简介：目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。

简介：摘要目的探讨核转运蛋白α-2(KPNA2)在肝细胞癌中的表达与预后意义及其在肿瘤免疫中的重要作用。方法分别从多平台数据库中下载肝细胞癌数据，通过R语言进行数据整理和筛选，用Wilcoxon-test进行表达差异分析，Kruskal-test和Cox回归模型进行临床差异与预后分析，最后用ssGSEA和Cibersot算法进行免疫细胞浸润与免疫功能相关研究。结果KPNA2在11个肝细胞癌样本组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)，其高表达与肝细胞癌患者不良预后及肿瘤分期等密切相关[风险比(HR)>1，P<0.05)。KPNA2还可影响肝细胞癌中的抗原提呈与白细胞介素反应等免疫功能(P<0.01)，并与包括B细胞，CD4+T细胞等在内的10种免疫细胞的浸润水平明显相关(P<0.05)。结论KPNA2可促进肝细胞癌发生发展，并能作为肝细胞癌的独立预后因子，同时其通过调节免疫细胞浸润可影响肿瘤微环境。

简介：摘要目的研究新生大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)发生、发展中核转运蛋白KPNA2定位及表达的动态变化，探究其在早产儿BPD发病机制中的作用。方法采用85%的吸入氧浓度诱导新生SD大鼠BPD模型(n＝50)，对照组吸入空气(n＝50)，两组分别于1、3、7、10、14 d采集肺组织标本，分离、纯化及培养肺泡Ⅱ型上皮细胞。利用免疫组化、免疫荧光、Western blot及实时荧光定量PCR检测KPNA2的分布及表达。结果免疫组化可见KPNA2主要定位于肺泡上皮细胞的胞浆及胞核内，与对照组相比，BPD组1 d胞核、胞浆均表达增加，3～14 d胞核表达明显减弱，胞浆表达增强。细胞免疫荧光可见KPNA2在对照组1～14 d主要定位于细胞核，BPD组3～14 d主要定位于细胞浆，BPD组KPNA2核表达较对照组减弱，胞浆表达较对照组增强。KPNA2总蛋白及浆蛋白表达趋势基本一致，与对照组比较，BPD组1 d开始升高(P<0.05)，3 d达高峰(P<0.05)，7 d开始逐渐下降(P<0.01)，14 d仍高于对照组(P<0.05)；BPD组KPNA2核蛋白表达3 d开始降低(P<0.01)，持续降低至14 d(P<0.05)。与对照组相比，BPD组KPNA2 mRNA表达1 d开始升高(P<0.05)，3 d达高峰(P<0.05)，7 d开始逐渐下降(P<0.01)，至14 d仍高于对照组(P<0.05)。结论暴露于高氧中新生鼠KPNA2核转运功能障碍，可能是影响BPD肺泡上皮细胞DNA损伤应答早期启动的重要机制。

简介：摘要目的研究新生大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)发生、发展中核转运蛋白KPNA2定位及表达的动态变化，探究其在早产儿BPD发病机制中的作用。方法采用85%的吸入氧浓度诱导新生SD大鼠BPD模型(n＝50)，对照组吸入空气(n＝50)，两组分别于1、3、7、10、14 d采集肺组织标本，分离、纯化及培养肺泡Ⅱ型上皮细胞。利用免疫组化、免疫荧光、Western blot及实时荧光定量PCR检测KPNA2的分布及表达。结果免疫组化可见KPNA2主要定位于肺泡上皮细胞的胞浆及胞核内，与对照组相比，BPD组1 d胞核、胞浆均表达增加，3～14 d胞核表达明显减弱，胞浆表达增强。细胞免疫荧光可见KPNA2在对照组1～14 d主要定位于细胞核，BPD组3～14 d主要定位于细胞浆，BPD组KPNA2核表达较对照组减弱，胞浆表达较对照组增强。KPNA2总蛋白及浆蛋白表达趋势基本一致，与对照组比较，BPD组1 d开始升高(P<0.05)，3 d达高峰(P<0.05)，7 d开始逐渐下降(P<0.01)，14 d仍高于对照组(P<0.05)；BPD组KPNA2核蛋白表达3 d开始降低(P<0.01)，持续降低至14 d(P<0.05)。与对照组相比，BPD组KPNA2 mRNA表达1 d开始升高(P<0.05)，3 d达高峰(P<0.05)，7 d开始逐渐下降(P<0.01)，至14 d仍高于对照组(P<0.05)。结论暴露于高氧中新生鼠KPNA2核转运功能障碍，可能是影响BPD肺泡上皮细胞DNA损伤应答早期启动的重要机制。

简介：

简介：摘要目的探究肝细胞核因子1α(HNF1α)通过葡萄糖转运蛋白(GLUT)调控肾脏葡萄糖重吸收的机制。方法构建小鼠HNF1α表达载体，将重组质粒转染人胚肾HEK293T细胞和人肾小管上皮细胞HK2中过表达HNF1α，将HNF1α siRNA和GLUT2 siRNA转染入HEK293T细胞，采用流式细胞仪检测荧光葡萄糖类似物2-NBDG被细胞吸收的情况。采用Western印迹法检测HNF1α基因沉默后对GLUT2表达的影响。通过实时定量PCR检测HNF1α下游靶基因如GLUT2、钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)、胰岛素诱导基因1(INSIG1)等的mRNA水平，通过共聚焦免疫荧光检测GLUT2在肾上皮细胞的定位情况，使用荧光素酶报告基因和Western印迹法检测HNF1α对GLUT2的转录激活能力。通过凝胶迁移实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验检测HNF1α与GLUT2的结合作用。结果过表达HNF1α摄取2-NBDG的细胞比例明显高于对照组(P<0.01)，HNF1α和GLUT2基因沉默后细胞对2-NBDG吸收作用减弱，HNF1α基因沉默后GLUT2表达减少。与对照组相比，过表达HNF1α使得肾脏包括GLUT2在内的有关糖转运基因表达水平上升(P<0.01)。过表达HNF1α显著增加GLUT2转录活性，干涉HNF1α可下调GLUT2转录活性。此外，HNF1α可与GLUT2的启动子直接结合。结论HNF1α通过直接结合GLUT2促进其表达，进而调节肾源细胞对葡萄糖重吸收作用。

简介：与许多在细胞浆内复制的RNA病毒不同，流感病毒的复制及转录都在细胞核内进行。流感病毒感染细胞进入细胞浆后，经病毒脱壳将病毒核糖核蛋白体复合物（vRNP）释放到细胞浆。vRNP含有病毒的RNA基因和碱性聚合酶1（PB1）、碱性聚合酶2（PB2）、酸性聚合酶（PA）及核蛋白（NP）。vRNP被主动运送到细胞核内，开始病毒基因组的复制和转录。流感病毒感染细胞的晚期，在细胞浆中新合成的PB1、PB2、PA及NP蛋白也需要进入细胞核，参与新的vRNP的装配。我们简要介绍有关流感病毒vRNP和新合成的PB1、PB2、PA及NP蛋白进入细胞核的机制。

简介：2型糖尿病的发生率在全球范围内呈逐年增高趋势,已成为威胁人们健康和生命的非传染性疾病。埃格列净(Ertugliflozin,Steglatro^■)是钠一葡萄糖共转运蛋白2抑制剂,由美国辉瑞公司和德国默克公司合作研发,于2018年3月被美国FDA批准用于改善2型糖尿病成年患者的血糖控制,可单药治疗或与其他降血糖药物联合使用。对埃格列净的基本信息、药理学、用药注意事项和临床试验等进行介绍。

简介：目的探讨人骨形成蛋白-2（BMP-2）全长基因的克隆，及其真核表达重组子构建方法。方法采用Trizol法从人髁状突骨组织中提取制备总RNA，利用逆转录技术转录出BMP-2cDNA，以其为模版，PCR扩增出BMP-2全长基因，与真核表达载体pcDNA3．1（＋）连接．构建真核表达重组子pcDNA3．1（＋）／BMP-2．经酶切和序列分析鉴定重组子的构建情况。结果PCR扩增产物在1200000处有扩增条带．与目的基因大小相符．重组质粒经限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切后。得到5400000和1200000的BMP-2条带，BMP-2基因已成功克隆且成功与pcDNA3．1（＋）连接。结论成功克隆出人BMP-2基因，并构建其真核表达重组子pcDNA3．1／BMP-2，为进一步研究BMP-2的功能、BMP-2基因在骨髓间充质细胞（hMSCs）中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础．

简介：摘要真核细胞的纤毛和鞭毛，包括原纤毛和运动纤毛，几乎分布在所有细胞的表面，是很保守的细胞结构。装配和维护这种广泛的细胞结构纤毛需要一种重要的转运蛋白，-细胞纤毛内转运蛋白(Intraflagellartransport,ift)。细胞纤毛内转运蛋白具有正向转运和逆向转运功能。最近研究发现，如果细胞纤毛内转

简介：口服药物在肠道中的吸收是决定药物生物利用度的重要因素。肠道中有许多介导药物转运的蛋白，在药物的吸收、分布和相互作用方面起关键的作用。本文通过介绍一些常见的肠道膜转运蛋白及其转运机制，提出利用转运蛋白的特性和转运蛋白底物之间的相互作用，提高药物的生物利用度。并对中药成分中的一些转运蛋白底物及中药-西药之间的相互作用进行了阐述。

简介：摘要糖尿病在全球范围内，尤其是发展中国家，其发病率呈现逐年增加的趋势。利用诸如格列本脲等传统药物进行治疗后，患者容易出现体质量增加以及血糖偏低等情况，依从性也相对较差。同时随着治疗的持续性进行，胰岛β细胞功能可能呈现进行性下降，从而导致药物降糖效果的降低。钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂可通过对肾脏葡萄糖重吸收的抑制作用，促使葡萄糖经由尿液正常排出的进行，进而降低患者的血糖水平。钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂也对血压以及体质量的降低具有一定功效，其造成低血糖的情况较为罕见，泌尿生殖道感染是其应用后可能出现的主要不良反应类型。作为一类降糖机制以非胰岛素依赖型为特点的药物类型，钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂不失为2型糖尿病治疗的新途径之一。

简介：目的：研究在Caco-2细胞模型中不同转运蛋白对瑞香素吸收的影响。方法：采用Caco-2细胞单层模型研究转运蛋白对瑞香素的吸收影响。采用HPLC法检测药物浓度,计算其表观渗透系数,考察不同转运蛋白抑制剂对瑞香素吸收的影响。结果：在10μg/ml的瑞香素溶液中加入P-gp抑制剂维拉帕米50μmol后,瑞香素PBA/PAB均无显著性差异（P〉0.05）;加入MRP2抑制剂环孢素10μmol后,PBA/PAB降低了10%;加入BCRP抑制剂潘生丁25μmol后,PBA/PAB降低了29%。结论：在瑞香素的跨膜转运的过程中不存在肠道转运蛋白P-gp的作用,但可能存在MRP2、BCRP的外排。

简介：本研究获取主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类分子的轻链部分,即β2-微球蛋白（β2m）以制备MHCⅠ类分子-肽四聚体.根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法从人白细胞中克隆β2m的基因,并构建β2m的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达.结果显示：构建的编码成熟β2m的pET-β2m可在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达β2m,表达量占菌体总蛋白的32%,β2m以包涵体的形式表达,经洗涤、变性后,以SephacrylS-200HR（S-200）柱层析纯化,纯度可达95%以上,纯化产物采用稀释法复性.Westernblot分析表明,该蛋白具有与抗人天然β2m抗体反应的特性.结论：获得了高效表达人β2m的大肠杆菌工程菌株,建立了简便有效的β2m包涵体纯化、复性方法,为制备MHCⅠ类分子-肽四聚体奠定了基础.

简介：Na^＋偶联单羧酸转运蛋白（sodium—coupledmonocarboxylatetransporter，SMCTs）包括两种亚型：SMCTI和SMCT2。两者的底物特异性相似，但SMCTl对底物的亲和力比SMCT2高。在机体中，SMCT1和SMCT2表达于肠道、肾脏和视网膜并通过协同作用促进相应组织对单羧酸的转运，以维持机体的生理功能。本文从生物学特征、底物与抑制剂、组织分布与生理功能及其在药物转运中的作用等方面对SMCT1和SMCT2进行综述。

简介：摘要血管衰老是心脑血管疾病的早期病理生理表现，与心、脑、肾及外周血管疾病等慢性病的发生发展密切相关。钠－葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂是一种新型的降糖药，具有明确的心血管和肾脏保护作用。本文通过总结SGLT2抑制剂在血管衰老中的作用及相关机制，进一步了解SGLT2抑制剂对血管衰老的保护作用，以期为将来研究血管衰老及血管衰老相关疾病的干预提供新的思路。

简介：无

简介：摘要目前世界糖尿病患病率迅速升高。钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂（SGLT-2i）是具有独特作用机制的新型降糖药物，通过促进尿糖排泄使2型糖尿病患者排出过多的葡萄糖而发挥降糖作用。2012年，全球第一个钠-葡萄糖共转运蛋白抑制剂（SGLT-2i）在欧洲上市，截至目前在我国上市的SGLT-2i主要有达格列净、卡格列净和恩格列净。本文将对钠—葡萄糖共同转运蛋白-2抑制剂进行简要介绍。

简介：摘要目的观察不同透析龄的腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）患者腹膜组织中腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells，HPMCs）及血管内皮细胞表达钠-葡萄糖协同转运蛋白（Na+-dependent glucose transporter，SGLT）的差异，以及研究高糖处理对原代HPMCs内SGLT1、SGLT2蛋白表达的影响。方法根据透析龄将PD患者分为4组：0年组、>0~2年组、>2~4年组和>4年组。采用HE及Masson染色观察PD患者腹膜组织形态学变化，免疫组化检测腹膜HPMCs及血管内皮细胞SGLT1、SGLT2的表达。从腹透液中提取并培养原代HPMCs，高糖、高渗培养液处理HPMCs 0 h、12 h、24 h、48 h、72 h及96 h，采用Western印迹法检测HPMCs的SGLT1、SGLT2蛋白含量，采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。结果HE及Masson染色显示，0年组PD患者壁层腹膜光滑连续，可见一层扁平HPMCs；>0~2年组PD患者HPMCs较0年组减少；>2~4年组PD患者HPMCs体积增大，数量减少；>4年组PD患者腹膜明显增厚、纤维化明显，HPMCs几乎不可见。免疫组化显示，随着透析龄增加，HPMCs内SGLT1、SGLT2蛋白表达逐渐下降（P<0.05）；腹膜上血管壁增厚，但不同透析龄患者腹膜血管内皮细胞SGLT1、SGLT2表达差异无统计学意义（P>0.05）。用60 mmol/L葡萄糖处理原代HPMCs，可以先上调（0 h、12 h、24 h），后下调（24 h、48 h、72 h、96 h）SGLT1的表达（P=0.029）；高糖处理对原代HPMCs中SGLT2的表达无明显影响。结论高糖和透析龄的增加可导致HPMCs数量减少，活力下降，SGLT1、SGLT2表达下降，但对腹膜血管内皮细胞SGLT1、SGLT2的表达无明显影响。

简介：近年来备受关注的口服降糖药物——钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT-2）抑制剂在第54届欧洲糖尿病研究学会年会期间公布了最新临床研究数据。本文为大家介绍一下目前国内上市的三大SGLT-2抑制剂相关研究。