简介：摘要目的探讨三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer, TNBC）患者血清外泌体中微小RNA（microRNA-335-5p, miR-335-5p）和重组人血管内皮生长因子受体1（human vascular endothelial growth factor receptor 1, VEGFR-1, FLT1）表达水平及其诊断价值。方法高通量基因表达数据库（Gene Expression Omnibus database, GEO）分析并筛选乳腺癌组织中差异表达的miRNA，于2016年1月至2017年11月收集宁波大学附属人民医院的56例TNBC患者的外周血标本，分离外泌体并鉴定。生物信息学分析筛选出FLT1作为miR-335-5p的靶基因。qRT-PCR分别检测miR-335-5p、FLT1在血清外泌体中的表达水平。分析miR-335-5p与TNBC患者临床病理参数的关系，受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic, ROC）评估miR-335-5p的诊断价值，Kaplan-Meier生存曲线对miR-335-5p和FLT1做生存预后分析。结果TNBC患者血清外泌体中miR-335-5p表达低于对照组，FLT1在血清外泌体中的表达高于对照组（均P<0.05）。miR-335-5p表达情况与TNBC患者组织分级（χ2=22.02，P<0.000 1）、分化程度（χ2=20.67, P<0.000 1）、淋巴结转移有关（χ2=4.667, P=0.030 8）；miR-335-5p诊断ROC下面积为0.809 8（95% CI: 0.726 3~0.893 2, P<0.000 1）。Kaplan-Meier生存分析显示，miR-335-5p低表达组患者的总生存期较高表达组明显缩短（P=0.004 5）。其靶基因FLT1的高表达与低生存率相关（P=0.048 0）。结论血清外泌体源性miR-335-5p可作为预测TNBF预后的重要指标，有望在TNBC的诊断和治疗中发挥作用。

简介：摘要目的观察miR-5011-5p对膀胱癌细胞系J82凋亡和迁移的影响并探讨可能的作用机制。方法以J82细胞为研究对象，分别转染随机序列分子（NC组）和miR-5011-5p序列分子（miR-5011-5p组）。通过流式细胞术和划痕实验分析miR-5011-5p对J82细胞凋亡和迁移的影响，通过生物信息学预测miR-5011-5p的靶基因，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和Western blot分别检测miR-5011-5p对靶基因表达的影响。结果miR-5011-5p组J82细胞中miR-5011-5p相对表达量为10.73±1.67，显著高于NC组的1.04±0.16（t=5.81，P < 0.01）。NC组、miR-5011-5p组J82细胞凋亡率分别为（8.83±1.67）%、（34.96±3.80）%，差异有统计学意义（t=6.30，P < 0.01）。NC组、miR-5011-5p组J82细胞迁移率分别为（71.31±7.69）%、（37.43±5.01）%，差异有统计学意义（t=3.69，P < 0.05）。miR-5011-5p的靶基因可能是Yes相关蛋白1（YAP1）。与NC组相比，miR-5011-5p对J82细胞YAP1表达具有显著抑制效应（P < 0.01）。结论miR-5011-5p可能通过靶向抑制YAP1基因表达，促进膀胱癌J82细胞的凋亡并抑制其迁移。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响及其机制。方法收集2018年12月至2019年8月在新乡市第一人民医院行白内障手术的23例年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织，同时收集20例正常供体眼晶状体前囊膜组织。采用实时荧光定量PCR法检测并比较不同人群晶状体前囊膜组织中KCNQ1OT1和miR-199a-5p mRNA表达水平。体外培养人LECs(SRA01/04)，将细胞分为空白对照组、模型对照组、小干扰RNA-阴性对照(siR-NC)组、siR-KCNQ1OT1组、miR-NC组、miR-199a-5p组、siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组和siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组，其中空白对照组不做任何处理，模型对照组采用100 μmol/L过氧化氢(H2O2)培养细胞24 h制作氧化应激损伤模型，其余各组分别采用相应转染试剂按照脂质体法转染6 h后换用100% μmol/L H2O2处理细胞24 h。采用实时荧光定量PCR法检测各组晶状体前囊膜组织和各组LECs细胞中KCNQ1OT1和miR-199a-5p表达水平；采用MTT法检测各组细胞活力值；采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；采用Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达水平；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量；采用双荧光素酶报告实验检测KCNQ1OT1和miR-199a-5p的关系。结果年龄相关性白内障患者前囊膜内KCNQ1OT1相对表达量为2.41±0.42，明显高于正常人的0.97±0.19，差异有统计学意义(t＝14.112，P<0.001)；miR-199a-5p相对表达量为0.36±0.12，明显低于正常人的1.04±0.15，差异有统计学意义(t＝16.507，P<0.001)。与空白对照组比较，模型对照组中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量明显增加，miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞活力值、SOD活性值明显降低，差异均有统计学意义(均P<0.001)；与siR-NC组比较，siR-KCNQ1OT1组细胞中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量降低，bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值增加，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与miR-NC组比较，miR-199a-5p组KCNQ1OT1-WT荧光素酶活性显著降低，差异有统计学意义(t＝21.131，P<0.001)；与miR-NC组相比，miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显升高，bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量显著降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显低于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组，细胞凋亡率、bax蛋白相对表达量和MDA含量显著高于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制KCNQ1OT1能够增强人LECs活力，抑制H2O2诱导的细胞凋亡和氧化应激反应，其作用机制可能与上调miR-199a-5p有关。

简介：摘要目的探讨miR-150-5p在慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺动脉高压(PH)中的表达水平及临床意义。方法本研究为病例对照研究，采用非随机抽样的方法选择2019年7月至2020年12月在长沙市第三医院呼吸与危重症医学科门诊随诊的稳定期COPD患者198例，根据肺动脉收缩压(SPAP)和匹配度，筛选出COPD合并PH(COPD+PH)组30例和单纯COPD组30例，同期健康人(对照组)20名。检测3组肺功能指标第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1%pred)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和外周血miR-150-5p的表达水平，分析miR-150-5p相对表达量与NT-proBNP水平、SPAP的相关性。用曲线下面积评价miR-150-5p判断COPD患者继发PH的诊断价值。结果COPD+PH组和单纯COPD组FEV1/FVC和FEV1%pred均低于对照组，分别为FEV1/FVC(55.09±6.91)%、(57.80±7.04)%比(86.62±3.40)%；FEV1%pred(64.30±8.41)%、(66.82±7.90)%比(102.06±4.12)%(F值分别为45.61和44.97，P值均<0.01)。COPD+PH组和单纯COPD组NT-proBNP高于对照组，COPD+PH组又高于单纯COPD组，分别为(533.95±139.03)ng/L、(148.91±9.47)ng/L比(35.29±11.40)ng/L(P值均<0.01)；COPD+PH组和单纯COPD组血清中miR-150-5p水平低于对照组，COPD+PH组又低于单纯COPD组[0.134(0.081，0.210)、0.312(0.248，0.388)比0.506(0.383，0.721)，χ2＝56.09，P<0.01]。相关性分析显示miR-150-5p的相对表达量与NT-proBNP和SPAP均呈负相关(r值分别为-0.872和-0.884，P值均<0.01)。受试者工作曲线分析显示，当miR-150-5p截断值为0.252时，曲线下面积为0.982(95%CI：0.959~1.000)，其敏感度为96.70%，特异度为90.00%，准确度为93.33%。结论COPD合并PH患者外周血中miR-150-5p表达水平下调，与NT-proBNP和SPAP呈负相关。外周血miR-150-5p对COPD合并PH的预测能力有较高的敏感度、特异度和准确度，可作为COPD患者继发PH的早期诊断及病情评估的潜在生物标志物。

简介：摘要目的探讨miR-138-5p靶向HIF-1α对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响。方法将GRC-1细胞分为四组，分别为GRC-1组、miR-138 mimic组、pc-HIF-1α组及共转染组(mimic+pc-HIF-1α组)，并将mimic-scramble组设置为miR-138 mimic转染的阴性对照组。采用荧光素酶报告实验验证miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系，采用qRT-PCR检测miR-138 mimic对GRC-1细胞HIF-1α mRNA水平的影响，采用Western blot检测miR-138对GRC-1细胞HIF-1α蛋白水平的影响。分别采用CCK-8、流式细胞术和划痕实验检测miR-138-5p靶向HIF-1α对GRC-1细胞的增殖、凋亡和迁移的影响。结果荧光素酶报告实验结果显示miR-138-5p可靶向HIF-1α。与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的miR-138-5p mRNA表达水平较高，HIF-1α mRNA表达水平较低(均P<0.01);与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的HIF-1α蛋白表达水平较低，而pc-HIF-1α组的HIF-1α蛋白表达水平较高(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的HIF-1α蛋白表达水平低于pc-HIF-1α组(P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞增殖倍数较低，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞增殖倍数较高(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞增殖倍数低于pc-HIF-1α组，差异有统计学意义(P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞凋亡率较高，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞凋亡率较低(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞凋亡率高于pc-HIF-1α组(P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞划痕愈合率较低，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞划痕愈合率较高(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞划痕愈合率低于pc-HIF-1α组(P<0.01)。结论miR-138-5p可通过靶向HIF-1α，负向调控HIF-1α mRNA和蛋白的表达，进而减弱人肾癌细胞GRC-1的增殖和迁移，促进其凋亡。

简介：摘要目的探讨miR-6893-5p对前列腺癌LNCaP细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测miR-6893-5p在前列腺癌细胞系（DU-145、PC-3、C4-2B、LNCaP）及正常前列腺上皮细胞（RWPE-1）中的表达。选择miR-6893-5p表达最低的细胞系，分别感染携带无意义序列的重组慢病毒（NC组）和携带miR-6893-5p序列的重组慢病毒（miR-6893-5p组）。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和划痕实验观察两组细胞的增殖和迁移情况。采用生物信息学预测和双荧光素酶检测系统验证miR-6893-5p的靶基因。RT-qPCR和Western blot分别检测靶基因的表达。结果miR-6893-5p在前列腺癌细胞系中的表达明显低于RWPE-1细胞（P＜0.05），LNCaP细胞中miR-6893-5p的表达最低（P＜0.01）。与NC组相比，miR-6893-5p上调可明显抑制LNCaP细胞的增殖能力和迁移能力（均P＜0.05）。双荧光素酶检测证实miR-6893-5p可与S100钙结合蛋白A16（S100 calcium binding protein A16，S100A16）靶向结合（P＜0.01）。NC组和miR-6893-5p组LNCaP细胞中S100A16 mRNA相对表达量分别为（1.01±0.07）和（0.22±0.06），与NC组相比，miR-6893-5p能够抑制LNCaP细胞中S100A16的表达（P＜0.01）。结论miR-6893-5p对前列腺癌LNCaP细胞增殖和迁移具有明显的抑制作用，其作用机制可能与负向调控S100A16基因表达有关。

简介：摘要目的探讨长链非编码(lnc)RNA HCP5对胶质瘤细胞的辐射敏感性的影响及其机制。方法分别用0、2、4、6、8 Gy射线照射胶质瘤细胞U251和U87，作为不同剂量辐射组；将si-con、si-HCP5、pcDNA、pcDNA-HCP5转染至细胞U251和U87中，分别记为si-con组、si-HCP5组、pcDNA组、pcDNA-HCP5组；将si-con、si-HCP5转染至细胞U251和U87后再用4 Gy射线照射，分别记为IR＋si-con组、IR＋si-HCP5组，仅用4 Gy射线照射的细胞记为IR组；将si-HCP5分别与anti-miR-con、anti-miR-508-3p共转染至细胞U251和U87后再用4 Gy射线照射，分别记为IR＋si-HCP5＋anti-miR-con组、IR＋si-HCP5＋anti-miR-508-3p组，转染均用脂质体法。采用RT-qPCR检测miR-508-3p和HCP5的表达；细胞克隆形成实验检测胶质瘤细胞的放射敏感性；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测磷酸化H2AX(γ-H2AX)、裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果放射处理的胶质瘤细胞HCP5高表达，miR-508-3p低表达；沉默HCP5后细胞U251和U87放射敏感性增强，细胞凋亡率升高[U251：(16.67±1.68)%，(3.58±0.62)%，t＝21.929，P<0.05；U251：(12.32±1.08)%，(4.48±0.71)%，t＝18.198，P<0.05]，γ-H2AX[U251：(0.45±0.04)，(0.23±0.05)，t＝10.307，P<0.05；U87：(0.38±0.04)，(0.24±0.03)，t＝8.400，P<0.05]、Cleaved caspase-3[U251：(0.37±0.04)，(0.16±0.03)，t＝12.600，P<0.05；U87：(0.38±0.04)，(0.22±0.03)，t＝9.600，P<0.05]表达水平升高。相比单独沉默HCP5或辐射处理，沉默HCP5同时辐射处理U251细胞，细胞凋亡率[(25.34±1.54)%，(16.67±1.68)%，t＝11.413，P<0.05；(25.34±1.54)，(11.13±1.06)，t＝22.802，P<0.05]显著升高，γ-H2AX[(0.69±0.05)，(0.45±0.04)，t＝11.245，P<0.05；(0.69±0.05)，(0.31±0.04)，t＝17.804，P<0.05]、Cleaved caspase-3[(0.52±0.06)，(0.37±0.04)，t＝6.240，P<0.05；(0.52±0.06)，(0.34±0.04)，t＝7.488，P<0.05]表达水平升高。辐射处理后且沉默HCP5后U251和U87细胞中p-PI3K[(0.21±0.02)，(0.52±0.04)，t＝20.795，P<0.05；(0.26±0.23)，(0.67±0.07)，t＝5.116，P<0.05]、p-AKT[(0.22±0.03)，(0.66±0.07)，t＝17.332，P<0.05；(0.23±0.04)，(0.71±0.03)，t＝28.800，P<0.05]表达水平降低。HCP5可靶向调节miR-508-3p表达；干扰miR-508-3p逆转了沉默HCP5和辐射对U251和U87细胞放射的增敏和促进细胞凋亡的作用，降低了γ-H2AX、Cleaved caspase-3表达水平，提高了p-PI3K、p-AKT表达水平。结论沉默lncRNA HCP5可增强胶质瘤细胞的辐射敏感性，促进细胞凋亡，其机制可能与miR-508-3p及PI3K/Akt信号通路有关，可为胶质瘤治疗提供新靶点和新思路。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1，LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象，实验分为2组：阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p)，转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示，两两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比，结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05)，表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5p组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26)，差异具有统计学意义(t＝5.40, P<0.01)。与阴性对照组相比，miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05)，迁移能力显著下降(t＝4.52, P<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和LASP1 mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比，miR-3126-5p组HCT116细胞中LASP1基因表达显著降低(t＝4.56, P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达，miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。

简介：目的探讨微小RNA-769-5p（miR-769-5p）在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量，选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5pmimics／miR-769-5pinhibitor，另设miRNAmimicscontrol／inhibitorcontrol对照组；采用MTS实验、克隆形成实验及Transwell小室实验检测miR-769-5p对NSCLC细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、Anip-973及GLC-82细胞中的相对表达量分别为0．06、0．40、0．09、1．04和2．31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5pmimics，在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5pinhibitor。MTS结果显示，与对照组比较，miR-769-5pmimics能够抑制A549细胞的增殖（P〈0．05），而miR-769-5pinhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖（P〈0．05）。平板克隆实验结果显示，与对照组比较，miR-769-5pmimics能够抑制A549细胞的平板克隆形成数（124．7±14．7绑．399．4±46．0，P〈0．05）；而miR-769-5pinhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数（555．74-29．7％366．3±28．7，P〈0．05）。Transwell实验结果显示，与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较，miR-769-5pmimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭（94．4±18．1VS．157．8±22．9，84．4±15．1vs．135．6±16．7，P〈0．05）；miR-769-5pinhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭（226．7±40．3VS．153．3±38．7，196．7±39．1伽．138．9±40．4，P〈0．05）。结论miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移，可能成为NSCLC的潜在靶点。

简介：

简介：摘要目的研究miR-219a-5p通过调控高迁移率蛋白A2（HMGA2）对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR检测骨肉瘤U2OS细胞和正常成骨细胞hFOB1.19的miR-219a-5p mRNA表达水平。采用脂质体转染法将miR-219a-5p模拟物miR-219a-5p mimic（miR-219a-5p mimic组）以及阴性对照mimic NC（mimic NC组）转染U2OS细胞，通过实时定量PCR检测转染后细胞miR-219a-5p和HMGA2 mRNA的表达水平，蛋白质印迹法检测HMGA2蛋白水平，采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力，利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-219a-5p与HMGA2间的作用关系。结果实时定量PCR结果显示，骨肉瘤U2OS细胞中的miR-219a-5p表达水平（0.11±0.01）显著低于正常成骨细胞（1.00±0.06），差异具有统计学意义（t=26.83，P<0.001）。CCK-8法结果显示，mimic NC组和miR-219a-5p mimic组培养24 h后细胞吸光度值分别为0.52±0.02、0.42±0.02，48 h后分别为0.85±0.03、0.60±0.03，72 h后分别为1.12±0.02、0.72±0.02，miR-219a-5p mimic组细胞增殖活性显著低于mimic NC组，差异均具有统计学意义（t=6.97，P<0.001；t=16.65，P<0.001；t=26.78，P<0.001）。克隆形成实验结果显示，miR-219a-5p mimic组细胞克隆数为（157.00±15.39）个，明显低于mimic NC组的（294.00±15.51）个，差异具有统计学意义（t=9.70，P<0.001）。划痕实验结果显示，培养24 h后，miR-219a-5p mimic组细胞划痕面积百分比为（40.53±2.92）%，显著高于mimic NC组的（21.71±3.11）%，差异具有统计学意义（t=7.26，P=0.002）。Transwell小室侵袭实验结果显示，miR-219a-5p mimic组细胞的穿膜数量为（128.67±18.67）个，显著少于mimic NC组的（317.67±14.33）个，差异具有统计学意义（t=15.65，P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，在含有MUT-HMGA2细胞中，与mimic NC组（4.40±0.28）相比，转染miR-219a-5p mimic（4.30±0.26）对荧光素酶活性无明显影响，差异无统计学意义（t=0.85，P=0.690）。在含有WT-HMGA2细胞中，相比于NC mimic组（4.50±0.25），miR-219a-5p mimic组（2.88±0.16）荧光素酶活性显著降低，差异具有统计学意义（t=19.15，P<0.001）。且过表达miR-219a-5p后，骨肉瘤U2OS细胞中的HMGA2 mRNA和蛋白表达（0.77±0.01；0.37±0.01）相比于mimic NC组（1.00±0.02；1.00±0.01）均下调，差异均具有统计学意义（t=16.38，P<0.001；t=42.02，P<0.001）。结论在骨肉瘤细胞中，miR-219a-5p可通过下调HMGA2的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的探讨miR-425-5p对脂多糖诱导的肠道L细胞胰升糖素样肽1(GLP-1)分泌的影响及其机制。方法采用脂多糖孵育肠道L细胞系GLUTag细胞，检测miR-425-5p和GLP-1的表达和分泌；采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡。采用实时定量PCR和Western印迹法检测miR-425-5p、磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、胰升糖素原mRNA和蛋白的表达。通过检测TOP/FOP比率测定Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的活性。采用双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀(ChIP)明确miR-425-5p与PTEN、β-catenin之间的相互作用。结果在GLUTag细胞中，随着脂多糖浓度的升高，miR-425-5p表达增加，活性GLP-1水平降低，细胞凋亡增加，细胞活力下降；而且miR-425-5p参与脂多糖对GLP-1表达和肠道L细胞活力的调节作用。抑制miR-425-5p可降低胰升糖素原mRNA表达和TOP/FOP比率，提高PTEN蛋白水平，抑制细胞活力。在脂多糖诱导下，miR-425-5p通过靶向PTEN上调β-catenin的表达水平，而β-catenin作为顺式作用元件诱导胰升糖素原的转录，进而促进GLP-1的表达。结论在脂多糖诱导的肠道L细胞中，miR-425-5p通过靶向PTEN调控β-catenin水平进而促进GLP-1的分泌。

简介：摘要目的探讨微小RNA（miRNA）-3679-5p通过调控叉头框蛋白M1（forkhead box protein M1，FOXM1）的表达对食管癌KYSE30细胞增殖和凋亡的影响。方法根据对KYSE30细胞的处理，实验分为NC组（转染阴性对照模拟物）和miR-3679-5p组（转染miR-3679-5p模拟物）。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组KYSE30细胞中miR-3679-5p表达变化。克隆形成实验和双染流式细胞术分别检测KYSE30细胞增殖和凋亡变化。生物信息学方法预测miR-3679-5p的靶基因。RT-qPCR和Western blotting检测靶基因表达变化。结果与NC组相比，miR-3679-5p组KYSE30细胞中miR-3679-5p表达显著上调［（8.65±0.68）比（1.09±0.31）］（P＜0.01），KYSE30细胞增殖活力显著降低［（48.46±12.79）个比（105.70±13.57）个］（P＜0.01），细胞凋亡率显著增加［（19.37±2.66）%比（5.48±1.34）%］（P＜0.01）。FOXM1可能是miR-3679-5p的靶基因。与NC组相比，miR-3679-5p组KYSE30细胞中FOXM1基因表达显著降低（P＜0.01）。结论miR-3679-5p可能通过靶向下调FOXM1表达，抑制食管癌KYSE30细胞增殖，促进KYSE30细胞的凋亡。

简介：摘要目的探讨慢病毒介导微小RNA(miR)-31-5p过表达对兔自身免疫性干眼模型外周血辅助性T细胞17(Th17)的免疫调控作用。方法构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装miR-31-5p过表达及其对照慢病毒，进行浓缩和滴度测定。建立兔自身免疫性干眼模型，并分离模型兔外周血单个核细胞(PBMC)，分别感染miR-31-5p及阴性对照慢病毒颗粒作为miR-31-5p过表达组和对照组，采用实时荧光定量PCR法检测miR-31-5p的表达水平。将2个组PBMC与经γ射线照射后的泪腺上皮细胞共培养，采用实时荧光定量PCR法检测2个组PBMC中Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)、标志性细胞因子白细胞介素-17(IL-17)及Th17细胞极化相关细胞因子IL-1β、IL-6和IL-23的mRNA表达水平；采用Western blot法检测PBMC中IL-17的蛋白表达水平。结果通过测序验证，成功构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装并浓缩miR-31-5p过表达和对照慢病毒颗粒，滴度测定结果分别为3.82×107 TU/ml和3.50×107 TU/ml，满足后续实验需求。实时荧光定量PCR结果显示，miR-31-5p过表达组miR-31-5p相对表达量较对照组显著升高，差异有统计学意义(t＝－9.696，P<0.001)。在兔泪腺上皮细胞与PBMC共培养体系中，miR-31-5p过表达组PBMC中的RORC、IL-17 mRNA相对表达量分别为0.33±0.03和0.28±0.09，明显低于对照组的1.00±0.00和1.00±0.00，差异均有统计学意义(t＝46.256、13.810，均P<0.05)。Western blot检测结果显示，miR-31-5p过表达组PBMC中IL-17蛋白相对表达量较对照组明显降低，差异有统计学意义(t＝4.977，P＝0.008)。实时荧光定量PCR结果显示，miR-31-5p过表达组PBMC中IL-6、IL-23和IL-1β mRNA相对表达量较对照组显著下降，差异均有统计学意义(t＝220.076、6.641、13.271，均P<0.05)。结论miR-31-5p过表达可能通过下调免疫微环境中IL-6、IL-23、IL-1β等细胞因子的表达负向调控Th17细胞免疫反应。

简介：摘要目的评价小鼠神经细胞氧糖剥夺-复糖复氧时微小RNA-93-5p(miR-93-5p)与线粒体融合蛋白2(Mfn2)的关系。方法体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞至对数生长期。实验Ⅰ　采用随机数字表法将细胞分为5组(n＝20)：对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(OGD/R组)、miR-93-5p抑制剂组(I组)、siRNA-Mfn2+miR-93-5p抑制剂组(siMfn2+I组)和miR-93-5p阴性对照组(NC组)。氧糖剥夺：在低糖平衡盐溶液、37 ℃ 5%CO2-95%N2的环境中培养3 h，复糖复氧：在正常培养基、37 ℃ 5%CO2-95%空气中复氧24 h。I组、siMfn2+I组与NC组在模型制备前48 h分别转染miR-93-5p抑制剂、miR-93-5p抑制剂+siRNA-Mfn2及阴性对照miRNA。采用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，qRT-PCR法检测miR-93-5p、Mfn2 mRNA表达水平，Western blot法检测Mfn2表达水平。实验Ⅱ　构建野生型(WT)-Mfn2和突变型(MUT)-Mfn2质粒，并分别与miR-93-5p模拟物和miR-93-5p空白对照(miR-93-5p NC)载体转染至神经母细胞瘤细胞，转染48 h后，采用随机数字表法将细胞分为4组(n＝5)：miR-93-5p NC-WT-Mfn2共转染组、miR-93-5p模拟物-WT-Mfn2共转染组、miR-93-5p NC-MUT-Mfn2共转染组和miR-93-5p模拟物-MUT-Mfn2共转染组。采用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性。结果实验Ⅰ　与C组比较，其余各组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，miR-93-5p表达上调，Mfn2及其mRNA表达下调(P<0.05)；与OGD/R组或NC组比较，I组细胞活力升高，细胞凋亡率降低，miR-93-5p表达下调，Mfn2及其mRNA表达上调(P<0.05)；与I组比较，siMfn2+I组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，Mfn2及其mRNA表达下调(P<0.05)。实验Ⅱ　与miR-93-5p NC-WT-Mfn2共转染组比较，miR-93-5p模拟物-WT-Mfn2共转染组荧光素酶活性降低(P<0.05)；与miR-93-5p NC-MUT-Mfn2共转染组比较，miR-93-5p模拟物-MUT-Mfn2共转染组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-93-5p表达上调，进而靶向下调Mfn2表达，可能是小鼠神经细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤的机制。

简介：摘要目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA，lcnRNA) INK4基因座中反义非编码RNA(antisense noncoding RNA in the INK4 locus，ANRIL)/miR-122-5p轴在高糖诱导足细胞炎症及氧化应激中的作用及机制。方法培养足细胞MPC5细胞株并分为以下五组：低糖组、高糖组、si-NC＋低糖组、si-NC＋高糖组和si-LncRNA ANRIL＋高糖组。检测LncRNA ANRIL、miR-122-5p、核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)、NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4, NOX4)的表达水平及白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor -α，TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、8-羟脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine, 8-OHdG)的含量，验证LncRNA ANRIL与miR-122-5p的靶向作用。结果高糖组MPC5细胞中LncRNA ANRIL的表达水平明显高于低糖组，miR-122-5p的表达水平明显低于低糖组，差异有统计学意义[(1.83±0.24)比(1.00±0.17)，(0.63±0.08)比(1.00±0.13)，t值分别为6.31、5.42，P值均<0.05]。miR-122-5p组MPC5细胞中野生型LncRNA ANRIL报告基因的荧光活力低于miR-NC组[(0.50±0.09)比(0.97±0.15)，t＝5.73，P<0.001)]，突变型LncRNA ANRIL报告基因的荧光活力与miR-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。si-NC＋高糖组MPC5细胞中LncRNA ANRIL的表达水平明显高于si-NC＋低糖组和si-LncRNA ANRIL＋高糖组，miR-122-5p的表达水平明显低于si-NC＋低糖组和si-LncRNA ANRIL＋高糖组，差异均有统计学意义[(1.89±0.25)比(1.00±0.14)比(0.89±0.12)，(0.58±0.07)比(1.00±0.15)比(0.92±0.12)，F值分别为13.92、14.75，P值均<0.001)]。si-NC＋高糖组培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显高于si-NC＋低糖组和si-LncRNA ANRIL＋高糖组，差异均有统计学意义[ng/mL：(3.11±0.85)比(1.09±0.21)比(1.46±0.26)，pg/mL：( 91.38±13.27)比(59.39±9.39)比(70.47±11.34)，ng/mL：( 4.49±0.81)比(1.85±0.32)比(2.52±0.45 )，F值分别为15.68、11.38、16.58，P值均<0.001]。si-NC＋高糖组培养基中MDA、8-OHdG的含量明显高于si-NC＋低糖组和si-LncRNA ANRIL＋高糖组，差异均有统计学意义[nmol/L：(9.17±1.52)比(3.28±0.74)比(4.67±0.93)，ng/mL：( 2.74±0.42)比(0.91±0.16)比(1.45±0.29 )，F值分别为18.39、16.58，P值均<0.001]。结论LncRNA ANRIL靶向miR-122-5p并促进高糖诱导足细胞发生炎症及氧化应激反应。

简介：【目的】探讨上调microRNA-145-5p（miR-145-5p）基因表达对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的肾小球系膜细胞凋亡及细胞外基质分泌的影响。【方法】大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1随机分为空白组、LPS组和LPS＋miR-145-5pmimics组（miR-145-5p组）,miR-145-5pmimics转染参照脂质体LipofectamineTM2000说明,刺激24h后,MTT及流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率;Westernblotting检测纤维连结蛋白（fibronectin,FN）、转化生长因子-β1（transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcelllymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2associatedXprotein,Bax）的蛋白表达。【结果】转染miR-145-5pmimics后的HBZY-1细胞miR-145-5p表达明显高于空白组（P〈0.05）。与空白组比较,LPS组细胞活力及FN、TGF-β1和Bcl-2的蛋白表达显著升高,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达显著降低（P〈0.05）。与LPS组比较,miR-145-5p组细胞活力及FN、TGF-β1和Bcl-2的蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达显著升高（P〈0.05）。【结论】上调miR-145-5p基因表达可抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞活力,通过下调FN和TGF-β1表达抑制细胞外基质分泌,通过下调Bcl-2和上调Bax表达诱导细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨miR-125a-5p靶向调控清道夫受体B1(Scarb1)基因对缺氧/复氧大鼠心肌细胞损伤的影响及作用机制。方法将体外培养的H9c2大鼠心肌细胞随机分为空白对照组、缺氧/复氧组、转染对照组和miR-125a-5p转染组。检测各组miR-125a-5p的表达量、心肌细胞的活力、凋亡率、ATP含量以及Scarb1、Cyt C、Bax、Bcl-2及NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况。利用Targetscan软件预测miR-125a-5p的靶基因，用双荧光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和Scarb1的靶向关系。结果与空白对照组相比，缺氧/复氧组心肌细胞miR-125a-5p、Bax、Cyt C的表达和凋亡率明显升高(P<0.05)，细胞活力、Scarb1、Bcl-2的表达及ATP含量明显降低(P<0.05)。与转染对照组相比，miR-125a-5p转染组的情况与上述变化相反。双荧光素酶报告基因实验证实Scarb1为miR-125a-5p的靶基因。缺氧/复氧能够促进心肌细胞中NF-κB p65、c-Myc和Cyclin D1蛋白的表达，而下调miR-125a-5p的表达则能够抑制上述蛋白的表达。结论缺氧/复氧能够诱导心肌细胞中miR-125a-5p的表达，抑制miR-125a-5p则能够通过上调Scarb1的表达对缺氧/复氧心肌细胞起保护作用，其机制可能与抑制NF-κB信号通路的活化有关。

简介：摘要目的本研究旨在探讨LncRNA HCG18调控miR-185-5p/AGER轴对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）内质网应激和自噬的影响。方法收集DN患者肾脏组织，建立高糖（high glucose，HG）诱导的足细胞损伤模型。检测DN患者肾组织与DN细胞模型中HCG18的表达。确定HCG18在细胞中的定位表达。证实HCG18与miR-185-5p、miR-185-5p与晚期糖基化终产物特异性受体（advanced glycosylation end-product specific receptor,AGER）的调控关系。qRT-PCR和western blot检测内质网应激相关因子（CHOP、XBP1）及自噬相关因子（Beclin-1、p62）的表达。结果相对于非DN患者，DN患者肾组织中HCG18高表达（P<0.05）。相对于正常糖（normal glucose，NG）组，HG模型中内质网应激相关因子（CHOP、XBP1）的mRNA和蛋白表达增加而自噬相关因子Beclin-1的mRNA和蛋白表达被抑制，p62的mRNA和蛋白表达增强（均P<0.05）。HCG18通过调控miR-185-5p/AGER轴发挥生物学作用。敲低HCG18能减轻内质网应激，激活自噬并减少足细胞损伤，该作用被miR-185-5p抑制剂部分逆转。结论HCG18调控miR-185-5p/AGER信号轴并通过调控内质网应激和自噬促进DN的发生。

简介：摘要胰腺导管腺癌(PDAC)是较为致命的癌症之一，总体5年存活率不到5%。该病通常诊断为晚期，治疗手段有限。随着分子生物学的发展，肿瘤的靶向治疗针对性强，精准度高，效果显著。因此，挖掘理想的靶点是PDAC靶向治疗的关键，有助于进一步提高对本病的诊断和治疗水平。与其他肿瘤相比，PDAC促纤维结缔组织增生的改变更为明显，对传统治疗表现出明显的耐药性，并具有高度免疫抑制的肿瘤微环境。本研究讨论了在PDAC中成纤维细胞活化蛋白(FAP)与miR-30a-5p的一些新发现，即FAP、miR-30a-5p对PDAC主要生物学功能的影响及两者之间的相互关系，并指出未来研究的发展方向，为PDAC的靶向治疗提供新的思路。