简介:目的构建表达抗人红细胞血型A抗原50A杂交瘤细胞的单链抗体(SeFv)。方法应用重组噬菌体抗体技术,从50A杂交瘤细胞中分离、构建单链抗体基因,并将其克隆入噬粒pCANTAB5E中,转化E.coliXL-Blue,辅助噬菌体援救构建50A噬菌体单链抗体库;采用完整红细胞亲和富集法淘选阳性重组噬菌体,鉴定重组噬菌体并进行序列测定分析;免疫印迹试验检测重组单链抗体的特异性抗原活动。结果用M13KO7援救XL—Blue转化菌中的pCANTABSE重组噬菌体,得到滴度为4×10^9pfu/ml噬菌体单链抗体库;免疫印迹试验证实表达产物保留了亲本单抗对人红细胞血型A抗原的特异性亲和力。结论成功构建50AMcAb单链噬菌体抗体库,为进一步研制高特异性、高亲和力的基因工程原核血型检定抗体试剂奠定了基础。
简介:目的探讨重组人促红细胞生成素(rh-EPO)对慢性肾衰竭患者红细胞免疫、体液免疫、细胞免疫、红细胞膜流动性等方面的影响.方法69例慢性肾衰竭患者被随机分成3组,每组各23例.A组:采用透析和EPO治疗;B组:单纯采用EPO治疗;C组:为对照组,不采用透析,不进行EPO治疗.采用改良郭氏法测定红细胞免疫功能;用荧光偏振法测定红细胞膜脂分子流动性;用放射免疫法测定血清免疫球蛋白;用APAAP酶联免疫分析法测定T淋巴细胞亚群.同时观察3组患者治疗期间的感染发生率.结果主要免疫学检测指标在药物治疗前在A、B和C组间没有统计学差异.A、B两组患者治疗8周后,C3b、RFER、IgG、IgA、CD3亚群、CD4亚群及CD4/CD8比率显著升高,与对照组相比统计学差异有非常显著性,而RFIR%无明显变化,与对照组相比统计学差异无显著性.结论:rh-EPO可以提高CRF患者的免疫功能,降低患者的感染率.
简介:我们由人白血病细胞系J6-1发现了对自身有增殖刺激作用的膜相关生长调节因子(MAF-J6-1)。经SephadexG-100凝胶过滤及连续两次快速蛋白液相层析(FPLC,MonoQ)将其分离。理化性质研究的结果表明,它是一种对酸、碱和热相对稳定的蛋白,分子量约50kD。抗M-CSF单抗与MAF-J6-1的中和试验结果表明,MAF-J6-1属M-CSF类。
简介:目的观察基因重组人促红细胞生成素(r-HuEPO)对慢性肾衰竭(CRF)患者外周血T-淋巴细胞免疫功能和红细胞免疫功能的影响。方法应用流式细胞仪、双抗体夹心ELISA法和红细胞酵母菌花环实验及红细胞免疫调节因子一步法分别检测观察90例CRF患者经r—HuEPO治疗后,外周血T-淋巴细胞亚群(CD3、CD4和CD4/CD8)、可溶性白介素-2受体(sIL-2R)、红细胞Gb受体花环试验(RNC-C3bRR)、红细胞免疫复合物花环试验(RN2-ICR)、红细胞免疫粘附促进因子(RFAR)和红细胞免疫粘附抑制因子(RFIR)的变化。结果①90例CRF患者外周血清中sIL-2R水平、RBC-ICR和RFIR明显高于正常对照组(P〈0.01),CD3、CD4、CD4/CD8、RBC-C3bRR和RFAR明显低于正常对照组(P〈0.01);②r-HuEPO治疗后,RBC—C3bRR、RBC—ICR、RFAR和RFIR均有好转(P〈0.05),同时sIL-2R、CD3、CD4和CD4/CD8亦有所改善,但无统计学差异(P〉0.05)。结论CRF患者存在明显的细胞免疫功能和红细胞免疫功能低下,rHuEPO治疗对红细胞免疫功能有较好的提升和调节作用,对细胞免疫功能改善不明显。
简介:为了研究通过功能筛选得到的一个新的红细胞分化相关的全长cDNA(命名为EDRFI)的功能,选择K562细胞作为模型细胞来观察反义EDRFI表达对细胞功能的影响.通过快速构建,同时得到了正向和反向插入片段的真核表达载体pcDNA3-EDRFI-S(sense)及peDNA3-AS(antisense),并通过改进的LipofectAMINE细胞转染和G418筛选,得到了稳定表达的细胞株,进行基因组PCR鉴定,证明了转染的高效性.NorrhemB10t试验的结果表明,反义载体转染的K562细胞中,EDRF1在mRNA表达水平上受到下调,提示EDRF1反义DNA的表达可能抑制了EDRF1mRNA的正常转录.进一步,γ-珠蛋白和PKC-α的表达在反义构建质粒转染K562细胞中的表达均受到下调,这可能传递了红细胞分化的负反馈信号,从而抑制了珠蛋白的合成.
简介:摘要目的比较静脉应用蔗糖铁联合促红细胞生成素(EPO依倍成都地奥集团九泓制药生产2000iu/支)和口服维铁缓释片联合EPO治疗MHD患者肾性贫血的疗效与安全性。方法50例MHD伴肾性贫血患者随机分为静脉组和口服组,两组均给予EPO治疗,静脉组给予蔗糖铁100mg静脉滴注,口服组给予维铁缓释片(每片含硫酸亚铁525mg)口服,疗程均16周。观察并比较两组患者贫血治疗的效果、铁代谢指标的变化和不良反应发生情况。结果静脉组Hb、Hct、及TSAT,SF的指标明显高于口服组。结论静脉注射蔗糖铁可有效地纠正MHD的铁缺乏,提高EPO的疗效,不良反应发生率低,安全性好。
简介:为提高EB病毒(Epstein-Barrvirus)转染阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)异常细胞建立永生性细胞株的成功率及加快建株时间,在改进培养方法方面进行了一些初步探索性研究。根据PNH异常细胞易受氧化损伤的原理,在培养体系中加入一种抗氧化剂AA2保护PNH异常细胞的生存。研究结果表明:2例PNH患者细胞均建株成功,不加药对照组有1例失败;建株时间明显缩短,并且建株后CD5^-9细胞百分率无明显下降。实验结果提示,氧化损伤是PNH细胞建株困难的重要原因;在培养初期加抗氧化剂可提高建株的成功率及缩短建株时间,这是一个重要的改进;因观察例数尚少。有待进一步证实。
简介:背景:幽门螺杆菌(H.pylori)是胃癌的Ⅰ类致癌原,但H.pylori感染与胃癌发生的分子机制仍不明了。目的:在体外观察不同疾病来源的H.pylori菌株对人胃癌细胞系AGS基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响是否存在差异。方法:将AGS细胞分别与5株分离自胃癌和5株分离自轻度非萎缩性胃炎患者的H.pylori共培养,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测MMP-2、MMP-7和MMP-9mRNA和蛋白的表达,以肠道致病性大肠杆菌作为细菌对照。结果:胃炎H.pylori菌株和大肠杆菌基本不影响AGS细胞MMP-2、MMP-7和MMP-9mRNA和蛋白的表达,而所有胃癌菌株均能上调MMP-2、MMP-7和MMP-9mRNA和蛋白的表达。结论:分离自胃癌和胃炎患者的H.pylori菌株对AGS细胞MMP-2、MMP-7和MMP-9表达的影响有所不同,说明不同疾病来源的H.pylori菌株在促细胞恶变能力上存在差异。