简介：摘要本文通过荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR，分别对191例临床粪便样本进行GⅠ、GⅡ型诺如病毒的快速检测，优化反应条件，筛选出最优反应体系，对两种方法的特异性、灵敏性进行检测分析。发现两种方法均可较好的检测出GⅠ、GⅡ型诺如病毒。其中常规RT-PCR阳性样本数为142，检出率为74.34%，最低检出限为103copies/μl，标准曲线均呈现出良好的线性关系，扩增效率分别为101.336%、103.558%；荧光定量RT-PCR的阳性样本为163，检出率为85.34%，最低检出限为102copies/μl，批内、批间重复试验的标准差范围为0.10～0.59，变异系数范围为0.43%～2.84%，重复性良好。两种方法检出率有显著差异（P＜0.05），且对星状病毒、腺病毒以及肠道病毒等均无交叉反应，GⅠ、GⅡ型诺如病毒之间也无交叉反应。荧光定量RT-PCR在灵敏度方面占优，建议在临床检测中应用。

简介：摘要目的评价美国ABIPrism®7000荧光定量PCR仪的性能及应用价值。方法按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的评价标准，对120份标本(HBV-DNA)进行定量检测，评价该仪器的准确性、精密度、线性范围、参考范围等指标。结果准确度相对偏倚为0.3%-7.2%；批内不精密度变异系数（CV）为6.36%，批间不精密度变异系数（CV）为7.15%；线性范围1.0E+3IU／ml-1.0E+7IU／ml；参考范围＜1.0E+3IU／ml。结论ABIPrism®7000荧光定量PCR仪各项性能指标良好，验证通过。ABIPrism®7000荧光定量PCR仪在病毒基因检测具有高效快捷定量的特点，具有很高的临床价值。

简介：摘要目的自制临床基因扩增实验室HBVDNA检测的室内质控品并对其应用进行评价。方法将试剂盒自带的弱阳性对照品、自制未灭活质控血清、自制灭活质控血清作为室内质控品的选择对象，每天与样本一起检测，连续30天，通过不精密度、L-J质控图，t检验，单因素方差分析来评价三者哪一个更适合基层医院PCR实验室作为室内质控品。结果弱阳性对照品检测结果日间不精密度为7.72%,未灭活自制质控血清检测结果日间不精密度为2.92%,灭活自制质控血清检测结果日间不精密度为3.70%；灭活与未灭活自制质控血清配对t检验,t=-0.860，P=0.397，P＞0.05，两组检测结果无显著性差异；对灭活前后两组数据进行单因素方差分析，F=0.901，P=0.346，P＞0.05，两组检测结果均值无显著性差异；SPSS17.0统计学软件绘制弱阳性对照品、未灭活自制血清质控品L-J质控图11月份30天的变化情况。结论自制质控血清无需灭活及其他特殊处理，完全能够满足PCR实验室室内质量控制的需要。

简介：摘要目的探讨荧光定量PCR方法检测Epstein-BarrVirusDNA(EBV-DNA)在儿童临床EB病毒感染诊断中的价值。方法对480例表现为不明原因发热、咽炎、肝脾肿大等患儿采用实时荧光定量PCR方法检测血浆EBV-DNA。结果检测出238例患儿血浆EBV-DNA阳性，阳性率49.6％，其中男性132例，女性106例，其中阳性结果拷贝数主要集中在4～5次方之间，占44.9%；其次1～4次方32.7%。临床表现以发热、淋巴结肿大、肝脾肿大居多，分别占66.8%、54.6%、65.1%。结论荧光定量PCR方法检测对儿童EB病毒（EBV）感染的检测具有早期、快速等优点，具有广泛的应用价值。

简介：为建立鸭瘟病毒（DPV）快速、敏感的检测方法,本研究利用PCR技术扩增出DPVUL30基因中510bp的保守序列,并克隆到pMD18-T载体中作为标准品制作标准曲线,建立了DPV的SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达5×101拷贝,与鸭细小病毒、鸭圆环病毒、小鹅瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭H9亚型流感病毒和鸭副粘病毒均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床DPV的检测。

简介：

简介：[摘要] 目的 对实时荧光PCR检测HLA-B27基因进行方法学验证，同时分析强直性脊柱炎（AS）组与对照组之间人类白细胞相关抗原B27（HLA-B27）、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、抗链球菌溶血素O（ASO）、类风湿因子（RF）及免疫五项等指标检测水平的差异，从而探讨HLA-B27基因在强直性脊柱炎预防、诊断中的临床应用价值。方法 对人类HLA-B27基因检测试剂盒的分析特异性、阳性符合率、最低检出限、检测精密度、提取试剂效率测定、抗干扰能力和对比实验符合率进行性能评价。同时分析2016年10月~2021年4月在普宁市人民医院收治的可疑强直性脊柱炎患者，将符合纳入标准的患者分为强直性脊柱炎组375例和对照组421例，分析两组患者的HLA-B27阳性率和ESR、CRP、ASO及RF和免疫五项检测水平。结果 实时荧光PCR检测HLA-B27基因特异性：100%；阳性符合率：100%；最低检出限：500copies/ml；低浓度标本检测精密度的变异系数：1.05%；提取试剂效率符合要求；一定浓度干扰物对检测结果没有影响；对比实验符合率：100%。AS组HLA-B27阳性率：85.07%；ESR检测结果为(34.04±28.09)mm/h、IgA为(3.28±1.405)g/L、IgG为(14.646±4.10)g/L均高于对照组，差异有统计学意义( P＜0.05)。结论 荧光PCR法检测人类HLA-B27基因结果稳定、准确、可靠，满足试剂盒说明书要求，可用于临床上对人类 HLA-B27基因的检测。HLA-B27以及ESR、IgA、IgG检测能够有效提高强直性脊柱炎的阳性率，在强直性脊柱炎的早期筛查、早期诊断具有临床应用价值。

简介：摘要目的评估实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测无创样本沙眼衣原体的性能。方法以罗氏Cobas® 4800CT/NG作为参照试剂，收集广西壮族自治区皮肤病研究所性病门诊就诊的男性患者尿液样本(248份)及女性患者阴道拭子样本(224份)，评估SAT法检测沙眼衣原体的临床性能。结果最终有470份样本纳入统计。罗氏PCR检出阳性60例(12.8%)，男性阳性数33例，女性27例；SAT检出沙眼衣原体阳性41例(8.7%)，男性阳性数19例，女性22例。SAT试剂应用男性尿液检测的灵敏度为57.58%，特异性为99.06%；女性阴道拭子检测的灵敏度为81.48%，特异性100.00%。结论SAT试剂可以应用于无创样本，但是其应用尿液检测沙眼衣原体上还需要对尿液的核酸提取方法进一步的优化，提高其检测的灵敏性。

简介：摘要我们日常生活的环境中存在着较多的微生物群落，通过对其研究可以实现对有害病菌的控制，保证环境质量，降低其对人体的威胁。本文主要对荧光定量PCR技术在环境微生物检测中的应用进行了分析和阐述，以供参考。

简介：目的探讨荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血产前诊断中的应用价值。方法采用Gap-PCR、PCR+导流杂交和荧光PCR熔解曲线技术检测143例产前标本的地中海贫血基因,结果不一致时采用DNA测序确认。结果143例产前标本中检出重症地贫27例,包括20例重型α-地贫和7例重型β-地贫。荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血基因产前诊断中符合率100%。PCR+导流杂交技术检测α-和β-地中海贫血基因与其他2种方法各有1例结果不符,经DNA测序分析是由于PCR+导流杂交技术灵敏度高,因存在低比例的母体细胞污染所致。结论荧光PCR熔解曲线技术是一种高效、快速、准确的地中海贫血基因检测新技术,可用于地中海贫血产前诊断。地中海贫血产前诊断最好采用2种不同技术原理的方法独立检测,保证结果的准确可靠。STR技术检测母体细胞污染的低灵敏度需要警惕。

简介：摘要：目的 分析小儿尿液巨细胞病毒检测运用荧光定量PCR技术（FQ-PCR）的价值。方法 30例样本取自2019年3月至2020年3月间我院收治的确诊或高度疑似发生巨细胞病毒（CMV）感染的儿童群体，所有患儿均接受FQ-PCR和ELISA法检验，为形成对照，抽选10例非巨细胞病毒感染儿童完成相关检验，评价并比较血清抗体与病毒DNA的平行性与敏感性。结果 30例疑似或确诊患者中，共有20例DNA与IgM呈阳性，阳性符合率为76.92%（20/26），DNA与IgM检出率分别为86.00%、73.33%，两种方法检出率符合统计学意义（P＜0.05）。结论 相较于ELISA法检验，荧光定量PCR技术在小儿尿液巨细胞病毒检测侧重CMV病毒DNA检测，诊断效果与特异度更高，可减少人为干预产生的误差，值得应用与推广。

简介：摘要：目的 分析小儿尿液巨细胞病毒检测运用荧光定量PCR技术（FQ-PCR）的价值。方法 30例样本取自2019年3月至2020年3月间我院收治的确诊或高度疑似发生巨细胞病毒（CMV）感染的儿童群体，所有患儿均接受FQ-PCR和ELISA法检验，为形成对照，抽选10例非巨细胞病毒感染儿童完成相关检验，评价并比较血清抗体与病毒DNA的平行性与敏感性。结果 30例疑似或确诊患者中，共有20例DNA与IgM呈阳性，阳性符合率为76.92%（20/26），DNA与IgM检出率分别为86.00%、73.33%，两种方法检出率符合统计学意义（P＜0.05）。结论 相较于ELISA法检验，荧光定量PCR技术在小儿尿液巨细胞病毒检测侧重CMV病毒DNA检测，诊断效果与特异度更高，可减少人为干预产生的误差，值得应用与推广。

简介：摘要目的建立可检测杜贝病毒（dugbe virus，DUGV）、盖勒尤卜病毒（qalyub virus，QALV）和蒂亚福拉病毒（thiafora virus，TFAV）等三种内罗病毒基因组的实时荧光RT-PCR检测方法。方法收集、整理，比对、分析在公共数据库发布的三种病毒基因组S节段核苷酸序列，确定检测靶标，利用生物信息软件设计特异性引物、探针，优化检测程序，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法，利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒靶标RNA，检测限分别为160 copies/μL，20 copies/μL和10 copies/μL，检测科萨努尔森林病病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增，三种内罗病毒相互间无交叉反应，重复性分析显示变异系数均在2%以内。结论本研究建立的检测DUGV、QALV和TFAV的实时荧光RT-PCR方法，可用于相关临床样本、媒介、宿主动物标本以及进出口物品筛查检测。

简介：摘要目的研究实时PCR探针熔解曲线技术在检查耐多药结核的临床应用方法，并与传统的结核菌培养及药敏试验作对比分析，从而得出其应用价值评价。方法回顾性分析我科2012年1月至2016年4月收治的50例耐多药结核病人的药敏检查结果。51例病人均做了实时PCR探针熔解曲线技术的药敏试验，其中11例病人还同时作了传统的结核菌培养及药敏试验。以结核菌培养及药敏试验作为金标准，并对两种检查方法作对比分析，得出其应用价值评价。结果耐INH、RFP、EMB、SM、OFX共12例，耐INH、RFP共21例，耐INH、RFP、EMB共15例、单耐INH者2例，单耐RFP者1例。11例作两种检测方法的药敏结果符合率为97.22%。结论实时PCR探针熔解曲线技术可快速、灵敏、特异检测结核耐药。

简介：摘要目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-PCR）、联合检测丙型肝炎病毒的临床意义。方法用ELISA方法联合FQ-PCR检测156例临床已确诊为丙型肝炎患者的血清，同时检测它们的丙氨酸氨基转移酶（AAT）。结果①抗-HCV阳性率随着HCV-RNA含量的升高而增高，其阳性率与HCV-RNA含量呈正相关。②119例HCV-RNA阳性标本中，有78例ALT异常，其异常率随着HCV-RNA含量的升高而增高，ALT异常率与HCV-RNA含量呈正相关，ALT水平和HCV-RNA含量之间呈正相关。③ELISA法检测敏感性为80.1%（125/156），漏检率为19.9%（31/156）。FQ-PCR检测敏感性为76.3%(119/156)，漏检率为23.7%（37/156）。两种方法联合检测敏感性为94.9%(148/156)，漏检率为5.1%（8/156）。结论两种方法联合检测，大大提高了丙型肝炎病毒的检出率，为临床早期，准确诊断丙型病毒肝炎、监测病情、观察疗效提供了有力的依据，为献血人员筛选和临床输血的血制品安全提供了有力保障。

简介：摘要目的分析乙肝病毒DNA（HBV-DNA）的荧光定量PCR（FQ-PCR）检测对临床诊断的意义方法对我院2015年3月到2016年3月收治的420名乙肝患者作为研究对象，抽取420名患者的临床血清标本通过ELISA法进行定性检测，根据乙肝两对半定性结果进行分组，最后采用荧光定量PCR技术进行定量检查。结果95份乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb标本中有89份HBV-DNA为阳性，阳性率为93.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.19±1.16）×107/ml；130份乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAb、HBcAb标本有92份HBV-DNA阳性，阳性率达到71.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.73±2.49）×105/ml；38份乙肝病毒标志物HBsAg、HBcAb标本中有13份HBV-DNA为阳性，阳性率为34.2%，荧光定量PCR拷贝数为（2.13±1.37）×104/ml；75份乙肝病毒标志物HBsAb的标本HBV-DNA阳性23例，阳性率为3.1%，荧光定量PCR拷贝数为（6.07±0.86）×103；82份乙肝病毒标志物全阴性的标本HBV-DNA阳性11例，阳性率为1.3%，荧光定量PCR拷贝数（2.77±0.79）×104/ml.结论荧光定量PCR测定HBVDNA在多种模式的乙肝病毒标志阳性血清或阴性血清都可查出，能较真实反映体内HBV感染、复制和病毒载量情况，具有一定的临床早期诊断的价值。

简介：输血是感染丙型肝炎的主要传播途径。我国在九十年代开始对献血员进行抗一HCVELISA法检测，较好地控制了输血后丙型肝炎的传染。但因“窗口期”、病毒变异、免疫静默感染等原因，血清学方法筛查丙型肝炎抗体仍存在一定的漏检，因而可能会造成少数患者输血后感染HCV。为了解我市献血员中（抗-HCV阴性）隐匿性HCV感染状况，笔者采用FQ—PCR方法对2000例抗-HCV阴性献血员血液进行FQ—PCR检测，现报告如下。

简介：目的应用实时荧光定量PCR技术对健康人粪便内乳酸杆菌进行定量分析,建立乳酸杆菌的实时荧光定量PCR检测方法。方法依据乳酸杆菌16SrDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16SrDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并和用传统方法所获得的结果进行比较。结果结果显示荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌之间无统计学差异（P〉0.05）。结论荧光定量PCR技术比传统方法特异性高、敏感性强,临床上可用此方法对患者肠道乳酸杆菌进行定量分析。

简介：摘要目的探讨荧光定量PCR检测麻风杆菌DNA的拷贝数与涂片抗酸染色镜检阳性程度的相关性。方法对5例现症麻风患者不同时期和16例多菌型治愈者的44份皮肤组织液样本，同时进行荧光定量PCR检测和做涂片抗酸染色镜检,按荧光定量PCR检测麻风杆菌DNA结果的拷贝数和对应涂片抗酸染色镜检结果分为阴性(-)、1+、2+、3+、4+、5+、6+进行统计分析。结果32份皮肤组织液涂片阴性样本中,4份样本荧光定量PCR检测阳性,麻风杆菌DNA拷贝数多为103数量级;12份涂片阳性样本中,对应荧光定量PCR检测全部阳性,麻风杆菌DNA拷贝数多为104～105数量级,和涂片阳性程度基本呈正相关，荧光PCR检测阳性率比涂片抗酸染色高，但经统计学分析差异无显著性，（P>0.05）。结论荧光定量PCR检测麻风杆菌DNA拷贝数与涂片抗酸染色镜检阳性程度有较好的相关性,可以作为麻风病临床诊断和治疗的实验方法。

简介：实时荧光定量PCR是目前基因表达量差异分析的首选方法之一。虽然其操作简单,但如何保证其定量结果的可信度一直是个难题,特别是针对只有20多个碱基的miRNA的定量分析。本研究以水稻miR408在不同组织中的表达差异为实例,系统地优化和阐述了有关荧光定量的新标准及要求。结果表明,引物的浓度对于荧光定量PCR体系的优化至关重要。