简介：摘要目的通过构建含有不同大小乘客结构域的Ag43表面展示载体，观察其将外源蛋白HPV16L1展示在细菌细胞表面的效率。方法(1)利用基因工程手段将不同长度的Ag43基因序列连接到pET22b载体，获得4种Ag43表面展示载体：Ag43/138、Ag43/551、Ag43/552、Ag43/700；(2)克隆HPV16L1编码基因序列，利用基因工程手段将其分别连接到上述4种Ag43表面展示载体，获得4种重组蛋白表达载体；(3)HPV16L1-Ag43融合蛋白表达及SDS-PAGE分析；(4)利用胰蛋白酶消化验证HPV16L1蛋白在大肠埃希菌的表面展示。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增获得的Ag43和HPV16L1条带与预期大小一致，表面展示载体和重组蛋白表达载体的基因序列均通过基因测序验证无误。经IPTG诱导后，构建的4种Ag43表面展示载体均能表达HPV16L1蛋白。胰蛋白酶消化后，4种重组蛋白条带均减弱，且Ag43/700-HPV16L1条带减弱最明显。结论成功构建了基于自转运蛋白Ag43的细菌表面展示载体，HPV16L1蛋白可通过构建的4种Ag43表面展示载体表达并展示在大肠埃希菌表面，且仅保留α-螺旋和β-桶状结构域部分的Ag43表达载体即Ag43/700的表面展示效果最优。

简介：摘要目的探讨转运RNA来源的小分子片段770（tRF-770）调控细胞骨架相关蛋白2（CKAP2）对乳腺癌细胞增殖的影响。方法使用MINTbase数据库v2.0序列与基因组中成熟的tRNA进行比对，确认tRF-770的染色体定位；TA克隆实验鉴定tRF-770；利用TargetScan和miRBase数据库分析预测tRF-770的靶基因；利用癌症基因组图谱（TCGA）数据库数据分析CKAP2在乳腺癌中的表达情况。选择乳腺癌细胞株MDB-MA-231和MCF7，分别分为空白对照组（不予任何处理）、tRF-770过表达组（转染tRF-770过表达序列）及阴性对照组（转染阴性对照序列）；另外设立tRF-770过表达+CKAP2-HA组（共转染tRF-770过表达序列与CKAP2过表达序列）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞中tRF-770的相对表达量；CCK-8法检测乳腺癌细胞增殖能力并进行挽救实验；双荧光素酶报告基因实验验证tRF-770的靶基因；蛋白印迹法检测CKAP2-ERK2信号通路相关蛋白的表达情况。结果tRF-770与9类tRNA剪切修饰的5'端完全匹配，TA克隆测序验证结果表明产物大小以及碱基与预期tRF-770序列一致。基于TCGA数据库数据分析发现CKAP2在乳腺癌组织中高表达（t=7.21，P<0.05）。qRT-PCR检测结果显示，在MDA-MB-231细胞中，空白对照组、阴性对照组、tRF-770过表达组tRF-770相对表达量分别为1.00±0.00、2.42±0.11、3.75±0.01，差异有统计学意义（F=1 395.00，P<0.001）；在MCF7细胞中，3组tRF-770相对表达量分别为1.00±0.00、2.45±0.21、3.26±0.16，差异有统计学意义（F=169.30，P<0.001）；两种细胞中，与空白对照组及阴性对照组比较，tRF-770过表达组中tRF-770相对表达量均升高（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果表明，tRF-770与CKAP2 mRNA 3'UTR结合。CCK-8法检测结果显示，在MDA-MB-231、MCF7细胞中，第3天和第4天tRF-770过表达组细胞增殖能力均低于空白对照组和阴性对照组（均P<0.05）；第3天和第4天阴性对照组与tRF-770过表达组细胞增殖能力比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）。CCK-8法挽救实验结果显示，在两株乳腺癌细胞中，tRF-770过表达+CKAP2-HA组自转染第2天起，细胞增殖能力均高于tRF-770过表达组（均P<0.05）。蛋白质印迹法检测结果显示，两种乳腺癌细胞中，tRF-770过表达组与阴性对照组比较，CKAP2、p-ERK2、PCNA蛋白表达均下降（均P<0.05）；ERK2蛋白在MDA-MB-231细胞中表达量变化较小，而在MCF7细胞中tRF-770过表达组蛋白表达下降。结论tRF-770可能通过CKAP2-ERK2信号通路抑制乳腺癌细胞增殖。

简介：摘要目的探讨鼠双微体基因2(MDM2)和核受体结合SET结构域蛋白2(NSD2)在乳腺癌组织中的表达及意义。方法收集2014年7月至2020年1月广东医科大学附属医院103例乳腺癌组织和配对癌旁组织，采用免疫组织化学方法检测组织中MDM2蛋白以及NSD2蛋白的表达，结合临床资料行χ2检验相关性分析。结果MDM2蛋白在乳腺癌组织中表达率为69.90%(72/103)，显著高于配对癌旁组织中表达率10.68%(11/103)，两者差异有统计学意义(χ2＝75.083，P<0.01)，MDM2表达水平与乳腺癌的TNM分期、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移明显相关(χ2＝5.501、8.724、4.127、5.415，P<0.05)。NSD2蛋白在乳腺癌组织中表达率为71.85%(74/103)，显著高于配对癌旁组织中表达率11.65%(12/103)，两者差异有统计学意义(χ2＝76.731，P<0.01)，NSD2蛋白表达水平与乳腺癌的淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期明显相关(χ2＝ 7.206、5.793、4.995，P<0.05)，差异具有统计学意义。结论MDM2蛋白以及NSD2蛋白异常高表达可能参与乳腺癌发生发展与转移，检测MDM2以及NSD2有助于判价乳腺癌的恶性程度、判断乳腺癌转移潜能。

简介：摘要报道1例钠-葡萄糖协同转运蛋白-2抑制剂致2型糖尿病患者出现非高血糖型酮症酸中毒（euDKA）的临床资料。患者于2019年7月因血糖控制不佳加用达格列净治疗，2020年6月出现糖尿病酮症酸中毒，经治疗好转后未停用达格列净。2020年8月25日出现euDKA，治疗好转后停服达格列净，随访至2021年3月未再出现酮症酸中毒。

简介：摘要报道1例钠-葡萄糖协同转运蛋白-2抑制剂致2型糖尿病患者出现非高血糖型酮症酸中毒（euDKA）的临床资料。患者于2019年7月因血糖控制不佳加用达格列净治疗，2020年6月出现糖尿病酮症酸中毒，经治疗好转后未停用达格列净。2020年8月25日出现euDKA，治疗好转后停服达格列净，随访至2021年3月未再出现酮症酸中毒。

简介：

简介：摘要寡肽转运蛋白1(PEPT1 )是一种具有转运小分子肽功能的载体蛋白。PEPT1在多种肿瘤中表达，并能靶向转运小肽类物质进入肿瘤细胞。以PEPT1为载体可特异性地将抗肿瘤药物递送至肿瘤细胞，减少药物对正常组织的毒副作用，最大程度地发挥药效。此外PEPT1还可介导小肽类肿瘤放射性示踪剂和肿瘤光动力治疗分子的转运，为肿瘤诊断和光动力治疗提供了新思路。从PEPT1在肿瘤中的表达，PEPT1介导抗肿瘤药物、肿瘤放射性示踪剂和肿瘤光动力治疗分子的靶向递送等几个方面综述了近年来PEPT1在肿瘤靶向治疗研究中的应用进展，并对其应用前景进行展望。

简介：癫痫是神经科仅次于脑血管意外的常见疾病，患病率达到5‰。在新确诊的癫痫患者中，50％以上的患者通过单药治疗，癫痼发作得到有效控制。另外近20％的患者接受2种抗癫痼药物联合治疗后，病情得到改善。大约有30％的患者，经过单药治疗以及多药联合治疗，

简介：摘要目的原核表达GII.4基因型人诺如病毒(human norovirus, HuNoV)次要衣壳蛋白VP2并制备多克隆抗体。方法设计特异性引物扩增GII.4 HuNoV的VP2全基因，酶切连接至原核表达载体pGEX-6P-1，将鉴定正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞。挑取单克隆摇菌，加入IPTG诱导重组GST-VP2融合蛋白的表达，经GST亲和层析纯化和酶切，获得GII.4 HuNoV VP2蛋白。通过SDS-PAGE分析纯化后HuNoV VP2蛋白相对分子质量。将纯化的GII.4 HuNoV VP2蛋白(0.5 mg/ml)免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体。结果GII.4 HuNoV VP2蛋白被成功表达和纯化，相对分子质量(Mr.×103)约29。将GII.4 HuNoV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体滴度高达1∶1 280 000。Western blot与间接ELISA分析显示该多克隆抗体能和GII.4 HuNoV VP2抗原特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GII.4 HuNoV VP2蛋白，并成功制备出高效价GII.4 HuNoV VP2多克隆抗体。

简介：摘要G蛋白信号调节蛋白2是一种对G蛋白偶联受体信号通路具有负性调节功能的生物学分子，在细胞增殖、凋亡、有丝分裂、细胞周期等方面扮演重要的角色。笔者以G蛋白信号调节蛋白2的结构与生物学功能为切入点，就其在肿瘤组织中的表达及其与肿瘤诸多恶性生物学行为的关系展开综述，为今后将G蛋白信号调节蛋白2作为新的诊断标志物或治疗靶点提供新的思路。

简介：为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区（M2e）蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力，利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM—T-1459，获得顺次串联的基因片段3M2e，将其克隆到原核表达载体pMAL—C2x中，经酶切和DNAN序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，SDS—PAGE和Western—blot分析，结果显示，

简介：摘要目的系统评价钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂（SGLT2i）对2型糖尿病（T2DM）患者血清尿酸（SUA）的影响。方法计算机检索美国国立医学图书馆数据库（PubMed）、医学文摘数据库（EMbase）、Cochrane循证医学数据库（Cochrane Library）、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库和维普数据库共7个数据库，时限为2015年1月至2021年4月，筛选SGLT2i治疗T2DM患者的随机对照试验（RCT），提取用药前、后的SUA值。采用RevMan 5.3软件进行Meta分析，采用Stata 14.0软件进行回归分析。结果共纳入51项RCT，共计12 985例T2DM患者。与对照组相比，SGLT2i组SUA值降低［加权均数差（WMD）=-32.70 μmol/L，95%CI -36.80~-28.60 μmol/L，I2=98%，P<0.01］。“药物种类及剂量”亚组分析结果显示，与对照组相比，卡格列净组（WMD=-11.85 μmol/L，95%CI -14.48~-9.23 μmol/L，I2=80%，P<0.01），达格列净组（WMD=-39.45 μmol/L，95%CI -48.21~-30.69 μmol/L，I2=100%，P<0.01），恩格列净组（WMD=-44.48 μmol/L，95%CI -51.47~-37.49 μmol/L，I2=70%，P<0.01）SUA值均降低。“SGLT2i单药及联合用药”亚组分析结果显示，SGLT2i单药组（WMD=-24.70 μmol/L，P<0.01）和联合用药组（WMD=-40.54 μmol/L，P<0.01）的SUA值均降低。回归分析结果显示，联合用药组比单药组SUA值降低更显著（P=0.047）。“用药时长”亚组分析结果显示，SGLT2i治疗<24周（WMD=-28.92 μmol/L，P<0.01），24~48周（WMD=-32.11 μmol/L，P<0.01）及>48周（WMD=-37.73 μmol/L，P<0.01）的SUA值均降低，用药时长与SUA降低水平无相关性（P>0.05）。结论SGLT2i可降低T2DM患者SUA水平；不同类型的SGLT2i降低SUA程度可能存在差异。用药时长及联合其他类型降糖药物治疗均不会削弱SGLT2i降低SUA的作用。

简介：摘要目的探讨钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂（SGLT2i）引起2型糖尿病患者发生尿路或生殖器感染的风险。方法检索美国国立医学图书馆数据库（PubMed）、医学文摘数据库（EMbase）、Web of Science、Clinical trials 和Cochrane循证医学数据库（Cochrane Library），以及中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库、维普数据库、中国生物医学文献库（SinoMed）等从建库到2021年8月31日收录的，涉及SGLT2i类药物且报告了生殖器感染或尿路感染结局的随机对照试验（RCT）。提取纳入文献的标题、试验组与对照组的干预措施、背景用药、结局事件、样本量等信息。对所有现有证据进行多层面的网状Meta分析，尿路感染和生殖器感染相对效应值均表示为OR值及其95%CI。结果最终纳入100篇文献，97篇报告了尿路感染数据，28篇报告了生殖器感染数据。SGLT2i类药物治疗组总样本量为46 697例，纳入文献涉及的SGLT2i类药物具体包括卡格列净、达格列净、贝格列净、荣格列净、埃格列净、恒格列净等，涉及的对照组干预措施包括其他降糖药及安慰剂，总样本量为33 284例，其他降糖药具体包括二肽基肽酶Ⅳ抑制剂（DPP-4i）、胰岛素、磺脲类等。对于尿路感染结局，卡格列净引起尿路感染的风险较达格列净（OR=0.67，95%CI 0.45~0.99）、贝格列净（OR=0.43，95%CI 0.19~0.98）和荣格列净（OR=0.27，95%CI 0.08~0.97）均更低；与安慰剂相比，埃格列净增加尿路感染的风险（OR=1.21，95%CI 1.04~1.40）；与恒格列净、胰岛素相比，贝格列净增加尿路感染的风险，其OR值（95%CI）分别为4.15（1.08~15.95）和12.16（1.27~116.55）；与荣格列净相比，恒格列净降低尿路感染风险（OR=0.15，95%CI 0.03~0.80）；与胰岛素和磺脲类相比，荣格列净可能增加尿路感染的风险，其OR值（95%CI）分别为19.32（1.65~226.07）和5.82（1.11~30.57）。对于生殖器感染结局，与其他降糖药相比，SGLT2i类药物显著增加患者发生生殖器感染的风险（OR=4.18，95%CI 2.33~7.53）；其中，与DPP-4i相比，SGLT2i类药物增加了患者生殖器感染的风险（OR=3.26，95%CI 1.18~9.06），且细分不同SGLT2i药物后，卡格列净与DPP-4i类相比，引起患者生殖器感染的风险差异有统计学意义（OR=3.80，95%CI 1.08~13.39）。结论SGLT2i类药物中，达格列净、埃格列净、贝格列净和荣格列净引起尿路感染的风险较高。SGLT2i类药物与其他降糖药，尤其是与DPP-4i类相比，增加T2DM患者生殖器感染的风险。

简介：摘要目的系统评价钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)治疗心力衰竭(HF)的疗效及安全性(不管是否存在糖尿病)。方法计算机检索Cochrane图书馆、Web of science、PubMed、Embase数据库，检索SGLT2i对比安慰剂治疗HF的随机对照试验，检索时限均为建库起至2020年12月，由两位研究者独立筛选文献并提取资料，采用Cochrane偏倚风险评估工具对纳入文献进行质量评价，使用Review Manager 5.4.1软件进行Meta分析。结果共纳入16项随机对照试验，共计17 617例患者。荟萃分析结果表明：与安慰剂相比，使用SGLT2i显著降低了HF住院(HR＝0.69，95%CI：0.63~0.77)、心血管死亡(HR＝0.86，95%CI：0.78~0.95)、全因死亡(HR＝0.83，95%CI：0.75~0.92)、HF住院或心血管死亡复合风险(HR＝0.74，95%CI：0.69~0.80)；在射血分数保留的HF亚组中，并未观察到明显的益处；此外，使用SGLT2i减少肾脏相关不良反应(RR＝0.84，95%CI：0.72~0.99)及严重不良反应发生率(RR＝0.89，95%CI：0.85~0.93)，但是增加了生殖器感染发生率(RR＝2.48，95%CI：1.56~3.95)。结论现有证据表明，不管是否存在糖尿病，在常规药物的基础上加用SGLT2i，可改善HF患者心肾结局，并且减少了严重不良反应发生率，增加了生殖器感染风险，但对射血分数保留的HF无明显益处。

简介：摘要目的分析钠-葡萄糖转运蛋白-2抑制剂联合胰岛素强化方案对脆性糖尿病患者血糖波动的影响以及安全性。方法回顾性选择2017年5月至2019年5月深圳市龙华区人民医院收治的98例脆性糖尿病患者，按治疗方法分为对照组及观察组，每组各49例。对照组在胰岛素强化基础上联用沙格列汀，观察组在胰岛素强化基础上联用钠-葡萄糖转运蛋白-2抑制剂。随访12周，对比两组患者治疗前后的血糖及其波动情况、胰岛素用量、8-异构前列腺素F2α(8-PGF2α)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、安全性相关指标。结果与对照组比较，观察组治疗后血糖水平标准差[(1.8±0.5)mmol/L vs (6.5±1.4)mmol/L，t＝7.235]、日间最大血糖波动幅度[(6.5±1.1)mmol/L vs (17.3±4.7)mmol/L，t＝13.446]、餐后血糖波动幅度[(1.2±0.4)mmol/L vs (9.2±2.0)mmol/L，t＝8.921]、四分位血糖波动范围[(3.7±1.1)mmol/L vs (12.4±4.2)mmol/L，t＝7.003]、日间血糖[(1.5±0.4)mmol/L vs (4.6±0.8)mmol/L，t＝4.537]均显著降低(P<0.05)，同时观察组的8-PGF2α[(7.8±1.2)ng/L vs (13.6±2.3)ng/L，t＝4.882]、hs-CRP[(5.2±1.3)mg/L vs (8.7±1.3)mg/L，t＝4.406]、胰岛素使用量[(30.9±10.2)U/d vs (42.3±13.4)U/d，t＝5.726]以及体重指数[(18.3±1.2)kg/m2 vs (21.0±2.3)kg/m2，t＝4.135]亦显著降低(P<0.05)；低血糖事件[16.3%(8/49) vs 36.7%(18/49)，χ2＝9.697]及严重低血糖发生率[0 vs 14.3%(7/49)，χ2＝7.268]显著降低(P<0.05)。结论脆性糖尿病患者于胰岛素强化基础上联用钠-葡萄糖转运蛋白-2抑制剂方案治疗，可显著改善血糖、减少血糖波动幅度，同时减少胰岛素的使用量并降低低血糖事件发生率。

简介：摘要目的分析钠-葡萄糖转运蛋白-2抑制剂联合胰岛素强化方案对脆性糖尿病患者血糖波动的影响以及安全性。方法回顾性选择2017年5月至2019年5月深圳市龙华区人民医院收治的98例脆性糖尿病患者，按治疗方法分为对照组及观察组，每组各49例。对照组在胰岛素强化基础上联用沙格列汀，观察组在胰岛素强化基础上联用钠-葡萄糖转运蛋白-2抑制剂。随访12周，对比两组患者治疗前后的血糖及其波动情况、胰岛素用量、8-异构前列腺素F2α(8-PGF2α)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、安全性相关指标。结果与对照组比较，观察组治疗后血糖水平标准差[(1.8±0.5)mmol/L vs (6.5±1.4)mmol/L，t＝7.235]、日间最大血糖波动幅度[(6.5±1.1)mmol/L vs (17.3±4.7)mmol/L，t＝13.446]、餐后血糖波动幅度[(1.2±0.4)mmol/L vs (9.2±2.0)mmol/L，t＝8.921]、四分位血糖波动范围[(3.7±1.1)mmol/L vs (12.4±4.2)mmol/L，t＝7.003]、日间血糖[(1.5±0.4)mmol/L vs (4.6±0.8)mmol/L，t＝4.537]均显著降低(P<0.05)，同时观察组的8-PGF2α[(7.8±1.2)ng/L vs (13.6±2.3)ng/L，t＝4.882]、hs-CRP[(5.2±1.3)mg/L vs (8.7±1.3)mg/L，t＝4.406]、胰岛素使用量[(30.9±10.2)U/d vs (42.3±13.4)U/d，t＝5.726]以及体重指数[(18.3±1.2)kg/m2 vs (21.0±2.3)kg/m2，t＝4.135]亦显著降低(P<0.05)；低血糖事件[16.3%(8/49) vs 36.7%(18/49)，χ2＝9.697]及严重低血糖发生率[0 vs 14.3%(7/49)，χ2＝7.268]显著降低(P<0.05)。结论脆性糖尿病患者于胰岛素强化基础上联用钠-葡萄糖转运蛋白-2抑制剂方案治疗，可显著改善血糖、减少血糖波动幅度，同时减少胰岛素的使用量并降低低血糖事件发生率。

简介：目的克隆并表达人心肌肌钙蛋白I(cTnl)cDNA，为高效获得大量蛋白、制备抗体打下基础。方法采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PcR)和分子生物学技术克隆人cTnI基因，重组构建pcDNA3-cTnI真核表达载体，转染人胚肾(HEK)293细胞，并用单克隆抗体检测特异性cTnI蛋白表达．结果克隆了cTnI的全长基因，构建了pcDNA3-cTnI真核表达载体并成功地在真核细胞中获得了蛋白表达结论所表达的蛋白证明具有正确的cTnI免疫原性，为规模化制备cTnI蛋白奠定了基础。

简介：摘要目的系统评价钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）抑制剂治疗2型糖尿病（T2DM）的心血管事件获益和安全性。方法全面检索有关数据库，收集截至2019年10月发表的SGLT2抑制剂治疗T2DM的随机对照研究，检索结局指标包含心血管事件。采用Rev Man 5.3和STATA 14.0软件进行Meta分析，对二分类变量采用比值比（OR）或相对危险度（RR）作为效应量，各效应量均采用95%可信区间（CI）表示。结果共纳入3项研究34 322例受试者，其中试验组19 064例，对照组15 258例。纳入研究的偏倚风险较低。与对照组比较，SGLT2抑制剂有良好的降糖效果，糖化血红蛋白下降幅度差异有统计学意义［0.44%（0.33%~0.58%）］，P<0.01。在心血管事件方面，SGLT2抑制剂组在复合心血管终点风险［RR（95%CI）为0.89（0.83~0.96）］、心力衰竭住院风险［RR（95%CI）为0.69（0.61~0.79）］、心肌梗死风险［RR（95%CI）为0.89（0.80~0.98）］、全因死亡风险［RR（95%CI）为0.83（0.70~0.99）］方面低于对照组，差异有统计学意义（均P<0.05）。而在心血管死亡风险［RR（95%CI）为0.81（0.63~1.05）］和卒中风险［RR（95%CI）为1.00（0.88~1.13）］方面，差异无统计学意义（均P>0.05）。SGLT2抑制剂可降低肾脏特异性复合终点事件风险，差异有统计学意义（P<0.05）；SGLT2抑制剂组在发生低血糖风险、低血容量症风险、骨折风险、泌尿系感染风险和截肢风险方面，差异无统计学意义（均P>0.05）；而在发生生殖系统感染［RR（95%CI）为4.74（2.76~8.16）］和糖尿病酮症酸中毒方面［RR（95%CI）为2.34（1.26~4.35）］高于安慰剂组，差异有统计学意义（均P<0.05）。结论SGLT2抑制剂对T2DM合并高危心血管风险的患者有良好的心血管、肾脏保护作用，在一定程度上增加了生殖系统感染风险和糖尿病酮症酸中毒风险。

简介：摘要目的探讨高糖、高脂对2型糖尿病(T2DM)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Ras鸟苷酸释放蛋白4(RasGRP4)表达水平的影响。方法纳入2016年8月至2017年2月于天津医科大学朱宪彝纪念医院住院的T2DM患者120例(T2DM组)和年龄、性别相匹配的健康志愿者50例(NC组)，采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测受试者PBMCs中RasGRP4及其变异体mRNA的表达情况。采用双变量相关分析和多元线性回归分析糖尿病病程及主要临床指标与RasGRP4及其变异体mRNA表达水平之间的关系。采用不同浓度葡萄糖(低糖：5.5 mmol/L，高糖：12.5 mmol/L和25 mmol/L)、不同浓度的棕榈酸(低脂：0.2 mmol/L，高脂：0.5 mmol/L)及高糖高脂(25 mmol/L葡萄糖+0.5 mmol/L棕榈酸)分别处理人单核细胞系(THP-1)细胞6、12和24 h，采用RT-qPCR技术检测RasGRP4及其变异体mRNA的水平，采用蛋白质免疫印迹技术(Western blot)检测RasGRP4蛋白表达情况。结果与NC组相比，T2DM组PBMCs中RasGRP4 mRNA及其变异体a、b、c、d、f和g的mRNA水平均升高(t＝4.308、5.432、5.654、5.931、4.018、3.958、5.073，均P<0.05)，而变异体e的mRNA水平下降(t＝-3.821，P<0.05)。双变量相关分析显示T2DM组RasGRP4 mRNA水平与病程、血清甘油三酯(TG)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、糖化血红蛋白A1c(HbA1c)呈正相关(r＝0.973、0.237、0.472、0.245，均P<0.05)；多元线性回归分析显示T2DM病程和HbA1c是主要影响因素。高糖、高脂可促进THP-1细胞表达RasGRP4，且高糖、高脂同时干预对RasGRP4表达的影响具有明显的协同促进作用。结论T2DM患者PBMCs内信号蛋白RasGRP4高表达且出现变异体，慢性高血糖、高血脂可能是激活RasGRP4及其变异体产生的重要因素。

简介：目的：研究苦参碱是否具有诱导RPMI8226细胞凋亡的生物学活性,探讨苦参碱对RPMI8226细胞Bcl-2及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：CCK-8法检测一定浓度的苦参碱对RPMI8226细胞的体外增殖抑制作用;AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;PI单染色法检测细胞周期改变;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,呈量效关系;细胞周期分析,G0/G1期细胞相对增多、S期相对减少、G2/M期无明显变化。苦参碱处理组RPMI8226细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达跟未加药组相比阳性表达率均降低。结论：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导RPMI8226细胞产生细胞周期阻滞和凋亡,降低PCNA的表达。苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达下调对调控细胞凋亡有重要作用。