简介:摘要抗逆转录病毒治疗(ART)能有效控制HIV感染,但仍无法完全清除人体内的HIV。鉴于CC趋化因子受体5(CCR5)在HIV感染靶细胞中的作用,可将基因编辑技术运用于修饰CCR5基因,包括锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)、成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/Cas9系统等,从而实现艾滋病的"功能性治愈"。此外,修饰CCR5基因的基因编辑技术与干细胞移植的结合为艾滋病的治愈提供了新的思路。
简介:摘要目的探讨SOX17基因rs1072737、rs9298506和rs10958409位点多态性与安徽地区人群散发颅内动脉瘤(IA)的相关性。方法选择自2017年1月至2020年12月安徽理工大学第一附属医院收治的162例散发IA患者(病例组)及182例同期住院患者或健康体检者(对照组)进入研究。分析并比较2组成员SOX17基因rs1072737、rs10958409和rs9298506位点基因型及等位基因频率,明确不同基因型及等位基因对IA的影响;同时进一步按性别、动脉瘤破裂情况将2组成员进行分层,明确细分人群中IA的危险因素或保护因素。结果2组成员rs10958409基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果提示rs1072737位点的GG+GT基因型(OR=0.913,95%CI:0.845~0.990,P=0.031)及等位基因G(OR=0.805,95%CI:0.718~0.932,P=0.029)是IA的独立保护因素,rs9298506位点GG+AG基因型(OR=1.043,95%CI:1.008~1.084,P=0.011)及等位基因G(OR=1.003,95%CI:1.001~1.007,P=0.023)是IA的独立危险因素。按性别分层后,rs1072737位点GG+GT基因型及G等位基因仍然是男性及女性IA的独立危险因素(P<0.05),rs9298506位点GG+AG基因型及G等位基因仍然是男性及女性IA的独立保护因素(P<0.05)。按动脉瘤破裂情况分层后结果显示,破裂组和未破裂组IA患者rs1072737位点与rs9298506位点基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论安徽地区人群中SOX17基因rs1072737位点GG+GT基因型人群(等位基因G携带者)IA发病风险相对降低,rs9298506位点GG+AG基因型人群(等位基因G携带者)IA发病风险相对升高;rs1072737位点、rs9298506位点多态性与IA破裂与否无相关性。
简介:摘要目的分析遗传性易栓症(IT)患儿的临床表现、遗传学特点及诊治情况。方法回顾性研究。纳入2016年10月至2021年8月首都医科大学附属北京儿童医院呼吸一科收治的IT患儿进行研究,并随访。结果符合IT诊断标准的患儿5例,其中男3例,女2例;确诊年龄为7岁~13岁6个月。5例患儿中,2例先天性蛋白C缺陷症,先天性蛋白S缺陷症、抗活化蛋白C抵抗、先天性纤维蛋白原异常血症各1例。5例患儿均有肺栓塞,2例有下肢深静脉血栓,1例有心脏血栓和动脉栓塞。易栓症实验室检测1例蛋白C水平明显减低,1例蛋白S水平明显减低;2例患儿急性期抗磷脂抗体阳性,但3~6个月后复查为阴性。遗传学分析2例为PROC基因变异,1例PROSI基因变异,1例F5基因变异,1例FGA基因变异。患儿均行长期抗凝治疗,其中4例行华法林治疗,1例行利伐沙班治疗。随访时间3个月~5年,随访中,1例患儿自行停用抗凝药物1个月后在感染诱因下出现血栓复发。结论IT患儿的临床表现与成人一样,主要表现为静脉血栓栓塞(VTE);易栓症实验室检测存在局限性,基因分析具有重要意义。IT患儿需长期抗凝治疗,以减少VTE复发。
简介:摘要目的通过对已验证的hsa-miR-204-5p靶基因的提取和功能富集分析,为进一步探究其生物学功能及调控机制提供数据支持和理论指导。方法应用mirTarBase和TarBase数据库提取已被验证过的hsa-miR-204-5p靶基因,取其交集,将集合基因分别进行GO富集分析和Pathway富集分析。结果miR-204-5p在多物种间具有较高保守性。在MirTarBase和TarBase数据库中分别得到398个和600个靶基因,重叠获得85个共有靶基因,其中同时被qPCR、Westernblot、Reporterassay进行过检测的靶基因为15个。GO分析得到13个基因的生物进程信息、12个基因的细胞组分信息、12个基因的分子功能信息。Pathway分析显示靶基因富集于线粒体通路。结论hsa-miR-204-5p的靶基因主要富集于凋亡相关进程及通路,与多种肿瘤生物学进程密切相关。
简介:摘要目的探讨自噬相关基因5(Atg5)在小鼠下腔静脉移植术后静脉桥血管狭窄过程中的作用。方法30只雄性C57BL/6小鼠及20只Atg5+/-小鼠分为WT假手术组(10只),WT手术组(受体10只,供体10只),Atg5+/-手术组(受体10只,供体10只)。复制小鼠下腔静脉移植模型。HE染色观察下腔静脉管腔面积,Real-time PCR检测下腔静脉组织中Atg5、LC3 mRNA表达;Westem-Blot检测下腔静脉组织中Atg5、LC3蛋白表达,免疫荧光共染明确平滑肌细胞中LC3表达。结果WT小鼠下腔静脉移植4周后出现管腔狭窄[(4.21±0.32)×104 μm2比(1.63±0.15)×104 μum2,P<0.05],Atg5[(0.51±0.17)×10-3比(1.49±0.08)×10-3]、LC3[(1.9±0.4)×10-2比(3.8±0.9)×10-2] mRNA表达均明显升高(均为P<0.05)。与WT小鼠相比,Atg5+/-小鼠下腔静脉移植4周后Atg5[(0.39±0.05)比(0.16±0.08)]、LC3[(2.17±0.46)比(0.78±0.19)]蛋白表达均明显下降(均为P<0.05),平滑肌细胞中LC3蛋白表达显著下降(P<0.05),管腔狭窄明显减轻[(1.63±0.15)×104 μm2比(2.96±0.12)×104 μm2,P<0.05]。结论Atg5下调抑制小鼠下腔静脉移植术后静脉桥血管狭窄。
简介:目的:探讨1例发热诱导的心电图Brugada波患者的临床特征并分析其与热敏感相关的SCN5A基因位点的变异情况。方法:分析1例50岁汉族男性发热诱导的Brugada波患者的临床表现,并采用PCR-直接测序法对与热敏感相关的SCN5A基因位点进行变异检测。结果:心电图示Brugada波改变,其抬高的ST段随体温控制逐渐回复。在基因变异研究中,未发现该患者的SCN5A基因存在与发热诱导的Brugada综合征有关的L325R(T→974G)、R535X(C→1603T)、H681P(A→2042C)和F1344S(T→4031C)4个突变。结论:该患者Brugada波的热敏感现象并非由SCN5A基因的4个变异位点引起,发热与Brugada波的关系复杂,有待深入研究。
简介:摘要目的研究晚期胃癌中miR-524-5p与性别决定区Y框蛋白9(SOX9)表达的相关性及其对化疗疗效和预后的影响。方法选择2015年1月至2017年12月在中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院诊断为晚期胃癌并接受DCF(多西他赛+顺铂+氟尿嘧啶)方案化疗的82例患者作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测胃癌组织中miR-524-5p、SOX9的表达水平,分析miR-524-5p与SOX9表达的相关性,比较不同miR-524-5p、SOX9表达水平患者化疗总有效率,分析miR-524-5p联合SOX9对化疗疗效的预测价值,分析患者的总生存期(OS)及无进展生存期(PFS)。结果miR-524-5p、SOX9的表达与晚期胃癌患者的性别、年龄无关(均P>0.05),与晚期胃癌患者的分化程度(χ2=3.577,P=0.001;χ2=5.654,P<0.001)、远处转移(χ2=2.466,P=0.016;χ2=5.218,P<0.001)有关。晚期胃癌中miR-524-5p与SOX9的表达呈负相关(r=-0.348,P=0.001)。根据胃癌组织miR-524-5p、SOX9表达中位数分为高表达与低表达患者,miR-524-5p≥0.64为高表达(n=41),<0.64为低表达(n=41);SOX9≥1.84为高表达(n=41),<1.84为低表达(n=41)。miR-524-5p高表达晚期胃癌患者的总有效率58.54%(24/41)高于miR-524-5p低表达患者的24.39%(10/41),差异有统计学意义(χ2=9.484,P=0.002);SOX9高表达晚期胃癌患者的总有效率21.95%(9/41),低于SOX9低表达患者的60.98%(25/41),差异有统计学意义(χ2=12.863,P<0.001)。受试者工作特征曲线分析显示,miR-524-5p和SOX9的表达对化疗疗效具有预测价值,曲线下面积分别为0.753(95%CI为0.644~0.861,P<0.001)和0.660(95%CI为0.540~0.780,P=0.014)。miR-524-5p联合SOX9对化疗疗效具有预测价值,曲线下面积为0.768(95%CI为0.667~0.868,P<0.001)。miR-524-5p高表达晚期胃癌患者的中位PFS为8个月,中位OS为14个月,均长于miR-524-5p低表达患者(6个月、9个月),差异均有统计学意义(χ2=21.160,P<0.001;χ2=29.730,P<0.001);SOX9高表达晚期胃癌患者的中位PFS为7个月,中位OS为10个月,均短于SOX9低表达患者(8个月、12个月),差异均有统计学意义(χ2=6.345,P=0.012;χ2=4.107,P=0.043)。结论晚期胃癌组织中miR-524-5p与SOX9的表达呈负相关,miR-524-5p高表达、SOX9低表达的患者化疗疗效及预后均优于miR-524-5p低表达、SOX9高表达的患者。
简介:摘要患儿 男,12岁,因“四肢关节活动受限”于2020年7月就诊于郑州大学附属儿童医院神经遗传代谢病专病门诊。主要表现为双腿屈膝,双手指屈曲。双侧肘膝关节、指(趾)间关节伸展、屈曲受限,以伸展受限为主。肌力正常,双下肢肌肉僵硬,双侧跟膝腱反射对称引出。基因检测结果示患儿PIEZO2基因存在杂合缺失c.8181_8183del,p.Glu2727del,父母及其妹妹均为野生型。PIEZO2基因变异所致远端关节挛缩5型临床罕见,为常染色体显性遗传。
简介:摘要目的构建Spink5基因条件性敲除小鼠模型并鉴定其表型。方法采用CRISPR/Cas9技术构建基因型为Mb1cre/+Spink5floxp/floxp的B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠(敲除组),以基因型为Mb1+/+Spink5floxp/floxp的小鼠为对照组。提取小鼠脾脏单个核细胞并经流式细胞荧光技术分选B淋巴细胞及非B淋巴细胞,然后分别进行基因型鉴定及淋巴上皮Kazal型抑制物(LEKTI)蛋白表达的测定。切取小鼠皮肤行HE染色,测量表皮厚度,免疫荧光染色测定小鼠皮肤LEKTI蛋白荧光强度。组间比较采用配对t检验或两独立样本t检验。结果基因型鉴定结果表明,成功构建稳定的B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠模型。Western印迹显示,条件性敲除小鼠B淋巴细胞中LEKTI蛋白相对表达量为0.01 ± 0.02,显著低于非B淋巴细胞(0.66 ± 0.11,t = 9.99,P < 0.001)及对照组小鼠B淋巴细胞(1.08 ± 0.13,t = 13.78,P < 0.001)。39只敲除组小鼠中,4只出现皮肤干燥、散在鳞屑性肥厚型斑丘疹。敲除组皮损部位表皮厚度为(90.42 ± 21.31)μm,显著高于其非皮损部位[(29.71 ± 3.63)μm,t = 5.05,P = 0.002]及对照组表皮[(12.42 ± 2.21)μm,t = 6.74,P < 0.001]。免疫荧光检测显示,敲除组皮损处LEKTI蛋白荧光强度为46.21 ± 1.21,非皮损处为46.62 ± 2.13,与对照组(47.69 ± 1.71)差异均无统计学意义(P > 0.05)。结论成功构建了B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠模型,为进一步探究Netherton综合征皮肤屏障缺陷伴免疫功能异常的机制提供研究基础。
简介:摘要目的探讨增加STR(ShortTandemRepeat,STR)基因座检测对二联体亲子鉴定结果分析的影响。方法利用Chelex-100法提取5个二联体亲子鉴定案例的10份血样。采用美国ABI公司AmpFISTRR?IdentifilerTMplus试剂盒进行多重荧光PCR扩增确定16个位点STR基因型,若出现1个或2个基因座不符合孟德尔遗传规律时,则采用采用GlobalFilerTMExpreesKit系统进行24个STR基因座检测。结果5个不符合孟德尔遗传规律案例中在增加基因座检测后,均出现3个或大于3个矛盾基因座。结论对于出现1个或2个基因座不符合孟德尔遗传规律的二联体亲子鉴定时,可以增加新的常染色体STR基因座检测,进行确切的排除亲生关系,得出正确的鉴定结论。
简介:目的本研究旨在研究神经母细胞瘤Wnt-5a基因的表达,并探讨其与肿瘤的临床分期、病理分型及对化疗的反应等的关系。方法选择2003年至2008年住院治疗的77例神经母细胞瘤病例进行研究,其中恶性神经母细胞瘤病例(43例)和节细胞性神经母细胞瘤病例(19例)为实验组,良性神经节细胞瘤病例(15例)为对照组。采用蛋白质免疫印迹杂交(Westernblotting)方法检测肿瘤组织中Wnt-5a基因的表达。结果与对照组[光密度值(4.79±0.75)×10^5]相比,Wnt~5a基因在实验组中的表达[1、2、3、4和4s期的光密度值分别为(2.87±0.43)×10^5、(2.13±0.35)×10^5、(2.07±0.44)×10^5、(1.73±0.11)×10^5]明显下调(P〈0.01)。在实验组中,Wnt-5a基因在3、4和4S期的表达[光密度值分别为(2.13±0.35)×10^5、(2.07±0.44)×10^5、(1.73±0.11)×10^5]显著低于1、2期[光密度值为(2.87±0.43)×10^5,P〈0.01)];4期病例中,Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达低于节细胞性神经母细胞瘤(P〈0.05)。术前化疗的3、4期病例Wnt-5a基因的表达[光密度值分别为(2.13±0.35)×10^5、(2.07±0.44)×10^5]显著低于良性对照组[光密度值为(4.79±0.75)×10^5,P〈0.01)],也低于未予化疗的1、2期病例[光密度值为(2.87±0.44)×10^5,P〈0.01)]。结论Wnt-5a基因的表达与肿瘤的临床分期和恶性侵袭程度呈负相关。
简介:摘要目的对1例表现为精神发育迟滞、智力低下、语言发育迟缓、癫痫的患儿进行临床表型和遗传学分析。方法对患儿进行外周血常规染色体G显带核型分析。提取患儿及其父母全基因组DNA,应用高通量测序技术对患儿进行测序分析,并对疑似致病变异进行患儿及其父母的Sanger测序验证及生物信息学分析。结果常规染色体G显带核型分析结果患儿核型为46,XX,高通量基因测序结果显示患儿SYNGAP1基因存在c.1861C>T(p.R621X)杂合变异,该变异为无义变异,导致SYNGAP1蛋白翻译提前终止。经Sanger测序验证,患儿父母均未携带此杂合变异。结论SYNGAP1基因c.1861C>T(p.R621X)变异可能是患儿的遗传学病因,基因检测结果为明确诊断及遗传咨询提供了依据。
简介:摘要目的确定1个常染色体显性遗传性迟发性非综合征性耳聋 (non-syndromic hearing loss,NSHL)家系的致病变异。方法收集先证者及其家系成员的临床资料,采集其外周血样,提取基因组DNA,应用核心家系全外显子组测序对先证者及其父母19 396个基因的编码区及侧翼序列进行测序,寻找可能的致病变异。用Sanger测序法验证候选变异并对家系其他成员进行检测。结果发现先证者DFNA5基因第8内含子存在1个单碱基缺失杂合变异(c.1183+1delG p.?),该变异为父源性。结论应用核心家系全外显子组测序确定了1个迟发性NSHL家系的致病变异,为遗传咨询提供了依据。
简介:摘要:概念转变教学是让学生消除迷思概念、建构科学概念的有效教学策略,而5E教学模式是目前国内外科学教育中影响非常广泛的概念转变教学策略之一。本研究采用5E教学模式设计高中生物教学案例,通过概念转变教学对学生迷思概念转变为科学概念的影响,进而提升学生的科学素养和探究能力。
简介:EvolutionaryevidencesuggeststhatSox3,amemberofthehigh-mobility-group(HMG)familyoftranscriptionfactors,isanancestralprecursorofSryandisinvolvedinsexdeterminationsimilartoSry.However,thereislimitedinformationregardingtheSOX3geneoftheblackrockfish(Sebastesschlegeli).Inthisstudy,wefirstisolatedSOX3genefromthegonadsofS.schlegelibyhomologycloning.Thefull-lengthofS.schlegeliSOX3(SsSOX3)cDNAwas1386bp,comprisinga906-bpopenreadingframe,whichencodesapeptideshowing93.6%and93.9%homologywiththeSox3proteinsofEpinepheluscoioidesandOryziaslatipe,respectively.ComparisonofthecDNAsequenceoftheSsSOX3genewiththecorrespondinggenomicDNAfragmentrevealedthattheSsSOX3geneconsistsofasingleexon.PhylogeneticanalysisdemonstratedtheevolutionaryrelationshipofSsSOX3withotherknownSOXB1genesinfishandtetrapods.ThepromoterregioncontainsbindingsitesofseveraltranscriptionalfactorsthatmightparticipateintheregulationofSsSOX3expression.Quantitativereal-timePCRanalysisindicatedthatSsSOX3wasexpressedinalltheinvestigatedlarvaldevelopmentalstagesfrom1to35daysafterbirthandthelevelofexpressiongraduallydecreasedasthedevelopmentproceeded.SsSOX3exhibitedsexuallydimorphicexpressioninadultgonads,withhighexpressionintheovarybutlowexpressioninthetestis.InsituhybridizationrevealedthatSsSOX3wasstronglyexpressedinoocytesandfollicularcellsofovariesbutslightlyexpressedingermcellsoftesticulartissues.Therefore,thisstudysuggeststhatSsSOX3playsanimportantroleinoogenesisandovarydifferentiationinS.schlegeli.
简介:[摘 要] 目的 将小鼠Sox2基因、穿膜肽TAT以及小分子泛素样修饰蛋白SUMO融合并转入大肠杆菌中进行表达,最终获得大量具有高效穿膜活性的Sox2蛋白。 方法 利用PCR技术扩增得SUMO-TAT融合基因,并插入到pET-3c载体。再通过扩增获得小鼠Sox2基因,将其与pET3c-SUMO-TAT基础载体连接,构建得重组表达载体pET3c-SUMO-TAT-Sox2,然后转化到Rosseta(DE3)表达菌中,经IPTG诱导表达,使用Ni-NTA亲和层析进行分离纯化。 结果 成功构建了pET3c-SUMO-TAT-Sox2原核表达载体,经终浓度为1 mmol /L的IPTG诱导4 h后表达约为57kDa的融合蛋白,以包涵体形式存在,Western Blotting检测显示良好特异性,经300 mmol/L咪唑洗脱可获得纯度较高的SUMO-TAT-Sox2融合蛋白。 结论 得到大量带有穿膜肽TAT的融合蛋白Sox2,为今后利用重编程因子融合蛋白诱导体细胞重编程为iPS细胞奠定基础。
简介:摘要1岁3月龄患儿因“咳嗽6 d,精神萎靡伴面色发绀2 h”就诊,诊断为左心室致密化不全、支气管肺炎、心力衰竭。该患儿存在心肌病家族史,有一胞姐3岁时死于扩张型心肌病,母亲有左心室扩大及房间隔缺损,对患儿行全外显子组基因测序发现其存在SCN5A基因杂合错义突变:c.3076C>T(p.R1023C),该突变遗传自母亲,考虑该突变可导致家族性心肌病。该突变首次在家族性心肌病中被报道。