简介:目的构建用于白念珠菌MXR1基因敲除的载体质粒,并通过Ura-Blaster策略敲除MXR1两条等位基因。方法分别扩增白念珠菌MXR1基因ORF两侧上下游的片段,通过酶切与连接反应,将上下游片段分别插入到p5921质粒的hisG-URA3-hisG盒两端,从而形成MXR1敲除载体质粒pUC-MXR1-URA3。通过Ura-Blaster策略将载体质粒转染到白念珠菌RM1000内,并采用PCR和Southern-blot杂交方法鉴定各步转染、复筛所得的阳性克隆。结果成功获得MXR1基因缺失的菌株。结论MXR1基因缺失菌株的构建,有助于深入研究白念珠菌耐药机制。
简介:门高血压(PHT)gastropathy是肝肝硬化的经常的复杂并发症,带之一从肝硬化死亡引起。Apoptosis广泛地被认为从坏死的房间死亡是房间死亡和一个不同实体的一个活跃精力依赖者模式。胃的mucosalapoptosis是否涉及PHTgastropathy,是不清楚的。通过cyclooxygenase(艇长)生产的前列腺素(PG)被认为从损害和apoptosis在胃肠的mucosa的保护起一个关键作用。然而,在PHTgastropathy的艇长的角色仍然不清楚地被理解。这研究的目的是调查(1)胃的mucosalapoptosis是否涉及PHTgastropathy,(2)艇长的downregulation贡献这apoptosis。在这研究,当mucosal增长在PHT老鼠被禁止时,我们证明胃的mucosalapoptosis显著地被增加。胃的mucosalCOX-1显著地在mRNA和蛋白质层次被压制,并且PGE2在PHT老鼠被减少。进一步,PGE2处理在PHT老鼠压制了胃的mucosalapoptosis。然而,胃的mucosalCOX-2层次没在假冒操作老鼠和PHT老鼠之间不同。肿瘤坏死因素的胃的mucosal层次--(TNF-)并且船边交货ligand,然而并非TNF相关的导致apoptosisligand,被增加,并且激活的caspase-8和caspase-3层次是在PHT老鼠的upregulated。到cytosol的从线粒体的细胞色素c的版本没在PHT老鼠被观察。我们的数据显示COX-1的downregulation经由死亡涉及胃的mucosalapoptosis调停信号的类型--我在PHT老鼠的房间死亡。
简介:WereportedinthismanuscriptthatTGF-β1inducesapoptosisinAML12murinehepatocytes,whichisassociatedwiththeactivationofp38MAPKsignalingpathway.SB202190,aspecificinhibitorofp38MAPK,stronglyinhibitedtheTGF-β1-inducedapoptosisandPAI-1promoteractivity.TreatmentofcellswithTGF-β1activatesp38.Furthermore,over-expressionofdominantnegativemutantp38alsoreducedtheTGF-β1-inducedapoptosis.Thedataindicatethattheactivationofp38isinvolvedinTGF-β1-mediatedgeneexpressionandapoptosis.
简介:矮脆突变体dwf1(dwarfandfragile1)来源于EMS诱变处理的籼型恢复系缙恢10号,主要表现为根、茎、叶、叶鞘、子粒等器官特别脆,同时植株变矮、叶片披垂。株高、穗长、结实率、节间长以及千粒重有不同程度降低,细胞壁中纤维素和木质素含量下降、半纤维素含量增加,机械强度下降。茎秆表面锯齿状突起尖锐,薄壁细胞较野生型小、细胞大小不一致、排列紊乱,细胞形状不规则、长度稍有变短。该突变性状受一对隐性核基因控制,位于第9染色体上标记Ind6与Ind4之间,dwf1相对于野生型在LOC_Os09g25490第7外显子上有一个碱基的错义突变,导致氨基酸由半胱氨酸突变为精氨酸,该突变发生在基因的高度保守区域内。dwf1对深入研究水稻变矮变脆机制具有重要意义。
简介:Asystematicphylogeneticfootprintingapproachwasperformedtoidentifycon-servedtranscriptionfactorbindingsites(TFBSs)inmammalianpromoterregionsusinghuman,mouseandratsequencealignments.Wefoundthatthescoredis-tributionsofmostbindingsitemodelsdidnotfollowtheGaussiandistributionrequiredbymanystatisticalmethods.Therefore,weperformedanempiricaltesttoestablishtheoptimalthresholdforeachmodel.WegaugedourcomputationalpredictionsbycomparingwithpreviouslyknownTFBSsinthePCK1genepro-moterofthecytosolicisoformofphosphoenolpyruvatecarboxykinase,andachievedasensitivityof75%andaspecificityofapproximately32%.Almostallknownsitesoverlappedwithpredictedsites,andseveralnewputativeTFBSswerealsoidentified.WevalidatedapredictedSP1bindingsiteinthecontrolofPCK1tran-scriptionusinggelshiftandreporterassays.Finally,weappliedourcomputationalapproachtothepredictionofputativeTFBSswithinthepromoterregionsofallavailableRefSeqgenes.OurfullsetofTFBSpredictionsisfreelyavailableathttp://bfgl.anri.barc.usda.gov/tfbsConsSites.
简介:为研究烟草黑胫病不同亲本来源的抗性遗传规律,定位抗性基因位点,本研究利用抗黑胫病品种Beinhart1000-1构建了220个F2分离群体。通过病圃接种鉴定和遗传分析,确定Beinhart1000-1对烟草黑胫病的抗性由多基因控制。利用筛选到的70对稳定SSR引物对烟草黑胫病抗性进行了QTL分析,绘制了一张包含14条染色体的遗传连锁图谱,且定位到5个与烟草黑胫病抗性紧密相关的QTLs,分别在2、3、3、6、12号染色体上,其贡献率分别为6.2%、6.0%、6.7%、5.6%和5.1%。此结果使烟草黑胫病抗性研究进一步深入,推进了烟草黑胫病分子标记辅助选择。
简介:目的探讨血浆(1—3)-β-D-葡聚糖对早期诊断深部真菌感染的临床价值。方法收集2009年3月-11月间在北京友谊医院感染科住院患者174例,根据侵袭性真菌感染诊断标准,将患者分为排除深部真菌组、确诊组、临床诊断组、拟诊组。应用MB-80微生物动态快速检测系统,检测各组患者血浆(1—3)-β—D-葡聚糖水平,分析比较深部真菌感染组和非深部真菌感染组血浆(1-3)-β-D-葡聚糖的水平。结果深部真菌感染组血清(1-3)-β-D-葡聚糖含量为(153.4±37.0)pg/mL,排除深部真菌感染组血清(1-3)-β—D-葡聚糖含量为(54.6±8.6)pg/mL,两组间有统计学差异(t=3.4,P〈0.01);分析血浆(1-3)-β-D-葡聚糖诊断深部真菌感染,以20pg/mL为诊断阈值,其准确率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为70.1%、87.5%、61.9%、52.1%、91.2%。确诊病例、临床诊断病例、拟诊病例,3组间血清(1—3)-β-D-葡聚糖含量无统计学差异(P〉0.05)。结论深部真菌感染组的葡聚糖水平明显高于排除深部真菌感染组的葡聚糖水平,具有统计学意义。以20pg/mL为诊断阈值,其准确率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为70.1%、87.5%、61.9%、52.1%、91.2%,可作为深部真菌感染的最佳诊断阈值。
简介:目的探究ripply1基因在斑马鱼早期背腹轴发生过程中的作用.方法利用斑马鱼整封原位杂交技术揭示ripply1基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达模式,通过显微注射技术在胚胎1细胞期注射ripply1的mRNA来高表达Ripply1蛋白并在后期观察胚胎背腹标记基因的变化及胚胎形态变化.利用Tol2转基因技术构建ripply1启动子驱动的GFP转基因鱼.结果原位杂交结果显示ripply1基因在斑马鱼原肠早期胚盾期特异表达在胚盾处,即预定的背部.高表达ripply1后,在胚盾期背部标记基因表达范围扩大,腹部标记基因表达减弱,受精后24小时胚胎表现出严重的背部化表型:头部增大,腹部卵黄延伸减弱,尾部躯干及尾部区域减少,有的甚至形成了第二个体轴.得到的转基因鱼揭示ripply1母源表达,并且转录起始位点上游1200个碱基驱动的GFP能模拟内源基因的表达图式.结论ripply1可能参与斑马鱼胚胎早期背腹轴的发生.
简介:目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a(TNFa)引起的NF-kB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。
简介:椎间盘退行性变动物模型已经应用于研究椎间盘的生物力学行为、生物化学变化和生物学改变。为了探讨生骨蛋白-1(OsteogenicProtein-1,OP-1)在椎间盘合成代谢和抗分解代谢中的作用,美国Rush大学生化系的ChubinskayaS等人用椎间注射的方法制作了椎间盘退行性变模型,并用生物学和免疫组化的方法开展了研究工作。该实验共用了34只大鼠,分成5组:空白对照组、阴性对照组、核浆(nucleuspulposus,NP)盐注射加压组、两组OP-1注射组:COP-1组(椎间盘注射OP-1后持续加压)和ROP-1组(OP-1注射后停止加压)。