简介:目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。
简介:摘要目的探讨尿白蛋白、免疫球蛋白G及β2微球蛋白检测对老年糖尿病患者的临床意义。方法以2015年1月至2017年1月接受治疗的89例老年糖尿病患者作为研究对象,并标为观察组,选取同期进行健康检查的89例老年人作为对照组,分别对两组成员的尿白蛋白、免疫球蛋白G及β2微球蛋白进行检测,并对两组人员的检测结果以及阳性检出率进行比较。结果对照组人员的尿白蛋白、免疫球蛋白G及β2微球蛋白的含量要明显低于观察组患者的对应含量,同时,对照组人员的以上检测指标的阳性检出率也要明显低于观察组患者,两组患者进行比较的数据之间存在明显差异,具有统计学意义(P<0.05)。结论在对老年糖尿病患者进行诊断时,可以将尿白蛋白、免疫球蛋白G及β2微球蛋白含量作为早期诊断的参考表准,值得在临床检查中推广使用。
简介:摘要目的探讨血清β2-微球蛋白(Sβ2-MG)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)联合超敏C反应蛋白(hs-CRP)检测在早期2型糖尿病(T2DM)肾病辅助诊断中的临床应用价值。方法回归分析T2DM无肾病患者66例(NDN组)、早期T2DM肾病患者69例(早期DN组)和体检健康者70例(正常组),采集清晨空腹静脉血进行Sβ2-MG、hs-CRP和肌酐(SCrea)以及晨尿Uβ2-MG检测的结果。结果NDN组Sβ2-MG和hs-CRP检测水平高于正常组(P<0.05),SCrea、UREA和Uβ2-MG高于正常组(P>0.05),早期DN组Sβ2-MG、hs-CRP、UREA和Uβ2-MG检测水平均显著高于正常组和NDN组(P<0.01),SCrea检测水平高于正常组和NDN组(P>0.05)。各组联合检测的阳性检出率高于单项的阳性检出率(P<0.05),早期DN组阳性检出率显著高于NDM组(P<0.01)。结论血尿β2-微球蛋白和hs-CRP水平在早期T2DM肾病中均升高,其水平变化有助于早期T2DM肾功能损伤辅助诊断和病情监测,联合检测可提高其阳性检出率,为临床医生提供有价值的治疗依据。
简介:目的构建arhgap39基因真核过表达载体并初步研究arhgap39蛋白表达的相关问题。方法提取小鼠海马组织总RNA,逆转录合成cDNA,根据GeneBank中基因信息设计引物,高保真PCR扩增arhgap39基因的编码区,随后将其转移到真核载体上,转染NG-108细胞并观察其在细胞内的表达情况。结果经酶切和测序鉴定表明成功构建arhgap39基因的相关真核过表达载体;将其转染NG-108细胞,免疫印迹试验证实arhgap39成功过表达,arhgap39的分子量约为140kD。结论我们的实验结果确认了arhgap39蛋白的分子量,并对其可能存在的存在形式做了验证性研究,可以为进一步的研究提供理论基础和研究工具。
简介:以海参为原料,研究海参蛋白肽的抗氧化性以及对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护效果和作用机制。以清除羟自由基(·OH)能力、Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力为指标,评价海参蛋白肽的体外抗氧化活性。以H2O2刺激RAW264.7巨噬细胞建立氧化损伤细胞模型,采用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞活性氧(ROS)水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,实时荧光定量PCR测定细胞血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA表达水平。结果表明,海参蛋白肽能够清除·OH,具有Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力,海参蛋白肽的这种体外抗氧化能力呈现浓度依赖效应。海参蛋白肽显著降低氧化损伤RAW264.7巨噬细胞ROS水平和提高氧化损伤细胞活力(P〈0.05)。而且,海参蛋白肽显著提高巨噬细胞内HO-1mRNA表达(P〈0.05),HO-1抑制剂锌原卟啉IX(ZnPPIX)部分逆转海参蛋白肽对氧化损伤巨噬细胞活力的促进作用。这些结果说明,海参蛋白肽通过上调RAW264.7巨噬细胞HO-1mRNA表达水平,发挥对巨噬细胞氧化损伤的保护作用。
简介:摘要目的探讨凋亡抑制蛋白(Survivin)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在胃癌组织中与的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测60例胃癌组织及15例正常胃黏膜组织中MMP-2、Survivin蛋白的表达情况。结果胃癌组织中MMP-2、Survivin的阳性率分别为43.33%、76.67%,均高于正常胃黏膜(P<0.01)。Survivin、MMP-2的表达与胃癌的临床分期、浸润深度、淋巴结转移具相关性(P<0.05),而与胃癌的病理分化程度、性别、年龄均无相关性(P>0.05)。结论MMP-2、Survivin与胃癌的发生及恶性演变密切相关。
简介:摘要目的探讨分析新生儿转运系统在危重新生儿转运中的应用。方法选取我院2014年11月至2016年去11月通过新生儿转运系统对新生儿科130例危重新生儿进行转运,回顾分析新生儿的临床资料,探讨新生儿转运系统的组织管理,装备保证,定期培训,转运前期的病情稳定措施与新生儿转运的关系。结果在对所稳重新生儿进行转运时,需要按照其疾病顺序进行转运,首先就是重度窒息患者,缺氧缺血性脑病患者,早产且体重较低患者,肺透明膜病患者,胎粪吸入综合征患者以及重症肺炎患者,对比传统的双向被动转运模式,新生儿转运系统具有较高的转运成功率,可以有效降低患者死亡情况,差异显著,P<0.05,具有统计学应用。结论在对危重新生儿转运期间使用新生儿转运系统,可以有效处理转运之前治疗医院,途中以及新生儿重症监护室三个阶段,有效提升新生儿转运成功率,降低患者死亡情况。
简介:摘要目的探讨高血压和糖尿病患者尿微量白蛋白和尿β2微球蛋白检测结果。方法A组为2016年1月-2017年1月本院收治的高血压患者45例。B组为同期收治的糖尿病患者45例。C组为同期到本院体检的健康人45名。三组均分别检测尿微量白蛋白和尿β2微球蛋白,分析水平变化。结果C组尿微量白蛋白、尿β2微球蛋白阳性率均低于A组、B组(P<0.05);A组、B组病程>10年组尿微量白蛋白和尿β2微球蛋白均高于5-10年组、<5年组(P<0.05)。结论相较于健康人,高血压、糖尿病患者尿微量白蛋白和尿β2微球蛋白水平明显提升,且与病程呈正相关。而联合检测能有效诊断高血压、糖尿病所致早期肾功能损伤,需高度关注。