白藜芦醇对小鼠离体心脏负性变时作用机制的研究

白藜芦醇对小鼠离体心脏负性变时作用机制的研究

赵瑛林耀宗

赵瑛林耀宗(广东省珠海市人民医院广东珠海519000)

【中图分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）35-0113-02

【摘要】目的观察白藜芦醇（Res）对小鼠离体心脏自律性的影响。方法测定Res对离体小鼠心率（RH）影响的量效曲线，测定不同类型钾通道阻断剂对Res产生负性变时作用的影响。结果Res可减慢HR（P<0.05）；与Res组相比，格列苯脲组、四乙胺组可部分阻断Res的作用（P<0.05）,4-氨基吡啶组、氯化钡组、阿托品组不能阻断Res的作用（P＞0.05）。结论Res可呈剂量依赖性减慢HR，其作用机制与开放ATP敏感性K+通道（KATP）及Ca2+依赖性K+通道（KCa）有关。

【关键词】白藜芦醇负性变时作用钾通道

黄酮类化合物白藜芦醇（Res）具有广泛的生理、药理学作用，尤其心血管保护作用逐渐成为研究热点[1.2]，但Res对心脏的负性变时作用的机制与钾通道的关系尚未见报道。本研究旨在探讨不同类型钾通道在Res对小鼠离体心脏负性频率效应中所起的作用。

1材料与方法

1.1动物昆明雄性小鼠，体重26-32g，河北医科大学实验动物中心提供。

1.2药物与试剂Res湖南华光生物有限公司，批号20040408；KATP阻断剂Gli和KCa阻断剂TEA为Sigma公司产品；KIR阻断剂BaCl2为天津标准科技有限公司产品；KV阻断剂4-AP为德国ABCR公司产品；乙酰胆碱(ACh)调节钾通道（KAch）阻断剂Atropine为南京金陵制药厂生产。

1.3主要仪器设备MS4000U-1生物信号定量记录分析系统（广州市龙飞达科技有限公司），肌张力换能器（北京航天医学工程研究所研制JH-2型），超级恒温槽（上海衡平仪器仪表厂研制）。

1.4离体心房的制备将雄性小鼠断头后迅速取出心脏，置于氧饱和的冷（0-4℃）Krebs溶液中，制备窦房结与左右心房相连标本，注意勿损伤窦房结，以维持其自主跳动。在左右心耳两端尖部各系一丝线，一端固定于盛有10mlKrebs溶液的麦氏槽内，另一端连接张力换能器；施静息张力1g，连续通以95%O2+5%CO2的混合气体，温度维持（37.0±0.5）℃，pH=7.4±0.05，待标本稳定70min左右（期间每隔15min换Krebs溶液1次），通过MS40000U-1系统持续记录给药前及给药后30min离体小鼠心率和心肌收缩力的变化，并按以下方法计算下降率：心率下降率=（给药前频率-用药后频率）&pide;给药前频率×100%；收缩力下降率=（给药前收缩力-用药后收缩力）&pide;给药前收缩力×100%。

1.5统计学处理数据以?±s表示。使用SPSS12.0统计软件，组间比较采用x2检验分析。

2结果

2.1Res呈剂量依赖性降低离体小鼠的心率见图1。

图1Res抑制小鼠心率两小曲线（n=8）

2.2不同类型的钾通道阻断剂对Res抑制心率效应的影响用5×10-5mol/L的Gli预孵育15min后加入终浓度为5×10-5mol/L的Res，其负性变时作用降低，心率降低效应（11.0±4.7）%较Res对照组（19.0±6.4）%降低（8.01±1.63）%，差异显著（P<0.05）。表明Res的负性变时作用有KATP的参与，并被特异阻断剂Gli拮抗。用10-3mol/L的TEA预孵育15min后加入终浓度为5×10-5mol/L的Res，其负性变时作用降低，心率降低效应（11.7±3.7）%较Res对照组降低（7.29±2.66）%，差异显著（P<0.05）。表明Res的负性作用有KCa的参与，并被特异阻断剂TEA拮抗。分别用10-3mol/L的4-AP，10-4mol/L的BaCl2，10-5mol/L的Atropine预孵育15min后加入5×10-5mol/L的Res，心率降低效应（15.7±6.8）%，（21.7±3.2）%，（21.3±5.7）%与Res对照组比较，无显著性差异（P>0.05）,提示Res的负性变时作用与心肌细胞的Kv，KIR和KACH钾通道无关。

2.3Res对心房肌收缩力的影响与空白组相比，Res对小鼠离体心房肌收缩力的影响无显著差异（P>0.05）。

3讨论

KATP[3-4]是存在心血管系统的重要离子通道，不仅存在于平滑肌细胞（SMC）上，也存在于心肌细胞膜上。KATP开闭受细胞内ATP浓度的调控，KATP是把细胞的兴奋性和能量代谢联起来的作用环节，具有内源性心脑细胞保护作用，在心脑血管系统疾病中发挥着重要的作用。到目前为止，白藜芦醇作用于心脏的机制仍不清楚。本实验采用5种不同类型的钾通道阻断剂研究钾通道在Res对小鼠离体心脏自律性中的作用，结果表明，Res的负性变时作用，有KATP、KCa的参与，而与Kv，KIR和KACH无关。Res对心脏的作用不是通过激活离子通道受体使钾通道开放，不通过窦房结和心房肌的M受体激活GTP这一信号传导途径；Res的负性频率作用与窦房结上KIR无关，也不受膜电位变化的调控。Res可开放心肌KATP，促进K+外流，使细胞超极化而引起Ca2+内流减少，从而降低窦房结4期除极速度，降低自律性，产生负性变时作用。Res也可通过激活KCa使K+外流增加，继而抑制Ca2+内流，与KATP共同参与对心肌自律性的调节，可能钾通道开放是影响钙通道的上游事件Res对这两种离子通道的具体作用机制、二者的相互关系和具体作用机制仍有待进一步研究。

参考文献

[1]HunglM，ChenJK，HuangSS，etal.Cardioprotectiveeffectofresveratrol，anaturalantioxidantderivedfromgrapes[J].CardiovascRes，2000，47（1）：549.

[2]牛培勒，郭传勇.白藜芦醇药理作用的研究进展[J].医药导报，2006，25（6）：524-5.

[3]NomaA.ATP-regulatedK+channelsincardiacmuscle[J].Nature，1983；305:147-8.

[4]NicholsCG，LedererWJ.Adenosinetriphosphate-sensitivepotassiumchannelsinthecardiovascularsystem[J].AmJPhysiol，1991；261：H1675-86.