简介：摘要目的探索女性肿瘤患者在腹腔镜卵巢皮质切除术中获取未成熟卵体外成熟后（in vitro maturation，IVM）冷冻卵母细胞保存生育力的可行性及有效性。方法回顾分析2015年11月至2022年4月期间于北京大学第三医院妇产科生殖医学中心行腹腔镜下卵巢皮质切除术的22例肿瘤患者的一般资料、手术方法及术后随访资料。研究组纳入腹腔镜术中同时获取未成熟卵IVM的患者（n=14）；对照组纳入仅行皮质切除的患者（n=8）。分析两组患者的手术时间、出血量、冻存皮质数量等数据，评估该方法的应用价值及安全性。研究组根据取卵方式不同分为两个亚组，经阴道取卵亚组（n=10）及经腹腔镜取卵亚组（n=4），分析两亚组患者的手术时间、获卵数、冻存皮质数量等数据，评估不同获卵方式的效率。全部22例患者术后每年进行随访，询问肿瘤治疗情况、月经情况，条件允许者返院复查盆腔超声、性激素水平测定，记录这些患者肿瘤治疗后的卵巢功能并予以适应证范围内的激素替代治疗（hormone replacement therapy，HRT）。结果研究组和对照组患者年龄、患病时间、抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）水平、冻存皮质数量之间差异均无统计学意义（均P>0.05），但研究组的基础窦卵泡数（19.71±6.04）、手术时间［（68.07±17.35）min］、出血量［（9.0（5.0，10.5）mL］高于对照组［9.25±3.15，P<0.001；（44.25±16.97）min，P=0.005；3.5（2.0，5.0）mL，P=0.001］，差异均具有统计学意义。14例取卵患者中，经阴道取卵亚组的获卵数［15.5 （11.0，21.0）个］及年龄［（27.00±2.94）岁］显著高于经腹腔镜取卵亚组［4.0 （0.8，10.3）个，P=0.028；（15.75±2.22）岁，P<0.001］，两亚组间患者窦卵泡数、手术时间、冻存皮质数量差异均无统计学意义（均P>0.05）。接受造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，HSCT）的7例患者出仓后均出现闭经，疾病缓解后予以HRT，身体发育及生活质量得以维持及改善。结论年轻肿瘤患者在进行卵巢皮质切除术时同时获取未成熟卵IVM后冻存可增加生育力保存的机会；经阴道获取未成熟卵的效率更高；HSCT治疗后闭经率高，HRT可以提高患者生活质量。

简介：摘要目的分析肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP胞外区(EC-StkP)基序(motif)在与β-内酰胺类抗生素结合中的作用。方法分别将EC-StkP的3个motif(SXXK)依次和全部突变为AXXA，将突变后得到的质粒导入受体细胞进行克隆表达，SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组突变蛋白(EC-rStkP)表达情况，Ni-NTA亲和层析法分别提纯突变蛋白。采用等温滴定量热法(ITC 200)和表面等离子共振法(Biacore t200)检测突变蛋白与青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)结合能力。结果PCN和CTX均不能与第1个、第3个以及3个motif均突变的蛋白质结合，但第2个motif突变后还能与CTX有较弱结合，而与PCN却不能结合。结论肺炎链球菌StkP激酶胞外区的3个motif都能与β-内酰胺类抗生素结合，且以与第1个motif和第3个motif结合为主。

简介：摘要目的分析因染色体平衡易位导致复发性流产（recurrent miscarriage，RM）的夫妇中，携带者性别对正常/平衡囊胚率（可移植囊胚率）及活产结局的影响。方法回顾性病例分析2012年1月至2018年12月期间在北京大学第三医院生殖医学中心就诊的携带平衡易位的RM夫妇的第一个刺激周期的临床资料，所有周期均进行胚胎移植前染色体结构重排检测（preimplantation genetic testing for chromosomal structural rearrangements，PGT-SR），比较不同性别携带者一个完整周期的妊娠结局。结果研究纳入247个刺激周期，均为一方携带，女性携带者136例，男性携带者111例。每移植周期临床妊娠率为47.64%（91/191），每移植周期活产率为43.98%（84/191），累积活产率为34.71%（84/242），周期取消率为38.87%（96/247）。女方平衡易位携带者的囊胚形成率［31.42%（427/1359）］低于男性携带者［36.44%（379/1040），P=0.010］；女方平衡易位携带的夫妇获得的可移植囊胚率［31.85%（136/427）］与男方平衡易位携带者的夫妇［36.15%（137/379）］，差异无统计学意义（P=0.198），囊胚数是患者获得活产的保护因素［OR （95% CI）=1.243（1.002~1.542），P=0.047］。结论女方平衡易位携带者的囊胚形成率低于男方平衡易位携带者，平衡易位携带者性别对可移植囊胚率没有影响。PGT-SR后携带者的性别不影响累积活产结局，需要根据患者获得活产所需的刺激周期数来评估携带者性别对妊娠结局的整体影响。

简介：摘要细胞冷冻保存应用广泛，但冷冻会损伤细胞导致代谢紊乱，而冷冻保护剂可缓解该过程。脯氨酸是一种渗透性冷冻保护剂，可快速透过细胞膜进入细胞内，与细胞内水氢键结合抑制低温下冰晶形成，同时可与细胞内水结合减少细胞内水流失，保护细胞内蛋白质的结构和功能，保护细胞膜。脯氨酸可提高植物、动物及人类体细胞冷冻复苏后存活率。在生殖细胞冷冻中，研究表明脯氨酸可用于卵母细胞冷冻，可提高小鼠卵母细胞冷冻后存活率及保护线粒体功能，但其对于精子的冷冻效果报道尚不一致。脯氨酸冷冻保护剂涉及多种细胞类型且冷冻效果较强，其未来可能更广泛应用于低温生物学领域。本文总结了脯氨酸作为天然小分子冷冻保护剂的应用研究进展，希望能够帮助人们更好地了解生殖细胞冻存的低温生物学机制，为改良生育力冷冻保存技术提供参考。

简介：摘要目的探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）不孕症患者自然周期获卵数的影响因素及其与体外成熟（in vitro maturation，IVM）结局的相关性。方法本研究采用队列研究方法，回顾2006年1月1日至2019年12月31日期间在北京大学第三医院妇产科生殖医学中心接受自然周期取卵的586例PCOS不孕症患者的临床资料，按照获卵数（0~8、9~19、≥20）将患者分为3组，比较组间患者的一般情况、激素水平、卵成熟和胚胎发育指标、移植周期临床妊娠和活产结局。结果获卵数为0~8组、9~19组和≥20组的患者黄体生成素（luteinizing hormone，LH）/卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）［1.00（0.61，1.76）、1.41（0.86，1.96）、1.62（0.96，2.14）］、睾酮水平［（1.07（0.69，1.91）nmol/L、1.28（0.77，1.95）nmol/L、1.67（1.03，2.75）nmol/L］和窦卵泡计数（antral follicle count，AFC）［（24（19，24）、24（24，30）、30（24，40）］组间比较差异均有统计学意义（均P<0.001）。多因素logistic回归结果显示AFC是影响获卵数的显著因素（P9~19/0~8=0.002，P≥20/0~8<0.001），LH/FSH是去除AFC后影响获卵数最显著的内源性因素（P9~19/0~8=0.006，P≥20/0~8=0.003）。通过倾向性评分匹配（propensity score matching，PSM）后显示，获卵数越多，每未成熟卵成熟率［0~8组：48.0%（242/504），9~19组：44.8%（539/1202），≥20组：40.4%（1067/2640），P=0.001］、正常受精率［0~8组：31.7%（160/504），9~19组：25.5%（306/1202），≥20组：23.7%（625/2640），P=0.001］和可移植胚胎率［0~8组：19.2%（97/504），9~19组：11.6%（140/1202），≥20组：6.0%（153/2540），P<0.001］则越低，可移植胚胎形成周期率［0~8组：51.1%（47/92），9~19组：66.3%（61/92），≥20组：73.9%（68/92），P=0.005］则越高。移植周期不同获卵数分组间的每新鲜移植周期和每冻融移植周期临床妊娠率及活产率、累积临床妊娠率和累积活产率差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论AFC是预测PCOS患者自然周期获卵数的有效指标，同时LH/FSH也是影响获卵数显著的内源因素。随着获卵数的增多，所获卵母细胞的成熟质量和发育潜能会逐渐下降，但形成可移植胚胎的概率逐渐升高，获卵数与移植周期临床妊娠和活产结局无显著相关性。

简介：摘要目的探讨问号钩端螺旋体溶血素Sph2经高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)放大炎症反应的可能机制。方法一定浓度的rSph2与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间，乳酸脱氢酶(LDH)量的变化检测细胞的膜结构损伤情况；冷冻电镜观察细胞结构的改变；ELISA方法检测细胞上清液中HMGB1的含量变化。商品化的HMGB1与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间，Western blot检测NF-κB、p38-MAPK及JNK炎症信号通路关键分子的磷酸化水平；ELISA检测IL-1β、IL-6、KC(IL-8)等促炎细胞因子的表达情况。结果重组问号钩端螺旋体溶血素rSph2可导致J774A.1细胞明显的细胞核消失、细胞膜结构损伤、细胞裂解、膜泡胀；LDH释放量及HMGB1的含量明显增加；HMGB1增加NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路关键蛋白质的磷酸化水平；HMGB1上调J774A.1细胞IL-1β、IL-6、KC的表达且该上调作用可被3条通路抑制剂所抑制。结论重组问号钩端螺旋体溶血素rSph2诱导小鼠J774A.1巨噬细胞产生损伤并释放大量的HMGB1，HMGB1经NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路调控下游促炎细胞因子的表达，从而放大rSph2造成的炎症效应。

简介：摘要甲状腺激素对胎盘发育有调控作用；甲状腺激素通过细胞核受体及细胞膜受体整合素αVβ3分别调控下游基因的转录和表达，发挥调控血管生成、控制细胞增殖与凋亡、调控绒毛外滋养细胞（EVT）的侵袭性等作用；此外，胎盘分布有多种甲状腺激素转运蛋白、碘化甲状腺原氨酸脱碘酶，可调节甲状腺激素的局部作用。妊娠期甲状腺功能减退可能增加多种不良妊娠结局的发生风险，如子痫前期、胎儿生长受限、流产，而妊娠期亚临床甲状腺功能亢进可能是发生子痫前期和流产的保护因素，这些临床现象可能与甲状腺激素具有促血管生成、增强EVT的侵袭能力有关。

简介：摘要目的确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA2404基因产物为Sigma N转录因子，鉴定Sigma N信号系统参与调控的下游靶基因。方法采用生物信息学软件并根据Sigma N调控基因启动子序列特征，预测并分析钩体基因组中LA2404基因及其调控的靶基因。采用等位交换原理构建问号钩体LA2404基因敲除株(ΔLA2404)。采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测ΔLA2404敲除株中候选靶基因mRNA水平变化。构建LA2404基因原核表达系统并提纯目的重组蛋白(rSigma N)。采用凝胶迁移试验(gel electrophoresis mobility shift assay, EMSA)验证Sigma N调控的靶基因。结果致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株有一个Sigma N编码基因以及22个含Sigma N启动子序列的靶基因。ΔLA2404敲除株有钩体典型、活泼的运动方式，外形无明显变化。ΔLA2404敲除株中LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773基因mRNA水平显著下调(P<0.05)，其他靶基因mRNA水平无明显变化。EMSA结果显示，rSigma N可与上述靶基因启动子序列结合。结论LA2404基因产物为Sigma N调控基因。LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773的启动子序列能与转录因子Sigma N结合，上述7个基因表达受Sigma N通路调控。

简介：摘要目的了解铁对问号钩端螺旋体生长繁殖和能量代谢的影响，确定LA_2690与LA_3598基因产物为问号钩端螺旋体储铁蛋白及其亚铁氧化酶功能。方法采用Petroff-Hausser计数法了解缺铁对问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株在EMJH培养基中生长繁殖的影响。分光光度法和化学发光法检测缺铁抑制问号钩端螺旋体DNA和ATP合成的作用。采用生物信息学软件分析问号钩端螺旋体LA_2690和LA_3598基因结构与功能。构建LA_2690和LA_3598基因原核表达系统，Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2690和rLep3598。分光光度法检测rLep2690和rLep3598亚铁氧化酶活性。实时荧光定量RT-PCR检测问号钩端螺旋体56601株感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和单核细胞(THP-1)时LA_2690和LA_3598基因转录水平变化。结果在缺铁EMJH培养基中，问号钩端螺旋体生长繁殖能力、DNA和ATP合成水平均显著下降(P<0.05)。LA_2690和LA_3598基因产物分别为细菌铁蛋白(Bfr)和细菌DNA结合铁蛋白(Dps)，均含有双亚铁氧化酶中心，但后者缺乏亚铁血红素结合位点和亚铁氧化酶核心。LA_2690和LA_3598基因原核表达系统能高效表达目的重组蛋白rLep2690和rLep3598，提纯后经SDS-PAGE检测均显示为单一的蛋白质条带。rLep2690和rLep3598亚铁氧化酶活性分别为1 238.619和60.052 U/L。感染细胞时，LA_2690和LA_3598基因mRNA水平均显著升高(P<0.05)。结论铁离子参与问号钩端螺旋体生长繁殖、DNA和ATP合成。LA_2690和LA_3598基因(Bfr和Dps)均为问号钩端螺旋体感染细胞时所需，其中LA_2690基因产物具有较强亚铁氧化酶活性。

简介：摘要目的确定问号钩端螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制。方法采用生物信息学软件分析问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株vWF-A基因(LA_0012、LA_0697和LA_4207)产物结构与功能。构建上述基因vWF-A功能结构域片段原核表达系统，采用SDS-PAGE和Ni-NTA亲和层析法检查目的重组蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表达情况和提纯效果。采用ELISA和表面等离子共振法(SPR)检测目的重组蛋白与人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型胶原蛋白(hCOL1/3/4/6)的结合能力。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测问号钩端螺旋体赖株感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)时vWF-A基因转录和表达水平变化。结果vWF-A基因产物均为含vWF-A超家族结构域表面或跨膜蛋白，但LA_0697和LA_4207基因还含有金属离子依赖性黏附位点(MIDAS)。所构建的原核表达系统能有效表达目的重组蛋白，Ni-NTA亲和层析法提纯后SDS-PAGE检测均显示为单一蛋白条带。ELISA结果显示rLep0697与hCOL3/6、rLep4207与hCOL1/4呈强结合。SPR结果显示rLep0697快速结合hCOL3/6但快速解离(KD值＝5.71×10-8和5.89×10-8 mol/L)，rLep4207快速并稳定结合hCOL1/4(KD值＝6.4×10-9和3.2×10-9 mol/L)。感染HUVEC和EOMA细胞时，上述vWF-A基因转录和表达水平均显著升高(P<0.05)。结论LA_0697和LA_4207基因产物可作为问号钩端螺旋体感染过程中的黏附因子。

简介：摘要2019年12月中旬我国湖北省武汉市人群中出现了2019新型冠状病毒(2019-nCoV)感染性肺炎暴发流行，疫情迅速蔓延并播散至全国各个地区以及亚洲、欧洲、大洋州和北美13个国家。为了准确和深入了解2019-nCoV生物学性状、流行特征、致病性、免疫性、微生物学检查和公众防护措施，我们在最新有关文献和国家《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》最新版本的基础上，对2019-nCoV及其感染性肺炎进行综述。

简介：摘要目的探讨问号钩端螺旋体(简称钩体)跨血管内皮细胞转运分子机制。方法采用Transwell法了解问号钩体赖株穿越人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)单层能力。采用透射电镜和激光共聚焦显微镜法检测HUVEC内吞问号钩体后形成内吞泡情况。采用细胞内吞抑制试验确定HUVEC内吞问号钩体方式。采用激光共聚焦显微镜法检测HUVEC胞内问号钩体与溶酶体标志分子LAMP1共定位情况。采用暗视野显微镜Petroff-Hausser计数法检测HUVEC胞内问号钩体出胞情况。结果问号钩体赖株能迅速穿越HUVEC细胞单层。问号钩体通过PI3K-微丝依赖的细胞内吞方式进入HUVEC并形成内吞泡。HUVEC胞内问号钩体不与LAMP1共定位，提示问号钩体内吞泡不与溶酶体融合。HUVEC胞内问号钩体通过FAK-微丝/微管途径出胞。结论问号钩体通过跨细胞转运方式穿越人血管内皮细胞导致体内播散并加重病情。

简介：摘要目的确定肺炎链球菌β-内酰胺抗生素耐药相关胞内应答调节蛋白CiaR能与跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶StkP结合组成StkP/CiaR二元信号传导系统(TCSS)。方法采用PCR扩增stkP基因胞内区片段(IC-stkP)，T-A克隆测序确认序列正确后构建其原核表达系统。SDS-PAGE检查IC-stkP片段和我们以往构建的ciaR基因原核表达系统目的重组蛋白rIC-StkP和rCiaR表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯rIC-StkP和rCiaR。采用Co-IP和LC-MS/MS鉴定rIC-StkP捕获的肺炎链球菌靶蛋白。采用等离子共振法(SPR)和等温滴定量热法(ITC)检测rCiaR与rIC-StkP结合能力。结果所构建的IC-stkP片段原核表达系统能有效表达rIC-StkP。SDS-PAGE结果显示提纯的rIC-StkP和rCiaR在胶上均为单一蛋白质条带。CiaR可与rIC-StkP特异性共沉淀，其3个裂解肽位于CiaR分子内且序列完全相符。SPR和ITC结果显示，rCiaR与rIC-StkP呈高亲和力强结合，其KD值分别为1.526×10－9 mol/L和1.980×10－6 mol/L。结论肺炎链球菌CiaR可作为StkP激酶下游应答调节蛋白组成StkP/CiaR-TCSS。