖耐量减低（B组共48例）、结果正常（C组共48例）,比较各组胰岛素抵抗和分泌功能及妊娠结果。结果A、B、C三组HOMA-IR依次递减,A、B、C组之间差异有统计学意义（P〈0.05）;HOMA-β依次增加,A组与B、C组之间差异有统计学意义（P〈0.05）。A、B、C三组AIR3-10、AUC-I依次升高,组间分别比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;三组AUC-Ⅱ也依次升高,A组与B、C组之间差异有统计学意义（P〈0.05）;三组妊娠结果差异无统计学意义（P〉0.05）。结论与正常糖耐量孕妇相比,有妊娠糖尿病以及糖耐量减低孕妇不仅存在胰岛素抵抗,还有β细胞功能受损,且GDM孕妇胰岛素抵抗和β细胞功能受损情况更加严重。

简介：目的通过检测凋亡调控因子Fas、FasL在复发性流产(RSA)患者胎盘绒毛滋养细胞以及蜕膜中的表达情况,以探讨RSA的免疫发病机制.方法采用免疫组化SP方法以及流式细胞仪技术测定20例RSA患者、16例正常妊娠妇女胎盘绒毛FasL表达以及蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原表达情况.结果①RSA组患者胎盘绒毛滋养细胞FasL的表达以及蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原的表达情况均低于正常妊娠组,差异有显著性(P<0.05);②胎盘绒毛FasL的表达与蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原表达无相关性(P>0.05).结论RSA的发生可能与绒毛滋养细胞表面FasL表达减少,以及蜕膜中Fas(+)T淋巴细胞凋亡减少有关.

简介：

简介：目的探讨电刺激(electricalstimulation,ES)对机械力诱导的小鼠成纤维细胞L929氧化损伤的保护作用。方法将小鼠成纤维细胞L929分为正常对照组、电刺激组、加力模型组和加力后电刺激组。采用CCK-8法检测细胞活性,间接化学荧光法检测细胞活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)含量变化,JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位(mitochondrialmembranepotential,MMP)变化,分光光度法测定Caspase-3酶活性变化。结果加力组细胞活性明显下降,细胞内ROS增加,线粒体膜电位下降,Caspase-3酶活性增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。与加力组相比,加力后电刺激组细胞活性增强,线粒体膜电位水平上升,细胞内ROS含量减少,Caspase-3酶活性减弱,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论电刺激可通过维持细胞活性、减少细胞凋亡、减少细胞内ROS含量及Caspase-3酶活性,而对机械力诱导的细胞氧化损伤起到一定的保护作用。

简介：目的探讨微小RNA-206（miR-206）和连接蛋白（Cx）43在乳腺癌原发灶（PTs）及腋窝转移淋巴结（MLNs）中的表达变化关系。方法收集8例经病理学证实为浸润性导管癌的乳腺癌患者，取手术切除的癌旁正常腺体组织、乳腺癌PTs、配对的正常腋窝淋巴结（NLNs）及MLNs，采用实时定量PCR和Westernblotting等实验方法，检测正常腺体组织、乳腺癌PTs、配对的NLNs、MLNs中miR-206和Cx43的mRNA和蛋白表达。各组间均数比较行单因素方差分析和Posthoc检验（SNK／LSD）。结果与正常乳腺腺体组织比较，乳腺癌PTs和NLNs中miR-206的mRNA表达明显降低，配对的MLNs中miR-206的mRNA表达较PTs和NLNs进一步降低（P〈O．05）。PTs、NLNs和MLNs中Cx43mRNA表达较正常乳腺组织明显降低（P〈O．05），而PTs与MLNs中Cx43mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。PTs和NLNs中Cx43蛋白表达较正常乳腺组织明显降低（P〈O．05）；与PTs比较，NLNs中Cx43蛋白表达的差异无统计学意义（P〉O．05），而MLNs中Cx43蛋白的表达明显增加（P〈O．05）。结论miR-206和Cx43基因的相互作用可能与乳腺癌腋窝淋巴结转移有关。

简介：目的探讨前列腺干细胞抗原（PSCA）在不同性质乳腺组织中的表达和临床意义。方法回顾性分析2000年1月至2014年12月北京市顺义区医院病理科诊断的、乳腺外科手术切除的、术前未经任何治疗的普通型导管增生（UDH）、非典型导管增生（ADH）、DCIS和非特殊型浸润性癌（IC-NST）患者共175例临床资料，其中有38例因组织块过小或脱落未能获得准确数据而被剔除，故实际纳入分析的样本量为137例，包括20例UDH、20例ADH、30例DCIS和67例IC-NST。同时随机选取20例IC-NST癌旁正常乳腺组织作为对照。应用免疫组织化学染色法（LSAB法）检测标本中PSCA蛋白的表达情况，分析不同性质乳腺组织中PSCA蛋白表达的差异，以及IC-NST中PSCA蛋白表达与临床病理学特征的相关性。组间PSCA蛋白表达水平的比较采用）（2检验，IC-NST中PSCA蛋白表达与临床病理学特征的关系采用Spearman秩相关分析。结果PSCA蛋白在正常乳腺组织中不表达，在UDH、ADH、DCIS和IC—NST中高表达率分别为10．0％（2／20）、20．0％（4／20）、56．7％（17／30）和52．2％（35／67），其表达水平的差异具有统计学意义（χ^2=32．153，P〈0．001）。多组问两两比较结果显示，DCIS组和IC—NST组PSCA蛋白表达均高于正常乳腺组织（χ^2=17．172、17．480，P均〈0．005）和UDH组（χ^2=11．092、11．243，P均〈0．005）。Spearman秩相关分析显示，IC-NST组PSCA蛋白表达与淋巴结转移呈正相关（r=0．326，P=0．007）。结论PSCA蛋白可能参与了乳腺癌的发生、发展进程，可能是一个预测导管内增生性病变进展成乳腺癌的新指标。

简介：目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在宫颈癌组织中的表达及与宫颈癌临床病理特征的关系。方法收集首次诊断并行宫颈癌根治性切除术、术后病理确诊为宫颈癌、随访资料完整的宫颈鳞癌患者116例,并选择正常宫颈组织30例作为对照组,采用免疫组织化学技术检测HMGB1蛋白的表达,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。结果HMGB1在宫颈癌组织中呈高表达（χ-2=35.876,P〈0.05）;HMGBl的表达水平与患者年龄（χ-2=7.710,P〈0.05）、临床分期（χ-2=6.537,P〈0.05）、淋巴结转移（χ-2=7.827,P〈0.05）密切相关。结论HMGB1蛋白的异常表达可能成为宫颈癌临床病理学特征的一个重要指标。

简介：21-三体综合征作为一种最常见的染色体异常疾病,出生后缺乏有效的治疗方法,在产前作出诊断,减少和避免患儿出生是唯一途径。由于侵入性操作存在诸多弊端,人们倾向于寻找一种对母儿损伤较小的方法进行诊断。近几年来,通过母亲外周血的胎儿细胞进行诊断得到广泛关注,本文就利用母血中的胎儿细胞进行唐氏综合征的产前诊断作一综述。

简介：循环肿瘤细胞（CTCs）是恶性肿瘤患者外周血循环中的肿瘤细胞,来源于原发肿瘤或从转移性病灶脱落入血。外周血CTCs检测已成为一种高度可行且可重复的非侵入性新型诊断方法。CTCs的血源性传播在乳腺癌转移、进展中起到重要的作用。CTCs检测既能评估临床干预措施的疗效及患者的预后,又可作为分析患者肿瘤生物学特征的实时样本,及时发现肿瘤的生物学变化。临床医师可根据CTCs检测结果及时调整患者的治疗方案,从而实现个体化治疗。目前,在基因和分子生物学水平对CTCs的研究已广泛开展,有望为转移性乳腺癌的治疗提供新的靶点。本文主要介绍CTCs检测在转移性乳腺癌治疗及预后评估中的应用进展。

简介：目的通过检测胎儿生长受限（fetalgrowthrestriction,FGR）患者胎盘、外周血中单核细胞趋化蛋白-1（monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1）的表达水平,探讨MCP-1在FGR中的作用及可能机制。方法选择50例FGR患者为FGR组,正常晚期妊娠分娩孕妇50例为正常对照组,以酶联免疫吸附法检测两组孕妇胎盘、外周血MCP-1水平,并对胎盘组织切片进行病理形态学分析。结果FGR组胎盘光镜下见不同程度的绒毛发育不良,合体结节增多,绒毛炎,其发生率高于正常对照组[64.0%（32/50）vs12.0%（6/50）,P〈0.05],其中合并绒毛炎的发生率31%（10/32）;FGR组中胎盘病理异常组的胎盘MCP-1浓度高于正常对照组,差异有统计学意义[胎盘MCP-1：（136.97±10.24）vs（129.76±5.67）ng/mL,P〈0.05],其中合并绒毛炎胎盘中MCP-1浓度高于正常对照组[（149.76±8.67）vs（129.76±5.67）ng/mL,P〈0.05];而FGR组中胎盘病例异常组与正常对照组外周血MCP-1浓度比较差异无统计学意义[血清MCP-1（137.14±9.73）vs（140.16±10.34）ng/mL,P〉0.05]。结论MCP-1参与了FGR的发生,其作用机制可能通过过度炎症反应,导致胎盘灌注不足。

简介：目的研究顺铂（cisplatin，CDDP）对正常大鼠卵巢颗粒细胞的毒性作用及金雀黄素（genistein，GEN）保护作用。方法原代培养的颗粒细胞在含有不同浓度的CDDP及GEN和CDDP的培养基中孵育不同时间，用MTT法测定细胞的抑制率。结果CDDP浓度≥μg／ml可抑制颗粒细胞的生长，低浓度GEN的对这种抑制无明显影响，高浓度的GEN可减轻顺铂对颗粒细胞的毒性作用。结论CDDP对大鼠颗粒细胞具有明显的毒性作用，GEN对其引起的细胞毒性有保护作用，呈时间一剂量效应。

简介：目的了解雌激素受体β1（ERβ1）对雌激素敏感性指状蛋白（Efp）基因的调节作用,为进一步探讨ERβ对Efp基因的调控机制奠定基础.方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞中,再用Westernblot检测转染细胞中Efp蛋白表达的变化.MTT比色试验观察ERβ1真核表达质粒转染后MCF-7细胞增殖活性的变化.结果外源性ERβ1真核表达质粒组MCF-7细胞较未转染组MCF-7细胞Efp蛋白表达明显减弱.ERβ1基因转染后的MCF-7细胞的增殖活性降低.结论ERβ1基因的表达可以抑制人乳腺癌MCF-7细胞中Efp基因的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖能力,可能在乳腺肿瘤发生、发展机制中具有重要的作用.

简介：目的探讨纳米炭和亚甲蓝分别联合核素示踪法在腔镜乳腺癌前哨淋巴结活组织检查（简称活检）中的临床应用效果。方法选取2014年3月至2014年12月在第三军医大学附属西南医院诊断为乳腺癌的80例患者,随机分为两组,行腔镜下乳腺癌前哨淋巴结活检手术。其中采用纳米炭联合核素示踪前哨淋巴结组（简称纳米炭组）40例,采用亚甲蓝联合核素示踪前哨淋巴结组（简称亚甲蓝组）40例。分析比较两组术后前哨淋巴结检出率、阳性率及各种术后并发症。淋巴结数目用xˉ±s表示,行独立样本t检验；淋巴结阳性率及术后并发症行χ2检验或Fisher确切概率检验。结果纳米炭组前哨淋巴结检出率为100%（40/40）,亚甲蓝组前哨淋巴结检出率为97.5%（39/40）；两组平均检出前哨淋巴结数量分别为纳米炭组（3.4±1.5）枚和亚甲蓝组（3.2±1.5）枚；前哨淋巴结阳性率分别为纳米炭组32.5%（13/40）和亚甲蓝组25.6%（10/39,本组有1例未检测出SLN）。两组上述各指标之间比较差异均无统计学意义（SLN阳性率：χ2=0.450,P=0.502；平均SLN检出数：t=0.984,P=0.326）。纳米炭组非前哨淋巴结检出116枚,平均为（3.2±1.1）枚（2~5枚）,其中黑染57枚,染色率49.1%,亚甲蓝组非前哨淋巴结检出97枚,平均（2.8±1.1）枚（1~5枚）,蓝染26枚,染色率26.8%,两组非前哨淋巴结平均每例检出数目及染色率比较差异有统计学意义（t=2.632,P=0.009和χ2=11.079,P=0.001）。术后腋下积液发生情况两组之间比较差异无统计学意义（P=0.660）。结论纳米炭和亚甲蓝分别联合核素示踪法在腔镜乳腺癌前哨淋巴结活检术临床应用中均能到达良好的示踪效果,检出率高,手术创伤小,术后瘢痕小、并发症少,纳米炭有助于检出更多的非前哨淋巴结,可能更适合作为腋窝淋巴结清扫术的示踪剂。

简介：乳腺癌发病率呈逐年上升趋势，远处转移是导致患者不良预后的主要原因。外周血是肿瘤发生远处转移的必经途径。细胞角蛋白19（CK19）存在于上皮细胞中，间叶组织（如血液、骨髓、淋巴结等）不表达，因此CK19可作为乳腺癌患者癌细胞进入血液循环的标志。本研究采用流式细胞术检测外周血CK19阳性表达细胞，探讨其与乳腺癌临床分期、远处转移的相关性，并观察其临床意义。

简介：目的探讨肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)及其受体(c-met)在正常妊娠妇女及妊高征患者胎盘组织中的表达及对妊高征胎盘滋养细胞功能的影响.方法不同程度妊高征晚孕和正常妊娠晚孕孕妇共78例,采用免疫组织化学SP法检测胎盘组织HGF及c-met的表达强度.结果HGF主要表达于绒毛间质细胞胞浆.重度妊高征组胎盘绒毛间质细胞HGF表达强度显著低于正常晚孕组(H=7.395,P=0.007),而轻度及中度妊高征组与正常晚孕组比较,差异无显著性(H=0.869,P=0.351;H=0.017,P=0.817).c-met主要表达于滋养细胞.重度妊高征患者胎盘绒毛滋养细胞c-met表达强度显著低于正常晚孕组(H=4.577,P=0.032),而轻度及中度妊高征组与正常晚孕组比较,差异无显著性(H=0.178,P=0.673;H=0.824,P=0.364).HGF与c-met表达强度呈负相关(phi关联系数:7.809,P=0.005).结论HGF在胎盘中主要由绒毛间质细胞分泌,其受体c-met表达于滋养细胞表面,妊高征患者HGF分泌减少可能是引起其胎盘出现生理性血管重铸障碍继而发病的原因.

简介：目的：探讨白细胞联合超敏C-反应蛋白（hs-CRP）检测对新生儿败血症的临床诊断价值。方法：新生儿败血症组40例（早产儿10例,足月儿30例）和正常对照组40例分别进行白细胞和超敏C-反应蛋白检测。结果：新生儿败血症组的白细胞和超敏C-反应蛋白含量都明显高于正常对照组（P〈0.05）。以末梢血hs-CRP〉3mg/L为诊断值,hs-CRP在新生儿败血症诊断中总体敏感度为80.0%。其中足月儿和早产儿病例hs-CRP诊断敏感度比较有显著性差异,早产儿病例hs-CRP诊断敏感度明显比较高（P〈0.05）。结论：白细胞联合超敏C-反应蛋白检测对新生儿败血症的临床诊断价值高,敏感性强,值得推广应用。

简介：目的：探讨重组人类促红细胞生成索（rhu-Epo）防治早产儿贫血的疗效。方法：将60例早产贫血患儿随机分为治疗组30例和对照组30例。两组早产儿自出生第1w起口服维生素E、元素铁、叶酸片,第4w肌注维生素B12,共4w。治疗组出生第7d给予重组人类促红细胞生成素,隔日1次,3次/w,皮下注射,共4w。结果：治疗组网织红细胞数、血红蛋白、红细胞压积均显著高于对照组（P〈0.05）。结论：早期应用重组人类促红细胞生成素能有效防治早产儿贫血,且用药安全,无明显毒副作用。